周珍文
- 作品数：35 被引量：170H指数：9
- 供职机构：广州医科大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金广州市医药卫生科技项目广东省科技计划工业攻关项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 表达霍乱毒素B与幽门螺杆菌中性粒细胞激活蛋白的枯草芽孢抑制小鼠过敏性哮喘的研究
- 董慧黄艳梅姚淑雯梁秉绍李飞黄莲芬钟华敏谢永强周珍文
- 483例儿童扁桃体腺样体肥大分离菌的分布和药敏特征被引量：4
- 2015年
- 目的:分析儿童手术切除的扁桃体腺样体分离菌的分布及药敏特征,为其临床预防和治疗提供指导。方法:将483例扁桃体腺样体进行细菌培养,分析潜在致病菌组成及其药敏特征。结果:扁桃体和腺样体的细菌培养阳性率分别为66.43%和52.88%,主要病原菌及其分离率分别为金黄色葡萄球菌(20.71%)、流感嗜血杆菌(15.11%)、肺炎链球菌(10.97%)、A群链球菌(6.42%),金黄色葡萄球菌对青霉素的耐药率达82%,21%菌株为MRSA,流感嗜血杆菌β-内酰酶检测阳性率为30.92%,复方新诺明和氨苄西林耐药率较高,分别为50.69%和30.14%,肺炎链球菌对青霉素耐药率为32.08%,红霉素、四环素、复方新诺明耐药率高,分别为81.13%、79.25%和69.81%,A群链球菌对青霉素仍然100%敏感,红霉素、克林霉素、四环素的耐药率高,分别为83.87%、77.42%、58.06%。结论:扁桃体和腺样体主要分离菌有金黄色葡萄球菌、流感嗜血杆菌、肺炎链球菌、A群链球菌,不同检出菌的耐药性差异明显,临床可根据常见检出分离菌的分布及药敏特征预防和治疗感染。
- 黄莲芬黄莲芬邓秋连谢永强刘海英邓秋连
- 关键词：扁桃体腺样体分离菌耐药
- 广州地区腹泻患儿肠致病性大肠杆菌的血清型及耐药性被引量：2
- 2018年
- 目的调查广州地区腹泻患儿肠致病性大肠杆菌(EPEC)感染的情况,分析EPEC菌株的血清型及耐药性,为更有效地防治EPEC感染提供重要基础数据。方法回顾性分析2014年7月-2016年12月广州市妇女儿童医疗中心3 013名提供大便培养的腹泻患儿的临床资料,统计EPEC感染的流行特征,并分析EPEC阳性菌株的血清型分布及耐药情况。结果在3 013份急性腹泻患儿提供的大便培养标本中分离到96株无重复的EPEC,分离率为3.19%。以1~2岁和大于5岁年龄组检出率相对较高,年龄组间检出率的差异有统计学意义(P<0.05)。以冬、夏季检出率较高,季节间检出率差异亦有统计学意义(P<0.05)。共分为12个血清型,其中血清型O86K61、O125K70、O44K74、O126K71为优势血清型。EPEC对抗生素耐药率最高为氨苄西林(86.46%),其次为复方新诺明(76.04%)和头孢噻肟(57.29%)。未发现对亚胺培南耐药菌株,其他抗生素均有一定程度的耐药。多重耐药率为61.46%。结论 EPEC是婴幼儿腹泻的重要病原菌,O86K61为最常见血清型,该菌多重耐药严重,应加强监测并根据药物敏感试验合理选择抗生素进行治疗。
- 梁秉绍黄艳梅麦嘉良钟华敏谢永强邓秋连黄莲芬周珍文
- 关键词：腹泻肠致病性大肠杆菌血清型耐药
- 金黄色葡萄球菌肠毒素B基因在大肠杆菌中的克隆及表达被引量：5
- 2016年
