周志刚
- 作品数：12 被引量：43H指数：4
- 供职机构：华中科技大学同济医学院更多>>
- 发文基金：国家重点基础研究发展计划国家自然科学基金教育部科学技术研究重点项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 线粒体ATP敏感钾通道调控哮喘大鼠气道平滑肌细胞增殖被引量：5
- 2009年
- 本文旨在探讨线粒体ATP敏感钾(mitochondrial ATP-sensitive K+,MitoKATP)通道对哮喘大鼠气道平滑肌细胞(airway smooth muscle cells,ASMCs)增殖的影响及其调控机制。36只Sprague-Dawley(SD)大鼠随机分为哮喘组(n=18)和正常组(n=18),哮喘组大鼠采用卵清蛋白(ovalbumin,OVA)致敏及激发的方法制备哮喘模型,正常组大鼠吸入等量生理盐水。取各组大鼠肺组织,分离出ASMCs进行培养,将样本分6组分别进行干预:(1)正常组;(2)正常+MitoKATP通道开放剂diazoxide组(diazoxide组);(3)正常+MitoKATP通道阻断剂5-HD组(5-HD组);(4)哮喘(asthma)组;(5)asthma+diazoxide组;(6)asthma+5-HD组。利用罗丹明(Rhodamine123,R-123)荧光染色、激光共聚焦显微镜成像检测线粒体膜电位(ΔΨm),DCFH-DA荧光染色法检测细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)含量,RT-PCR检测核因子κB(nuclear factor-κB,NF-κB)mRNA的表达,流式细胞仪检测细胞凋亡和MTT法检测细胞增殖情况。结果显示:(1)Diazoxide组与正常组相比,R-123荧光强度增强,ΔΨm去极化,ROS及NF-κB的表达增高,细胞增殖增多、凋亡减少(P<0.05);而5-HD组与正常组相比,上述指标均无显著差异;(2)与正常组相比,Asthma组R-123荧光强度增强,ΔΨm去极化,ROS及NF-κB的表达增高,细胞增殖增多、凋亡减少(P<0.05);Asthma+diazoxide组与Asthma组相比,R-123荧光强度和ΔΨm去极化增强,ROS及NF-κB表达增高,细胞增殖增多、凋亡减少(P<0.05);Asthma+5-HD组与Asthma组相比,R-123荧光强度和ΔΨm去极化减弱,ROS及NF-κB表达降低,细胞增殖减少、凋亡增多(P<0.05);(3)各组大鼠ASMCs的R-123荧光强度,NF-κB mRNA表达量与ROS含量均呈正相关;MTT的吸光度值与NF-κB mRNA表达量呈正相关,凋亡细胞百分比与NF-κB mRNA表达量呈负相关。以上结果提示,哮喘可引起大鼠ASMCs的MitoKATP通道开放及ΔΨm去极化,ΔΨm去极化促进ROS的表达,ROS可能作为信号分子刺激NF-κB表达增加,进而促进ASMCs增殖,参与
- 赵建平高敏叶永军胡伟华周志刚胡红玲
- 关键词：哮喘线粒体膜电位线粒体ATP敏感钾通道核因子ΚB平滑肌
- 缺氧诱导因子与缺氧性肺动脉高压被引量：9
- 2006年
- 周志刚赵建平
- 关键词：缺氧诱导因子低氧肺动脉高压靶基因
- 低氧条件下大鼠肺动脉平滑肌细胞中活性氧与低氧诱导因子-1α和细胞增殖的关系(英文)被引量：11
- 2007年
- 在低氧条件下,观察大鼠肺动脉平滑肌细胞(pulmonary arterial smooth muscle cells, PASMCs)中活性氧(reactive oxygenspecies, ROS)的变化,探讨 ROS 的变化是否通过调控低氧诱导因子 -1α (hypoxia-inducible factor 1α, HIF-1α)的表达影响 PASMCs的增殖。采用组织块法原代培养大鼠PASMCs,分成3 组:常氧组(21% O2, 24 h),低氧组(5% O2, 24 h),低氧+ Mn-TBAP组(5% O2,24 h,Mn-TBAP 是一种ROS 清除剂)。用激光共聚焦显微镜荧光染色法检测细胞内ROS 的变化;用RT-PCR 和免疫组织化学方法分别测定HIF-1α mRNA 和蛋白的表达;用MTT 法检测细胞增殖程度。结果显示:(1) 低氧组 PASMCs内ROS水平明显高于常氧组(P<0.05),低氧+ Mn-TBAP 组ROS 水平明显低于低氧组(P<0.05),但仍高于常氧组(P<0.05) ;(2)低氧组及低氧+ Mn-TBAP 组的HIF-1α mRNA 和蛋白表达均高于常氧组(P<0.05),且低氧组表达高于低氧+ Mn-TBAP 组(P<0.05) ;(3) 低氧组细胞增殖明显高于常氧组和低氧+ Mn-TBAP 组(P<0.05),低氧+ Mn-TBAP 组细胞增殖高于常氧组(P<0.05)。结果表明:在低氧条件下大鼠PASMCs 中 ROS 水平明显升高,且ROS 的变化能够调节HIF-1α的表达,进而影响平滑肌细胞的增殖,提示ROS 可能在肺动脉高压的发病机制和低氧信号转导中具有重要作用。
