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用pIII及pVIII噬菌体展示系统展示抗原和抗原表位的免疫原性的研究被引量：2: 2004年; 目的探索用pIII和pVIII噬菌体展示系统展示抗原和抗原表位的免疫源性以及用噬菌体展示颗粒为免疫原制备抗体的可能性。方法从人心肌组织中获得cTnI基因,突变后克隆入pMDT18载体及pFD5pIII型噬菌体展示载体。合成两条互补寡聚核苷酸单链,退火后变成编码cTnI95～108位氨基酸的双链,与PC89pVIII型噬菌体展示载体连接。含有cTnI及其抗原表位基因的重组质粒转化辅助噬菌体敏感的XL1Blue细胞,用VCSM13超感染获得展示有cTnI及其抗原表位的噬菌体颗粒,测定其表达量。并以此为免疫源免疫新西兰白兔获得抗体,用ELISA方法测定抗体滴度。结果cTnI及其抗原表位在噬菌体颗粒表面得到成功展示,展示量分别为5ng/ml和96ng/ml。免疫后得到的抗体滴度为1∶300和1∶1800。结论制备具有一定空间结构的大分子蛋白的抗体时,可用pIII噬菌体展示系统,制备小分子肽线性表位的抗体时,pVIII展示系统具有独特的优势。; 吴国球劳心珍孙宏伟黄立新张粉梅钱娟英卢惠霞沈子龙

Ⅲ型前胶原、Ⅳ型胶原、透明质酸及层粘连蛋白在诊断肝纤维化中的意义被引量：24: 2005年; 目的　探讨血清Ⅲ型前胶原(PCⅢ)、Ⅳ型胶原(CⅣ)、透明质酸 (HA)及层粘连蛋白 (LN)的测定在诊断肝纤维化中的意义。方法　用放射免疫法检测 263例慢性乙型肝炎、67例急性乙型肝炎、27例肝硬化及 20例健康人血清PCⅢ、CⅣ、HA及LN,并进行了统计学分析。结果　中度、重度慢性乙型肝炎及肝硬化的 4项指标定量结果均高于对照组、急性乙型肝炎及轻度慢性乙型肝炎(P<0. 001)。4项指标联合检测显示,重度慢性乙型肝炎及肝硬化的阳性率 (84. 3%与 88. 9% )显著高于其他组别。结论　联合检测血清PCⅢ、CⅣ、HA及LN水平对诊断肝纤维化有较大意义。; 潘继承朱建一吕志刚孙宏伟; 关键词：肝纤维化层粘连蛋白组别

乳腺珠蛋白基因的克隆及重组蛋白的表达和纯化: 目的：克隆人乳腺珠蛋白(hMaM)基因,获得高纯度hMaM重组蛋白. 方法：从人乳腺癌组织提取总RNA,逆转录合成cDNA,设计特异引物,用PCR方法扩增获得目的片段,利用T/A克隆将PCR产物插入pMD-18...; 吴国球张臣孙宏伟赵成桂芦惠霞; 关键词：乳腺珠蛋白乳腺癌基因克隆基因表达重组蛋白纯化; 文献传递

人心肌肌钙蛋白I化学发光免疫分析方法的建立被引量：3: 2004年; 目的　建立检测人心肌肌钙蛋白I(cTnI)化学发光免疫分析方法。方法　用重组cTnI免疫新西兰兔获得抗体 ,经DEAE 2 3层析和 (NH4) 2 SO4沉淀纯化后 ,用碳化二亚胺 (EDC)法标记辣根过氧化物酶 ,SephadexG 2 0 0纯化。优化鲁米诺 H2 O2 肉桂酸发光体系 ,建立了cTnI化学发光免疫分析法。用该法检测 138例正常人及病人血清标本 ,确定正常值参考范围 ,并与ELISA法比较。结果　所得抗体的滴度为 1∶80 0 0。优化后的发光体系为 :鲁米诺 (4 .5mmol/L) ,H2 O2 (7.5mmol/L) ,四苯硼钠 (0 .8mmol/L) ,肉桂酸 (0 .4mmol/L) ,比单独用肉桂酸或四苯硼钠作增强剂灵敏度分别增加了 1.19和 1.0 5倍。本法检测灵敏度为0 .2ng/ml,线性范围为 0 .4～ 5 0ng/ml,批内CV平均 9.0 % ,批间CV平均 11.8% ,回收率为 10 4 .2 %。Hb浓度在 0～ 5 0nmol/L ,T Bil在 0～ 15 μmol/L ,TG在 0～ 2 .0mmol/L对测定结果无影响。与ELISA比较 ,两法结果一致 (P >0 0 5 ) ,相关系数r=0 .985 2(P <0 .0 1)。用BioCheck标准品为校正物 ,确定临床诊断参考范围为 <2 .12ng/ml,诊断符合率为 96 .2 %。结论　建立的cTnI化学发光免疫分析法可常规用于临床检验。; 吴国球劳心珍孙宏伟黄立新张粉梅钱娟英卢惠霞; 关键词：化学发光免疫分析法肉桂酸滴度诊断符合率鲁米诺

