吴晓燕
- 作品数：45 被引量：54H指数：5
- 供职机构：山东省农业科学院更多>>
- 发文基金：现代农业产业技术体山东省现代农业产业技术体系创新团队建设专项资金系建设专项资金山东省科技发展计划项目山东省农业科学院青年科研基金更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生更多>>
- 人工改造的PCV2 Rep蛋白、重组PCV2病毒及其应用
- 本发明涉及基因工程技术领域，特别涉及一种人工改造的PCV2 Rep蛋白，还涉及重组PCV2病毒及其应用。本发明提供一种人工改造的PCV2 Rep蛋白，缺失了野生型PCV2 Rep蛋白第6‑8位的三个氨基酸SGR，和/或在...
- 李俊张玲玲时建立彭喆吴晓燕王金宝郑书轩辛长勋
- PCV2、PRV、PPV多重PCR检测方法的建立及其应用被引量：3
- 2019年
- 根据GenBank中已发表的猪圆环病毒2型(PCV2)、猪伪狂犬病毒(PRV)、猪细小病毒(PPV)有关基因序列,通过序列比对及参考相关文献,设计了3对特异性引物。通过优化,建立了可同时检测PCV2、PRV及PPV 3种病毒的多重PCR方法。结果表明,该方法能同时检测到PCV2、PRV及PPV的最低核酸量分别为40pg、72pg、46pg。对猪圆环病毒3型(PCV3)、猪细环病毒(TTSuV)、猪流行腹泻病毒(PEDV)、猪蓝耳病毒(PRRSV)、猪瘟病毒(CSFV)无扩增。应用该方法对87份临床样品进行检测,PCV2阳性检出率为28.7%(25/87),PRV野毒检出率为11.5%(10/87),PPV检出率为12.6%(11/87)。其中2种以上病毒混合感染阳性率为13.8%(12/87),3种病毒同时感染的阳性率为2.3%(2/87),其结果也与单一PCR结果一致。研究结果提示,该方法可用于PCV2、PRV、PPV三种病原的单一感染或混合感染的鉴别诊断。
- 辛长勋郑书轩时建立彭喆吴晓燕高梅刘玉伟王硕王金宝李俊
- 关键词：猪伪狂犬病毒猪细小病毒
- 一种二联灭活疫苗及其制备方法
- 本发明提供了一种二联灭活疫苗，含灭活的猪圆环病毒2型Cap蛋白和猪肺炎支原体，所述Cap蛋白编码基因序列如SEQ ID NO.1所示，所述猪肺炎支原体保藏号为：CGMCC No.18879。解决了猪圆环病毒2型和猪肺炎支...
- 李俊吴晓燕时建立彭喆徐绍建王硕李琛刘畅韩红
- 文献传递
- 一种调控PCV2在宿主细胞中复制的方法及应用
- 本发明提供了一种调控PCV2在宿主中复制的方法及应用。通过METTL14基因、FTO基因和miR30a‑5p可以调控PCV2病毒在宿主中的复制。METTL14可引起m6A甲基化水平升高促进PCV2病毒的复制，FTO能够使...
- 李俊时建立彭喆杨莹李琛刘畅徐绍建田瑶李佳昕吴晓燕王硕韩红
- 文献传递
- 猪圆环病毒2型特异性荧光定量PCR检测方法的建立与应用被引量：6
- 2011年
- 研究旨在建立基于SYBR Green I荧光定量PCR检测PCV 2的技术方法。根据GenBank中的猪圆环病毒2型(PCV 2)的基因序列(HQ148879),设计一对特异性引物,利用普通PCR技术扩增出PCV 2的ORF2基因702bp片段,并克隆到pVAX1载体,以纯化的质粒作为PCR检测的标准模板,以10倍梯度稀释质粒为阳性标准品,摸索荧光定量PCR试验,并绘制标准曲线,以此建立一种荧光定量PCR特异性检测猪圆环病毒的方法。结果表明,该方法对PCV 2有很好的特异性,其敏感性比常规PCR高100倍,批间与批内重复试验变异系数均小于2.5%。经临床应用表明荧光定量PCR方法的建立实现了对PCV 2特异性的快速诊断和定量检测。
- 吴晓燕刘涛李俊时建立韩偲刘洋吴家强周顺王金宝
- 关键词：猪圆环病毒2型SYBRI荧光定量PCR特异性
- 猪伪狂犬病病毒山东分离株gE和gD基因的克隆及序列分析被引量：7
