劳心珍
- 作品数：3 被引量：7H指数：2
- 供职机构：中国药科大学更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 人心肌肌钙蛋白I化学发光免疫分析方法的建立被引量：3
- 2004年
- 目的 建立检测人心肌肌钙蛋白I(cTnI)化学发光免疫分析方法。方法 用重组cTnI免疫新西兰兔获得抗体 ,经DEAE 2 3层析和 (NH4) 2 SO4沉淀纯化后 ,用碳化二亚胺 (EDC)法标记辣根过氧化物酶 ,SephadexG 2 0 0纯化。优化鲁米诺 H2 O2 肉桂酸发光体系 ,建立了cTnI化学发光免疫分析法。用该法检测 138例正常人及病人血清标本 ,确定正常值参考范围 ,并与ELISA法比较。结果 所得抗体的滴度为 1∶80 0 0。优化后的发光体系为 :鲁米诺 (4 .5mmol/L) ,H2 O2 (7.5mmol/L) ,四苯硼钠 (0 .8mmol/L) ,肉桂酸 (0 .4mmol/L) ,比单独用肉桂酸或四苯硼钠作增强剂灵敏度分别增加了 1.19和 1.0 5倍。本法检测灵敏度为0 .2ng/ml,线性范围为 0 .4～ 5 0ng/ml,批内CV平均 9.0 % ,批间CV平均 11.8% ,回收率为 10 4 .2 %。Hb浓度在 0～ 5 0nmol/L ,T Bil在 0～ 15 μmol/L ,TG在 0～ 2 .0mmol/L对测定结果无影响。与ELISA比较 ,两法结果一致 (P >0 0 5 ) ,相关系数r=0 .985 2(P <0 .0 1)。用BioCheck标准品为校正物 ,确定临床诊断参考范围为 <2 .12ng/ml,诊断符合率为 96 .2 %。结论 建立的cTnI化学发光免疫分析法可常规用于临床检验。
- 吴国球劳心珍孙宏伟黄立新张粉梅钱娟英卢惠霞
- 关键词：化学发光免疫分析法肉桂酸滴度诊断符合率鲁米诺
- 人心肌肌钙蛋白I cDNA的克隆及分泌表达被引量：2
- 2003年
- 克隆人心肌肌钙蛋白I (cTnI)基因全序列 ,并进行分泌表达。从人心肌组织提取总RNA ,经逆转录得到cDNA第一链 ,以此为模板 ,PCR扩增目的条带 ,重新设计上游引物 ,用相同PCR程序完成点突变 ;突变后PCR产物克隆入Pfd5载体 ,并用PCR、SpeI+XhoI双酶切、载体测序等方法鉴定 ;用ITPG诱导cTnI的表达。PCR扩增出 63 0bp左右条带 ,Pfd5 cTnI融合表达载体用PCR、SpeI +XhoI双酶切均可见 63 0bp左右条带 ,测序结果与预期序列一致 ;诱导后培养基及细胞周质均检测到cTnI蛋白免疫原活性。
- 吴国球沈子龙汪兴生劳心珍芦慧霞
- 关键词：心肌肌钙蛋白ICDNA克隆
- 用pIII及pVIII噬菌体展示系统展示抗原和抗原表位的免疫原性的研究被引量：2
- 2004年
- 目的探索用pIII和pVIII噬菌体展示系统展示抗原和抗原表位的免疫源性以及用噬菌体展示颗粒为免疫原制备抗体的可能性。方法从人心肌组织中获得cTnI基因,突变后克隆入pMDT18载体及pFD5pIII型噬菌体展示载体。合成两条互补寡聚核苷酸单链,退火后变成编码cTnI95～108位氨基酸的双链,与PC89pVIII型噬菌体展示载体连接。含有cTnI及其抗原表位基因的重组质粒转化辅助噬菌体敏感的XL1Blue细胞,用VCSM13超感染获得展示有cTnI及其抗原表位的噬菌体颗粒,测定其表达量。并以此为免疫源免疫新西兰白兔获得抗体,用ELISA方法测定抗体滴度。结果cTnI及其抗原表位在噬菌体颗粒表面得到成功展示,展示量分别为5ng/ml和96ng/ml。免疫后得到的抗体滴度为1∶300和1∶1800。结论制备具有一定空间结构的大分子蛋白的抗体时,可用pIII噬菌体展示系统,制备小分子肽线性表位的抗体时,pVIII展示系统具有独特的优势。
- 吴国球劳心珍孙宏伟黄立新张粉梅钱娟英卢惠霞沈子龙