306份血标本乙肝5项指标定量与定性检测结果分析被引量：3: 2011年; 目的:观察乙肝5项指标定量与定性检测结果的差异及临床意义。方法:对306份血标本分别采用ELISA法和化学发光法检测乙肝5项指标,并对结果进行系统分析。结果:ELISA法和化学发光法分别检测出7种和13种模式,两种方法的一致率分别为乙肝病毒表面抗原(HBsAg)98.8%,乙肝病毒表面抗体(HBsAb)82.4%,乙肝病毒e抗原(HBeAg)96.4%,乙肝病毒e抗体(HBeAb)78.2%和乙肝病毒核心抗体(HBcAb)59.2%;化学发光法检测HBeAb和HBcAb的阳性率显著高于ELISA法(P<0.001)。结论:定量检测乙肝5项指标敏感性高于常规定性检测方法;同一份标本用两种方法检测可出现不同的结果模式,应引起临床重视。; 赵平赵成桂张臣孙宏伟; 关键词：乙肝5项指标

人乳腺珠蛋白mRNA FQ-PCR检测方法的建立及对乳腺癌微小转移的研究: 目的：克隆人乳腺珠蛋白(humanmammaglobin,hMaM)基因,建立荧光定量PCR方法,探讨外周血hMaMmRNA的表达作为乳腺癌血行微小转移标志物的可能性. 方法：通过设计特异引物,用RT-PCR方...; 吴国球张臣孙宏伟赵成桂芦惠霞; 关键词：乳腺珠蛋白荧光定量PCR 乳腺癌 MRNA表达; 文献传递

梅毒不同检测方法的比较: 2007年; 目的通过与梅毒螺旋体-酶联免疫吸附试验(TP-ELISA)的比较评价其它不同梅毒检测方法的检测效率。方法用国产TP-ELISA检测试剂盒检测阳性标本44例,分别用梅毒螺旋体血凝试验(TPHA)、梅毒甲苯胺红不加热血清试验(TRUST)、荧光密螺旋体抗体吸收试验(FTA-ABS)对44例患者的血清标本进行检测,并将检测结果与TP-ELISA进行比较。结果TPHA与TP-ELISA符合率为97.73%,两者之间差异无统计学意义(P>0.05);TRUST与TP-ELISA符合率为38.63%,差异有统计学意义(P<0.05);FTA-ABS与TP-ELISA符合率为13.51%,差异有统计学意义(P<0.05)。结论TP-ELISA和TPHA可用来初筛梅毒,TP-ELISA更为简便、经济,便于质控。; 赵成桂吴国球孙宏伟; 关键词：梅毒酶联免疫吸附试验梅毒螺旋体血凝试验

乳腺珠蛋白基因的克隆及重组蛋白的表达和纯化: 2006年; 目的克隆人乳腺珠蛋白(hM aM)基因,获得高纯度hM aM重组蛋白。方法从人乳腺癌组织提取总RNA,逆转录合成cDNA,设计特异引物,用PCR方法扩增获得目的片段,利用T/A克隆将PCR产物插入pMD-18T载体。利用BamH I+XhoI双酶切方法将目的基因导入表达载体,阳性质粒转化BL21(DE3)感受态细胞,通过IPTG诱导获得重组蛋白,并用H is-SelectTM和Sephadex-G100进行纯化。结果用RT-PCR方法获得279 bp的片段,克隆至T载体后经DNA测序,结果与预期序列一致。表达质粒转化大肠杆菌后经诱导获得27 kD的目的蛋白,与预期分子质量一致。表达产物最终纯化为一条带。结论成功克隆hM aM基因,并获得高纯度重组蛋白,为hM aM的深入研究打下基础。; 吴国球张臣孙宏伟赵成桂芦慧霞; 关键词：乳腺珠蛋白乳腺癌克隆

结缔组织生长因子的分泌表达及ELISA检测方法的建立: 纤维化疾病是严重威胁人类健康的疾病之一,它能引起肺,肝,肾等主要脏器功能的丧失,并最终导致死亡.研究证明,转化生长因子(transforming growth factor TGF)β是导致纤维化最重要的细胞因子之一,它...; 吴国球刘乃丰孙宏伟黄立新张粉梅钱娟英卢惠霞; 关键词：结缔组织生长因子分泌表达 ELISA检测纤维化疾病转化生长因子; 文献传递

建立人乳腺珠蛋白mRNA FQ-PCR方法用于乳腺癌微小转移的诊断被引量：4: 2006年; 目的克隆人乳腺珠蛋白(hum an m amm aglob in,hM aM)基因,建立荧光定量PCR方法,探讨外周血hM aM mRNA的表达作为乳腺癌血行微小转移标志物的可能性。方法设计特异引物,用RT-PCR方法从乳腺癌组织扩增获得目的片段,利用T/A克隆将PCR产物插入pMD-18T载体;优化扩增条件,以pMD/M质粒制备标准曲线,建立FQ-PCR方法,对乳腺癌不同分期的患者(n=28),乳腺良性疾病患者(n=15),其他肿瘤患者(n=33)的外周血进行检测。结果成功获得hM aM基因并完成克隆,阳性克隆测序结果与预期序列一致;建立了FQ-PCR检测hM aM mRNA方法;28例乳腺癌病人中9例(32.1%)阳性(Ⅰ期4例,Ⅱ期3例,Ⅲ期1例,Ⅳ期1例),hM aM mRNA的表达与乳腺癌病理分期无关(χ2=0.5936;P>0.05);乳腺良性疾病组,其他肿瘤病人组及对照组外周血中均未检出hM aM mRNA。结论hM aM mRNA是乳腺癌特异性标志物,其外周血的表达可作为乳腺癌血行微小转移的指标。; 吴国球张臣孙宏伟赵成桂芦惠霞; 关键词：乳腺珠蛋白荧光定量PCR

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孙宏伟

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