- 赵建平周志刚胡红玲郭治汪涛甄国华张珍祥
- 关键词：低氧平滑肌细胞活性氧
- 线粒体ATP敏感钾通道对哮喘大鼠气道平滑肌细胞表型转化的影响被引量：4
- 2009年
- 目的研究线粒体ATP敏感钾通道(mitoKATP)对哮喘气道平滑肌细胞(ASMCs)表型转化的影响。方法腹腔注射和雾化吸入制备哮喘大鼠模型,取哮喘及正常大鼠ASMCs,分为以下6组进行干预:正常对照组;正常+mi-toKATP开放剂diazoxide组;正常+mitoKATP阻断剂5-HD组;哮喘对照组;哮喘+diazoxide组;哮喘+5-HD组。激光共聚焦显微镜检测各组ASMCs R-123荧光强度以反映线粒体膜电位(Δψm),Western blot法检测各组细胞α-肌动蛋白(α-actin)表达量。结果①与正常对照组比较,哮喘对照组R-123荧光强度明显增强,α-actin表达明显下调(均P<0.05)。②diazoxide干预ASMCs 24 h后,正常及哮喘ASMCs R-123荧光强度均明显增强(均P<0.05);正常ASMCsα-actin表达量无明显变化(P>0.05),但哮喘ASMCsα-actin表达量明显增加(P<0.05)。结论diazoxide引起mitoKATP开放,并逆转哮喘ASMCs由收缩型向合成型发生的表型转化。
- 赵建平叶永军高敏胡伟华周志刚
- 关键词：气道平滑肌细胞哮喘线粒体ATP敏感钾通道线粒体膜电位表型转化
- siRNA干扰Mad2蛋白的表达对乳腺癌MCF-7细胞紫杉醇药物敏感性的影响被引量：1
- 2010年
- 目的研究纺锤体检测点蛋白Mad2对乳腺癌细胞MCF-7紫杉醇敏感性的影响。方法运用小片段干扰RNA技术下调MCF-7细胞中Mad2蛋白的表达，经不同浓度的紫杉醇药物浓度处理，通过细胞术检测细胞周期分布，MTY法检测细胞存活率的变化，RT—PCR及Western印迹法检测相关蛋白的表达改变情况。结果siRNA可以特异性干扰MCF-7细胞中Mad2蛋白水平的表达，同时显著降低紫杉醇诱导细胞发生有丝分裂阻滞的比例，导致CyclinB1的表达下调，凋亡率降低；并且Mad2表达下调后，MCF-7细胞中黏附分子E-cadherin的表达量也降低。结论Mad2在紫杉醇诱导MCF-7细胞发生有丝分裂周期阻滞中发挥重要作用，进而影响细胞对紫杉醇的敏感性，同时细胞黏附分子E—cadherin可能参与这一过程的发生。
- 郝星叶双梅周志刚卢运萍王世宣
- 关键词：紫杉醇乳腺癌细胞周期蛋白B1细胞黏附分子
- 携带小鼠HVEM的重组腺相关病毒载体的构建及鉴定被引量：1
- 2010年
- 目的克隆小鼠疱疹病毒侵入介体(HVEM)基因,构建其重组腺相关病毒载体,鉴定目的基因在真核细胞中表达。方法用RT-PCR法从小鼠脾脏淋巴细胞克隆出全长HVEM基因,构建携带HVEM基因的穿梭质粒pAAV-IRES-HVEM-hrGFP和辅助质粒pAAV-RC及pAAV-Helper,利用磷酸钙共沉淀法将穿梭质粒共转染入AAV-293细胞中,采用细胞内质粒DNA同源重组法构建重组腺相关病毒rAAV-HVEM。用氯仿-PEG8000法纯化病毒,实时荧光定量PCR测病毒滴度。RT-PCR检测rAAV-HVEM在中国仓鼠卵巢(CHO)细胞中的表达情况。结果成功构建组装重组小鼠HVEM腺相关病毒,纯化后病毒滴度为5×1010v.g/mL,且在CHO转导细胞中能有效表达目的基因。结论构建的重组腺相关病毒载体rAAV-HVEM为组织工程相关细胞转基因构建及临床应用提供先进的载体系统,为今后进一步研究HVEM的功能及其在部分疾病基因免疫治疗中的应用奠定基础。
- 马衣努尔.买提托合提韩凌斐廖术杰周志刚董红马丁王世宣
- 关键词：腺相关病毒基因治疗
- 腔隙性脑梗死患者妇科手术的围术期处理被引量：1
- 2009年
