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微小隐孢子虫腺苷酸激酶基因克隆及分析被引量：1: 2011年; 目的获得微小隐孢子虫(Cryptosporidium parvum,Cp)南京(NJ)株的腺苷酸激酶(adenylate kinase,AK)基因的核苷酸和氨基酸序列,比对分析与其他隐孢子虫株AK基因序列的差异。方法采用昆明种小鼠建立微小隐孢子虫NJ株感染模型,根据GenBank微小隐孢子虫Iowa II株AK基因已知序列设计合成2对引物,应用巢式PCR方法从微小隐孢子虫NJ株基因组DNA中扩增AK基因,并将其克隆入pMD18-T载体;对重组质粒pMD18-T-CpAK经PCR及酶切鉴定后测序,应用生物信息学方法分析微小隐孢子虫NJ株AK基因与其他虫株的核苷酸和氨基酸序列差异。结果巢式PCR扩增获得特异的AK基因序列,酶切及PCR鉴定为正确的pMD18-T-CpAK重组质粒,扩增序列为903bp,含隐孢子虫AK全长基因663 bp;核苷酸序列测定及同源性分析表明,微小隐孢子虫NJ株AK基因与人隐孢子虫TU502 type 2株AK的同源性为99%,与微小隐孢子虫Iowa II株AK序列同源性为98%;进化树分析表明,微小隐孢子虫NJ株的AK基因与人隐孢子虫TU502 type 2株AK基因亲缘关系最近。结论成功克隆到微小隐孢子虫NJ株AK基因并获得GenBank基因登录号(HM067440),该AK基因在不同物种间高度保守。; 付芹芹荆春霞杨光郭志云孙小会王穗湘李月琴周天鸿; 关键词：隐孢子虫克隆生物信息学

母亲教养方式与高中生自杀意念关系被引量：12: 2011年; 目的了解母亲教养方式与高中生自杀意念的关系,为青少年自杀干预研究提供科学依据。方法采用自编青少年不良行为调查表和母亲教养方式问卷,对随机抽取广东省广州市787名高中生进行调查。结果广州市高中生自杀意念发生率为10.67%;女生自杀意念发生率高于男生(2χ=9.58,P=0.002);自评学习成绩不同等级高中生自杀意念发生率差异有统计学意义(2χ=14.51,P=0.001);有自我伤害行为的高中生自杀意念发生率高于无自我伤害行为者(2χ=39.12,P=0.001);有自杀意念高中生的母亲更多采用过干涉过保护(t=2.52,P=0.013)和拒绝否认(t=3.33,P=0.001)的教养方式;多因素Logistic回归分析结果表明,母亲教养方式为拒绝否认(OR=1.109)是高中生自杀意念发生的危险因素。结论不良的母亲教养方式是高中生自杀意念的危险因素。; 赵国香荆春霞杨光王声湧陈婷婷付芹芹刘思初马慧璇潘焕玉张睿张一鸣; 关键词：母亲教养方式高中生自杀意念

微小隐孢子虫CRIP基因克隆与分析: 2013年; 目的比对分析微小隐孢子虫南京(NJ)株亲环素-RNA相互作用蛋白(CRIP)与其他隐孢子虫株CRIP基因序列的差异。方法根据GenBank微小隐孢子虫IowaⅡ株CRIP基因序列设计并合成2对引物,应用巢式聚合酶链反应(PCR)技术从微小隐孢子虫NJ株基因组DNA中扩增CRIP基因,并将其克隆到pMD18-T载体上,将重组质粒pMD18-T-CpCRIP进行PCR和双酶切鉴定后测序,应用生物信息学方法分析微小隐孢子虫NJ株CRIP基因与其他种属的CRIP基因序列同源性。结果巢式PCR扩增获得的特异性CRIP基因序列,经PCR及双酶切鉴定确为pMD18-T-CpCRIP重组质粒;测序结果显示,该序列有119 bp,微小隐孢子虫NJ株CRIP基因全长为909bp,编码302个氨基酸;测序结果和同源性分析显示,中国微小隐孢子虫NJ株CRIP基因序列与国外的微小隐孢子虫Iowa II株同源性为98%;该隐孢子虫NJ株CRIP基因序列获GenBank登录号JQ396883。结论微小隐孢子虫NJ株CRIP基因与其他微小隐孢子虫株存在基因变异。; 王穗湘荆春霞陈川郭志云孙小会付芹芹张丽菊杨光; 关键词：生物信息学