- 目的扩增金黄色葡萄球菌肠毒素B(SEB)基因,构建其原核表达载体,并进行诱导、表达,为其应用研究奠定基础。方法根据GenBank中SEB的基因序列,设计一对分别含BamHⅠ、XhoⅠ酶切位点的特异性引物,以金黄色葡萄球菌基因组DNA为模板进行PCR扩增后,经BamHⅠ、XhoⅠ双酶切,并与做相应酶切的pET-28α(+)连接,转化大肠杆菌BL21,提取质粒进行双酶切鉴定及测序,用IPTG诱导表达融合蛋白,SDS-PAGE和Western blot印迹鉴定表达产物。结果成功扩增出SEB基因,基因大小为801bp,重组PET-28α(+)-SEB双酶切鉴定可见目的片段,测序结果显示SEB在正确读框中,序列比对分析显示其与相关报道核苷酸序列一致性达99%。经IPTG诱导后,pET-28α(+)-SEB/BL21在相应的相对分子质量(35×103)可见融合蛋白以包涵体形式表达,免疫印迹在相应分子量检测到目的蛋白。结论克隆了SEB基因,并成功在大肠杆菌BL21中以包涵体形式表达,为肠毒素B应用研究奠定了基础。
- 李飞周帅董慧黄艳梅梁秉绍李娟龙燕王洁琳谢永强杨镒宇周珍文
- 关键词：金黄色葡萄球菌肠毒素B克隆
- 儿童急性下呼吸道感染病原菌分布及耐药性研究被引量：14
- 2009年
- 目的调查儿童急性下呼吸道感染的主要病原菌分布及其对常用抗菌药物的耐药性。方法选取2006年2月至2007年2月临床诊断为肺炎及支气管肺炎的患儿1097例,采用抽吸法采集患儿深度痰标本,立即接种哥伦比亚绵羊血琼脂平板和加万古霉素的马血巧克力平板,置5%CO2培养箱。35℃培养18～24h,进行细菌分离培养,分别采用K-B法和E-Test法对分离的病原菌进行药敏试验。结果共检出细菌432株、白色念珠菌28株,阳性检出率41.2%(52/1097),病原菌依次为流感嗜血杆菌140株(12.8%),肺炎克雷伯菌92株(8.4%),肺炎链球菌79株(7.2%),大肠埃希菌32株(2.9%),鲍曼不动杆菌19株(1.7%),铜绿假单胞菌17株(1.5%),卡他莫拉菌12株(1.1%),金黄色葡萄球菌4株,A组乙型溶血性链球菌3株,其他阴性杆菌24株。流感嗜血杆菌β-内酰胺酶产生率36.4%,流感嗜血杆菌对氨苄西林、四环素、复方新诺明、氯霉素、头孢呋辛、头孢克洛、阿莫西林/克拉维酸的耐药率分别为36.4%,40.7%,70.7%,20.7%,2.7%,12.9%,3.6%,对头孢曲松、氧氟沙星、阿奇霉素的耐药率均为0;肺炎链球菌SP对万古霉素、氧氟沙星和阿莫西林的耐药率为0,对氯霉素、四环素、复方新诺明、头孢呋辛、头孢曲松和亚胺培南耐药率分别为7.0%,86.9%,91.9%,72.7%,3.9%和2.6%,对大环内酯类药物红霉素和林可酰胺类药物克林霉素的耐药率高达100%和93.7%,耐青霉素肺炎链球菌占11.4%。肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌对亚胺培南耐药率为0,对阿米卡星、环丙沙星的耐药性较低;肺炎克雷伯菌对氨苄西林的耐药率高达98.7%,对头孢他啶、头孢曲松、头孢噻肟和头孢吡肟耐药性较高,达38.9%～60.1%。大肠埃希菌对阿莫西林/克拉维酸、头孢他啶和头孢西丁耐药率均小于10%。结论流感嗜血杆菌、肺炎克雷伯菌和肺炎链球菌是儿童社区获得型急性下呼吸道感染的主要病原菌,其耐药性有上升趋势,铜绿�
- 邓秋连邓力周珍文谢永强黄勇黄旭强余嘉璐
- 关键词：下呼吸道感染病原菌耐药性儿童
- 表面表达幽门螺杆菌中性粒细胞激活蛋白枯草芽孢的免疫原性被引量：1
- 2014年