- 2017年
- 近年来,我国猪场内很多规模化猪场的伪狂犬病病毒野毒呈阳性,大部分中小规模猪场和小养殖场感染情况更为糟糕,使得伪狂犬病病毒的变异率增加,给该病的防控带来了更大的压力。为了深入了解本病的流行情况及研制新型疫苗用于该病的防治,本研究在流行病学调查的基础上从发生疑似伪狂犬病的2个猪场仔猪组织内各分离到1株PRV野毒株,分别命名为LY株和YSH株。参照已发表的PRV gE和gD基因序列,设计合成2对分别扩其全长的引物,使用高保真酶进行PCR扩增,将扩增得到的全长序列克隆到pEASY-Blunt载体中,并转化Trans1-T1感受态细胞,挑取阳性菌落的质粒进行酶切、测序鉴定,并与国内外其他毒株进行比较分析,构建遗传进化关系图。结果表明,2毒株与国内外其他毒株比较,gE、gD基因核苷酸序列的同源性分别为97.7%~100.0%和99.0%~100.0%;氨基酸序列的同源性分别为95.5%~100.0%和98.9%~100.0%,以gE、gD基因氨基酸序列建立的进化树分析结果显示,近3~5年分离的PRVs形成一个相对独立的新分支。经过同源性及进化分析,可知新分离的2株伪狂犬病病毒株与欧美株的亲缘关系远,与亚洲株内中国株的亲缘关系近,初步判定属于国内流行株,并可能存在一定的抗原变异,这为进一步研究山东省猪群伪狂犬病病毒分子流行病学奠定了基础。
- 张玲玲时建立彭喆徐胜男郑书轩吴晓燕徐绍建王金宝李俊
- 关键词：猪伪狂犬病毒GE基因GD基因
- LAMP-LFD技术在检测猪圆环病毒3型中的应用研究被引量：1
- 2022年
- 为快速了解猪群中猪圆环病毒Ⅲ型(PCV3)的感染状况,本研究将环介导等温扩增技术(LAMP)与侧向流动试纸条(LFD)相结合,建立了快速检测PCV3 LAMP-LFD方法,并对该方法的特异性、灵敏性以及临床初步应用进行了验证分析。试验结果显示:常规PCR能检测到0.2 pg/μL的病毒,而本研究建立的LAMP-LFD能检测到0.2 fg/μL的病毒;引物、杂交探针只与PCV3发生反应,与其他病毒模板不发生反应;相较于常规PCR方法,LAMP-LFD方法时间更短(约1 h),且对仪器要求更低;在临床样品的检测中,常规PCR能检出的阳性样品,同时采用LAMP-LFD方法均能检出,且LAMP-LFD方法的敏感性更高于常规PCR。以上结果表明,本研究建立的PCV3 LAMP-LFD检测方法具有极高的灵敏性和特异性,操作简单反应快捷,且检测结果的可视化效果优于PCR和单一LAMP试验,在实际生产应用中具有更大的应用前景。
- 王妍时建立彭喆吴晓燕王硕孙盼盼徐绍建韩先杰李俊
- 关键词：常规PCR
- 一种能够快速区分猪圆环病毒1型(PCV1)和2型(PCV2)的多重PCR诊断方法和专用试剂盒
- 本发明专利涉及农业技术领域内的诊断技术。通过自行设计特异性引物L1、L2、L3，提取病毒DNA，在此基础上利用PCR方法鉴别检测猪圆环病毒不同血清型，扩增猪圆环病毒II型(PCV2)预计扩增片段大小为404bp，扩增猪圆...
- 李俊王金宝时建立徐绍建彭喆丛晓燕黄保华吴晓燕刘畅
- 文献传递
- 一种Ago2基因敲除的BHK-21细胞系
- 本发明属于分子生物学与细胞生物学领域，提供了一种Ago2基因敲除的BHK‑21细胞系，其保藏编号为CCTCC NO:C2021206。上述Ago2基因敲除的BHK‑21细胞系可用于塞尼卡增殖和塞尼卡疫苗的生产。本发明利用...
- 李琛吴晓燕李俊时建立刘畅彭喆徐绍建韩红王硕马英茹
- 文献传递
- 一种突变型猪圆环病毒2型病毒及应用
- 本发明提供了一种突变型猪圆环病毒2型病毒及应用。所述突变型猪圆环病毒2型病毒，是将PCV2d基因型野生毒株Rep蛋白的第6位由编码丝氨酸（S）的密码子突变为编码天冬酰胺（N）的密码子。本发明还构建了目的基因的双拷贝重组质...
- 李俊辛长勋时建立彭喆吴晓燕徐绍建刘畅韩红王硕孙盼盼王妍
- 文献传递