微小隐孢子虫亲环素型肽脯氨酰顺反异构酶基因克隆与分析: 2012年; 目的克隆微小隐孢子虫(C.parvum)南京株(NJ)亲环素型肽脯氨酰顺反异构酶基因,测序并分析C.parvumNJ株与其他隐孢子虫分离株CyP-type PPIase基因序列的差异以及亲缘关系。方法根据GenBank上C.parvumIowa II株CyP-type PPIase基因序列,设计2对引物,应用巢式PCR扩增目的基因,并将其克隆入pMD18-T载体,对重组子进行双酶切和菌落PCR鉴定并测序,应用生物信息学方法分析C.parvum NJ株CyP-type PPIase基因与其它隐孢子虫株的核苷酸和氨基酸序列差异。结果巢式PCR扩增获得特异的目的基因,双酶切和菌落PCR鉴定获得正确的重组子,测序表明,扩增基因组DNA序列为746bp,含有目的基因ORF全长570bp,编码190个氨基酸。序列分析表明,我国C.parvum NJ株与国外分离的Iowa II株CyP-type PPIase基因的氨基酸序列具有99%的同源性。进化树分析表明,C.parvumNJ株与Iowa II株CyP-type PPIase基因之间的亲缘关系最近,与脑膜炎双球菌的亲缘关系最远。结论成功克隆C.parvumCyP-type PPIase基因,C.parvumCyP-type PPIase基因在氨基酸水平高度保守。; 付芹芹杨光王穗湘孙小会郭志云张丽菊陈川刘国宁荆春霞; 关键词：微小隐孢子虫克隆

大学生“自杀守门员”短期培训后的效果评价被引量：4: 2010年; 目的在大学生群体中设置"自杀守门员",培训防治自杀行为相关知识和技能后,评价其效果。方法采取贴海报的方式招募志愿者,24名在校大学生自愿参加本次培训。采用自编的守门员培训效果问卷,培训前后分别对"自杀守门员"进行调查。结果培训后守门员在自杀行为的预警信号、自杀误解、评估技能和对自杀知识的评价4个方面的得分均有所提高。其中,提高最显著的为自杀预警信号,得分均值由4.88提高到8.29,提高幅度为69.88%;其次是对自杀知识的评价,得分由2.23提高到3.52,提高幅度为57.85%;对自杀误解知识的得分由5.96提高到8.63,提高幅度为44.80%;提高幅度最低的是评估技能,由5.46提高到7.21,提高幅度为32.05%。培训前守门员对获得自杀详细计划的知晓率较低(16.7%),培训后"自杀守门员"对自杀预防措施知识的知晓率、询问自杀意念的能力和交流技巧以及技巧的掌握均有所提高。结论通过短期培训,可以提高守门员自杀相关知识,但还需进一步研究如何提高守门员对知识的实际应用能力。; 赵国香荆春霞王声湧刘国宁杨光罗亦娟付芹芹代金芳; 关键词：大学生自杀教育

微小隐孢子虫LDH基因的克隆与序列分析被引量：2: 2010年; 目的克隆微小隐孢子虫(Cryptosporidiumparvum,Cp)南京株(NJ)乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)基因,测序并分析微小隐孢子虫NJ株CpLDH与其他隐孢子虫分离株LDH基因序列的差异。方法根据微小隐孢子虫已知LDH基因序列设计合成2对引物,应用巢式PCR技术从微小隐孢子虫NJ株基因组DNA中扩增LDH基因,并将其克隆到pMD18-T载体上,阳性克隆的重组质粒经PCR及双酶切鉴定后,用双脱氧链终止法对重组质粒中的插入序列进行测序,应用生物信息学方法分析CpLDH基因序列和其他物种LDH序列的同源性。结果巢式PCR扩增得到特异的CpLDH基因序列,经PCR及双酶切鉴定获得了正确的pMD18-T-CpLDH重组质粒。测序表明,NJ株微小隐孢子虫LDH基因全长966bp,编码322个氨基酸,该基因序列已登录GenBank,登录号为HM001298。序列分析表明,我国微小隐孢子虫NJ株与国外分离的Iowa II株LDH基因编码的氨基酸序列具有98%的同源性。结论成功克隆了微小隐孢子虫NJ株LDH基因;序列测定及同源性分析表明,微小隐孢子虫NJ株在LDH酶关键结构位点存在突变。; 郭志云杨光荆春霞付芹芹孙小会王穗湘李月琴余新炳周天鸿; 关键词：微小隐孢子虫乳酸脱氢酶巢式PCR 生物信息学