- 目的 构建表面表达幽门螺杆菌中性粒细胞激活蛋白（NAP）的重组枯草芽孢,并鉴定其免疫原性.方法 以构建的pGEX-4T-1-NAP质粒为模板,采用特异性引物扩增幽门螺杆菌NAP基因,与构建的以枯草芽孢外衣蛋白Cotc融合表达的质粒Pus186-Cotc连接,转化枯草杆菌WB600,提取质粒进行酶切、测序鉴定.应用营养耗竭法诱导枯草芽孢生成,提取重组芽孢外衣蛋白进行电泳及免疫印迹分析,并使用NAP特异性抗体免疫荧光检测芽孢表面重组蛋白的表达.以普通芽孢作为对照组,使用表面表达NAP的重组枯草芽孢口服免疫小鼠,ELISA法检测小鼠免疫后0、15、30、45 d的NAP特异性血清IgG水平,判断重组芽孢免疫原性.结果 以pGEX-4T-1-NAP质粒为模板,扩增了NAP基因,并成功克隆入Pus 186-Cotc质粒,重组Pus 186-Cotc-NAP双酶切鉴定可见435 bp目的片段,测序结果显示NAP在正确读框中.营养耗竭法可诱导重组枯草芽孢生成,产量达1×10^11/L,提取芽孢外衣蛋白电泳见相对分子质量25 600的目的条带.免疫印迹显示使用NAP特异性抗体在相应相对分子质量25 600可见识别带.并且使用NAP特异性抗体可检测到重组芽孢免疫荧光,表明NAP在芽孢表面成功表达.与对照组相比,NAP重组芽孢口服免疫小鼠15d后,NAP特异性IgG升高即达高峰,30、45 d后一直维持在高峰平台期（均P＜0.05）,表明重组芽孢具免疫原性.结论 成功构建了表面表达NAP的枯草芽孢工程菌,重组芽孢口服免疫小鼠具免疫原性,为幽门螺杆菌枯草芽孢疫苗的研制提供了依据.
- 周珍文姚淑雯关锐梨周帅谢永强陈吟霜钟华敏黄莲芬杨镒宇龚四堂
- 关键词：中性粒细胞激活蛋白免疫测定
- 枯草杆菌芽孢抵抗胃肠道环境的耐性评估被引量：11
- 2008年
- 目的对益生菌—枯草杆菌芽孢进行耐性评估,为研制口服枯草杆菌芽孢载体疫苗奠定基础。方法采用耗竭法,DSM培养基长时间振荡培养(24h)获得芽孢,使用pH2.0盐酸胃蛋白酶液模拟胃液,胆酸盐、胰液素混合液模拟肠液,对枯草杆菌芽孢进行体外耐受实验。结果在DSM培养基中,80%～90%的枯草杆菌WB600可形成芽孢,每升DSM液所生成芽孢约1×1011。在模拟胃液中1h后,仅0.0024%枯草杆菌WB600繁殖体细菌仍成活,大肠杆菌JM109活力完全丧失,而枯草杆菌芽孢基本不受影响,93.3%仍成活。在模拟小肠环境中3h后,枯草杆菌WB600繁殖体细菌活力显著降低(仅0.0013%存活),枯草杆菌芽孢基本不受影响(92%仍存活),而大肠杆菌JM109有一定量的增殖。结论枯草杆菌芽孢能耐受模拟胃肠道环境,有望成为新型的口服疫苗载体。
- 周珍文胡旭初邓秋连马长玲陈晓湘胡凤玉徐劲余新炳
- 关键词：枯草杆菌芽孢耐性口服疫苗
- 耐甲氧西林金黄色葡萄球菌CHIPS基因的克隆、序列分析及原核表达被引量：3
- 2013年
- 目的对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)趋化抑制蛋白(CHIPS)进行扩增、克隆、序列分析、原核表达及纯化,为后续的疫苗研究奠定基础。方法根据GenBank中趋化抑制蛋白(CHIPS)的序列,设计一对特异性引物,以耐甲氧西林金黄色葡萄球菌DNA为模板PCR扩增CHIPS基因,纯化DNA进行EcoRI、XhoI双酶切鉴定及测序鉴定,并将CHIPS亚克隆入表达载体PET-28α,转化感受态大肠杆菌BL21,对质粒进行双酶切鉴定及基因序列分析,用IPTG诱导表达重组蛋白,His标签单克隆抗体进行免疫印迹验证重组蛋白的表达。结果以金黄色葡萄球菌临床儿童分离株基因组为模板,成功扩增CHIPS基因,基因大小为450bp;重组PET-28a(+)-CHIPS双酶切鉴定可见目的片段,测序结果显示CHIPS在正确读框中,序列比对分析显示其与相关报道核苷酸序列一致性达99.98%。经IPTG诱导后,pET-28a(+)-CHIPS/BL21在相应分子量(17kDa)可见融合蛋白在上清表达,免疫印迹检测到目的蛋白。结论成功从儿童分离株MRSA中构建了CHIPS的原核表达系统,并成功在大肠杆菌BL21中融合表达,为后续的疫苗研究奠定基础。