- 目的研究腔隙性脑梗死患者妇科手术的围术期处理。方法通过回顾性分析同济医院妇产科在2001～2009年对11例隙性脑梗死患者实施妇科手术前、术中、术后的处理,总结治疗效果。结果实施妇科手术的11例合并有腔隙性脑梗死的患者术后未出现并发症,治疗效果较满意。结论对有腔隙性脑梗死实施妇科手术的患者针对其疾病的特点,做好围手术期处理,可有效减少并发症的发生。
- 周志刚马衣努尔.买提托合提董虹王世宣
- 关键词：腔隙性脑梗死妇科手术围手术期
- 合并肾功能不全妇科患者围手术期处理被引量：1
- 2009年
- 目的探讨合并肾功能不全的妇科患者围手术期处理措施。方法回顾性分析1997年1月～2009月4月在华中科技大学同济医学院附属同济医院妇产科进行手术的7例合并肾功能不全的患者的临床资料。结果7例患者中4例给予内科保守治疗,2例分别术前、术后给予血液透析,2例术前行右肾造瘘术,所有患者均安全度过围手术期,血肌酐、尿素氮手术后较术前差别无统计学意义。结论合并肾功能不全并非手术禁忌证,给予合理的处理措施可使患者安全度过围手术期,保护患者肾脏功能,防止肾功能不全继续恶化及相关并发症发生。
- 董虹马衣努尔.买提托合提周志刚李双罗爱月王世宣
- 关键词：妇科手术肾功能不全围手术期
- 人Mad2基因正义真核表达质粒的构建及其对人卵巢癌细胞A2780紫杉醇敏感性的影响被引量：1
- 2010年
- 背景与目的:紫杉醇是一种高效广谱的抗肿瘤药物,已常规应用于卵巢癌的化疗。但近年来随着耐药的发生,紫杉醇耐药已成为影响肿瘤化疗预后的主要难题,有研究显示紫杉醇药效的发挥与纺锤体检测点功能完整性相关。本研究通过构建人纺锤体检测点蛋白Mad2基因正义真核表达质粒,旨在探讨Mad2蛋白对人卵巢癌A2780细胞株紫杉醇敏感性的影响。方法:构建pEGFP-Mad2正义表达质粒,通过脂质体LipofectamineTM 2000将其转入体外培养的人卵巢癌细胞株A2780中,应用RT-PCR、Western blot等方法分析相关基因和蛋白水平的变化情况;通过流式细胞术比较稳筛细胞对紫杉醇敏感性的改变情况。结果:成功构建了pEGFP-Mad2正义表达质粒;并筛选出稳定高表达Mad2的细胞株。RT-PCR、Western blot检测均显示稳定筛出的pEGFP-Mad2/A2780细胞株中Mad2呈高表达。流式细胞术检测结果显示,紫杉醇作用24或48 h后,对照组pEGFP-N1/A2780的细胞凋亡率分别为12.34%和58.76%,而pEGFP-Mad2/A2780组细胞凋亡率则分别为27.32%和87.53%,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:pEGFP-Mad2正义表达质粒能够有效上调A2780细胞中Mad2基因mRNA和蛋白的表达,并增加人卵巢癌细胞A2780对紫杉醇化疗的敏感性。
- 郝星叶双梅周志刚周婷卢运萍王世宣
- 关键词：卵巢癌紫杉醇MAD2基因
- 线粒体ATP敏感钾通道对大鼠肺动脉平滑肌细胞低氧诱导因子-1α表达及细胞增殖的作用被引量：5
- 2007年
- 本文旨在探讨线粒体ATP敏感钾(mitochondrial ATP-sensitive K+,MitoKATP)通道对大鼠肺动脉平滑肌细胞低氧诱导因子-1α(hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α)表达和细胞增殖的影响。原代培养大鼠肺动脉平滑肌细胞,分为常氧对照组、常氧+diazoxide(MitoKATP通道的选择性开放剂)组、常氧+5-hydroxydecanoate(5-HD,MitoKATP通道的选择性阻断剂)组、低氧对照组、低氧+diazoxide组、低氧+5-HD组,共6组,分别应用罗丹明123荧光技术检测各组大鼠肺动脉平滑肌细胞的线粒体膜电位,免疫组化检测HIF-1α的表达及酶联免疫检测仪检测细胞增殖的变化。结果显示,常氧+ diazoxide组与常氧对照组比较,罗丹明123荧光、HIF-1α表达及细胞增殖明显增强(P<0．05);低氧+diazoxide组与低氧对照组比较,罗丹明123荧光、HIF-1α表达及细胞增殖明显增强(P<0.05):常氧+5-HD组与常氧对照组比较,罗丹明123荧光、HIF-1α表达、细胞增殖没有明显变化(P>0．05);但低氧+5-HD组与低氧对照组比较,罗丹明123荧光明显减弱、HIF-1α表达及细胞增殖有所减弱(P<0．05)。结果提示:MitoKATP通道的开放能引起大鼠肺动脉平滑肌细胞线粒体膜去极化,并可以促进HIF-1α的表达及细胞增殖。
- 赵建平郭治周志刚陈俊胡红玲汪涛张珍祥
- 关键词：低氧低氧诱导因子-1Α线粒体膜电位平滑肌