大学生自杀意念影响因素的结构方程模型分析被引量：15: 2011年; 目的基于结构方程模型分析大学生自杀意念影响因素的直接作用和间接作用.方法采用青少年生活事件量表、简易应对方式问卷、社会支持评定量表、自杀态度问卷和Beck抑郁自评问卷调查1505名大学生.采用Bollen-Stine法估计参数,通过评价修正来确定最佳结构方程模型.结果大学生自杀意念的年发生率为6.76%;模型的3大主要指标（x2/df=2.23,GFI=0.982,RMSEA=0.029）均达到标准,模型拟合效果较好.抑郁对自杀意念起直接作用;消极应对、社会支持、积极应对和自杀态度起间接作用;而负性生活事件既可以起直接作用,也可以间接影响自杀意念.危险因素排序：抑郁（41.08%）＞负性生活事件（35.35%）＞消极应对（6.05%）;保护因素排序：社会支持（11.94%）＞积极应对（4.94%）＞自杀态度（0.63%）.结论抑郁对大学生自杀意念的影响最大,且直接影响自杀意念的产生,因此在预防大学生自杀时,更应注重大学生的心理健康,同时大学生要学会从身边的同学、亲人、朋友及老师获得支持.; 赵国香荆春霞王声湧陈青山刘国宁付芹芹陆秦杨光; 关键词：自杀意念大学生结构方程模型影响因素

微小隐孢子虫含EF-hand结构域蛋白家族的生物信息学研究被引量：1: 2012年; 目的对微小隐孢子虫(Cryptosporidium parvum,Cp)含EF-hand结构域家族蛋白进行生物信息学研究,探讨该家族蛋白的EF-hand结构域与Ca2+信号的关系以预测该家族蛋白的功能,为隐孢子虫病的诊断和治疗提供新的方向。方法首先通过数据收集,获得EF-hand结构域家族蛋白的序列信息,接着对每个蛋白进行CDD结构域搜索和NCBI BLAST的比对分析,确证为EF-hand结构域家族蛋白,最后进行结构域分析和功能预测。结果搜索到了C.parvumIowa II中18个含有EF-hand结构域的蛋白,它们之间的氨基酸长度,分子量大小以及等电点等都有很大的区别,通过结构域分析把EF-hand家族分成了含一个EF-hand结构域、二个EF-hand结构域、同时含EF-hand和STKc-AGC两种结构域和同时含EF-hand和PKC两种结构域四大类。结论 EF-hand结构域蛋白家族与重要的钙离子信号作用有着密切的关系,而C.parvum对宿主细胞的侵袭能力与胞内的Ca2+水平密切相关,所以EF-hand蛋白家族很有可能成为隐孢子虫病治疗的一个新的突破点。; 郭志云杨光荆春霞付芹芹孙小会王穗湘李月琴周天鸿; 关键词：微小隐孢子虫 CA2+

微小隐孢子虫20K亲环蛋白基因克隆及分析: 2013年; 目的克隆微小隐孢子虫(Cp)南京株(NJ)的20K亲环蛋白(CyP)基因,并对其核苷酸和氨基酸序列进行分析。方法采用昆明种小鼠建立微小隐孢子虫NJ株感染模型,根据微小隐孢子虫Iowa II株20K CyP基因序列设计合成2对引物,应用巢式PCR技术从微小隐孢子虫NJ株基因组DNA中扩增20K CyP基因,并将其克隆到pMD18-T载体上,将阳性克隆重组质粒进行菌落PCR及双酶切鉴定;应用生物信息学方法分析微小隐孢子虫NJ株20K CyP基因与其他虫株核苷酸和氨基酸序列差异,并分析该基因蛋白结构域。结果巢式PCR扩增得到特异的20K CyP基因,经PCR及双酶切鉴定获得了正确的pMD18-T-20K CyP重组质粒;测序结果显示,微小隐孢子虫NJ株20K CyP基因全长519 bp,编码173个氨基酸,该基因已登录GenBank,登录号为JQ284431;氨基酸序列分析表明,微小隐孢子虫NJ株与Iowa II株20K CyP基因编码的氨基酸序列具有100%同源性;对20K Cyp基因进行蛋白结构域分析,显示该基因序列所编码的蛋白具有特异性类亲环蛋白A、B、H的肽脯氨酰顺反异构酶(PPIase)区域,该区域与人的亲环蛋白A、B、H具有相似性。结论成功克隆微小隐孢子虫NJ株20K CyP基因,该基因具有高度保守性。; 孙小会杨光王穗湘张丽菊付芹芹郭志云陈川荆春霞; 关键词：克隆生物信息学

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