- 容莉莉杨镒宇关锐梨关小珊邓秋连谢永强周珍文
- 关键词：MRSACHIPS克隆原核表达
- 儿童粪便金黄色葡萄球菌毒素基因的检测及分析被引量：5
- 2021年
- 目的探讨广州地区就诊患儿粪便分离金黄色葡萄球菌毒素基因的分布状况和临床诊断及各分子分型的关系。方法收集2018年8至11月广州市妇女儿童医疗中心3所院区就诊儿童2059份非重复粪便标本所分离的412株金黄色葡萄球菌,采集相关临床信息。提取菌株DNA后用PCR的方法检测相关的毒素基因,其中包括葡萄球菌肠毒素(SE)基因(sea、seb、sec、sed、see)以及杀白细胞毒素基因(pvl),采用多位点序列分型(MLST)的方法对菌株进行分子分型,最后采用χ^(²)检验对数据进行比较。结果从所分离的412株金黄色葡萄球菌中检测到256株(256/412,62.1%)至少含有1种肠毒素基因,携带率较高的依次为sec(125/412,30.3%)、seb(98/412,23.8%)和sea(66/412,16.0%),并且金黄色葡萄球菌pvl基因的携带率为18.7%(77/412)。其中分离自胃肠炎患者粪便的金黄色葡萄球菌sea基因检出率(58/319,18.2%)明显高于非胃肠炎组(8/93,8.6%)(χ^(²)=4.912,P=0.027),而在住院肺炎患者粪便中的金黄色葡萄球菌pvl基因检出率(8/21,38.1%)高于非肺炎组(6/47,12.8%)(χ^(²)=4.252,P=0.039)。并且金黄色葡萄球菌的毒素基因与特定的ST型密切相关,82.4%(28/34)的ST6携带sea基因,所有的ST338和ST59均携带seb基因,96%(48/50)的ST45携带sec基因,ST338的pvl基因携带率高达5/5。结论ST6型金黄色葡萄球菌产生的SEA毒素可能与儿童患者胃肠炎诊断呈密切相关。PVL毒力基因在社区获得性肺炎住院患儿金黄色葡萄球菌中的携带率高于非肺炎组,且与CC59克隆群密切相关。
- 艾晓兰龙燕梁秉绍姚淑雯刘云锋高飞麦嘉良熊志乐梁珠薇王洁琳陈显堂杨敏龚四堂周珍文
- 关键词：细菌毒素类肠毒素类多位点序列分型儿童
- 金黄色葡萄球菌肠毒素A基因的克隆及原核表达被引量：4
- 2012年
- 目的从分离培养的金黄色葡萄球菌中提取肠毒素A(SEA)基因,亚克隆入表达载体pET-28a(+),诱导融合蛋白的表达,为肠毒素A应用研究奠定基础。方法根据GenBank中SEA的序列,设计一对特异性引物,以金黄色葡萄球菌DNA为模板PCR扩增SEA,纯化DNA进行BamHⅠ、XholⅠ双酶切鉴定及测序鉴定,并与做相应酶切的pET-28a(+)连接,转化大肠杆菌BL21,并对质粒进行双酶切鉴定及基因序列分析,用IPTG诱导融合蛋白的表达,His标签单克隆抗体进行免疫印迹验证融合蛋白的表达。结果以金黄色葡萄球菌DNA为模板,成功扩增了SEA基因,基因大小为774bp,重组PET-28a(+)-SEA双酶切鉴定可见目的片段,测序结果显示SEA在正确读框中,序列比对分析显示其与相关报道核苷酸序列一致性达99.9%。经IPTG诱导后,SDS-PAGE可见pET-28a(+)-SEA/BL21在相应分子量(约30000Mr)条带大量表达,免疫印迹能检测到目的蛋白条带,说明其与His标签融合表达。结论克隆了金黄色葡萄球菌SEA基因,并成功在大肠杆菌BL21中融合表达,为肠毒素A应用研究奠定了基础。
- 周帅杨镒宇张妙莲关锐梨邓秋连谢永强容莉莉邓力周珍文
- 关键词：金黄色葡萄球菌肠毒素A克隆
