丁丽丽
- 作品数：6 被引量：13H指数：3
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- 人用狂犬病疫苗株aGV的研究与应用
- 目的:研究人用狂犬病疫苗株aGV的生物学特性及应用。方法:电镜和荧光显微镜分别观察病毒形态结构及感染状态;免疫荧光法检测病毒毒力;按照《中国药典》三部(2010版)建立毒种库,并进行全面检定;毒种感染Vero细胞后,NI...
- 郭秀侠杨屹崔文广苗丽丁丽丽韩轼奇王亚军李宇辉
- 关键词：狂犬病疫苗免疫原性中和抗体
- 文献传递
- 人用狂犬病疫苗株aGV的生物学特性被引量：4
- 2011年
- 目的研究人用狂犬病疫苗株aGV的生物学特性。方法取狂犬病病毒3aG株,接种于Vero细胞适应性传代,按照《中国药典》三部(2010版)要求建立毒种库,并进行全面检定:电镜观察毒种的形态结构,测定毒种的糖蛋白基因序列,直接免疫荧光法检测毒种的毒力,动物试验法和细胞培养法检测外源因子,免疫小鼠检测毒种的免疫原性,小鼠脑内中和试验法鉴定毒种的特异性,进行外周致病性试验,检测单次病毒收获液的效力。检测应用该毒株制备的疫苗的抗原性,并与上市疫苗进行比较。结果 aGV毒种在电镜下呈典型的子弹状,可见病毒包膜、刺突等结构;aGV株与3aG、PV、CTN-1、CVS株及街毒株糖蛋白基因序列的同源性分别为99%、92%、84%、91%、84%;病毒毒力逐代提高,第8～12代毒力稳定在108～109 FFU/ml;该病毒在Vero细胞上具有良好的适应性,外周致病性降低,无外源因子污染;aGV9和aGV12的中和指数分别为1 000和7 079,3个批次的aGV9免疫保护指数分别为38 019、7 943和13 489;中和抗体检测结果显示,试验组与对照组之间中和抗体效价差异无统计学意义(P>0.05)。结论本研究适应的狂犬病病毒aGV株有望作为人用狂犬病疫苗株应用于生产。
- 郭秀侠杨屹崔文广苗丽丁丽丽韩轼奇王亚军李宇辉
- 关键词：狂犬病疫苗免疫原性中和抗体
- 狂犬病病毒抗原定量双抗体夹心ELISA检测方法的建立及应用被引量：6
- 2012年
- 目的建立狂犬病病毒(Rabies virμs,RV)抗原定量双抗体夹心ELISA检测方法,以应用于疫苗生产过程中RV含量的监测。方法将RV aGV株纯化抗原经腹腔注射免疫BALB/c小鼠,制备抗RV单克隆抗体,纯化后以HRP进行标记,建立双抗体夹心ELISA检测方法。以狂犬病疫苗(效力检定用)国家标准品为定量标准,建立剂量-反应曲线,确定该方法的灵敏度,并对该方法的专属性、精密性及适用性进行验证。结果制备了2株针对不同抗原位点的单克隆抗体1E9和2H1,间接ELISA法测定腹水效价为1∶105～1∶107,纯化后蛋白含量分别为10.285和7.64 mg/ml。建立的ELISA法对RV抗原的最低检出限为1.03 mIU/ml,标准曲线的最佳线性范围为1.03～66 mIU/ml,相关系数为0.991 9。该方法对检测过程中可能遇到的杂质和添加物(人血清白蛋白、牛血清、Vero细胞培养上清)的检测结果均为阴性;检测3个浓度(20、12.50和3.13 mIU/ml)狂犬病疫苗(效力检定用)国家标准品的试验内和试验间变异系数的平均值分别为7.78%和14.0%;用该方法检测不同毒株、不同细胞生产的狂犬病疫苗的RV抗原含量的平均值在0.67～4.86 IU/ml之间。结论成功建立了RV抗原定量双抗体夹心ELISA检测方法,可对来自不同毒株、不同细胞的狂犬病疫苗的RV抗原进行快速定量检测,为疫苗生产中的质量控制提供了简便的监测手段。
- 崔文广杨屹常军亮井伟东张秀霞苗丽丁丽丽周长军郭秀侠
- 关键词：狂犬病病毒抗原酶联免疫吸附测定
- Vero细胞对狂犬病病毒aGV株的易感性
- 2015年
- 目的探讨WHO引进的Vero细胞对狂犬病病毒（rabies virus,RV）aGV株的易感性。方法将RV aGV按MOI 0.01-0.1感染Vero细胞主代和工作代,显微镜下观察细胞形态;免疫荧光法观察感染24、48、72和96 h细胞内病毒的增殖情况;连续培养15 d,每天取上清液,采用免疫荧光法检测病毒滴度。结果 RV感染Vero细胞可致细胞圆缩病变,病毒感染第7天,病变率约为20%;RV感染Vero细胞主代和工作代24 h单个细胞内可见特异性荧光灶,48 h 20%-30%细胞内可见荧光灶,72 h 60%-80%细胞内可见荧光灶,96 h 90%-100%细胞内可见荧光灶;病毒感染后2-8 d,上清液中检测到的RV滴度均在103-108 FFU/ml之间波动,均为第8天达到高峰,达5.0×108FFU/ml以上。结论 WHO引进的Vero细胞对RV aGV株有较强的易感性,可应用于狂犬病疫苗的规模化生产。
- 赵淑洁陈立新刘岩松朱琨莹丁丽丽柴博雅李春艳崔文广苗丽
- 关键词：狂犬病病毒VERO细胞易感性
- 食蟹猴肌肉注射冻干人用狂犬病疫苗(Vero细胞)的长期毒性被引量：3
- 2014年
- 目的评价食蟹猴反复肌肉注射冻干人用狂犬病疫苗(Vero细胞)的长期毒性。方法采用区段随机分组法,将24只食蟹猴分为阴性对照组、辅料对照组、冻干人用狂犬病疫苗低(1剂/次)、高(5剂/次)剂量组(分别为临床人用剂量的1和5倍),每组6只,雌雄各半,各组均于第0、3、7、14、28和42 d经肌肉注射各免疫1次,停药后进行一般临床观察及体重、体温、心电图、眼科、血液学指标、血液生化及电解质指标、尿液指标、免疫指标、骨髓涂片、脏器及组织病理学改变观察,连续观察4周。结果试验期间各组动物一般状况良好,注射部位肉眼观察无异常;体重、体温、心电图、血细胞计数、凝血功能、血生化、眼科检查、尿常规、外周血T淋巴细胞亚群分布、血清细胞因子IL-2和IFNγ水平、骨髓组织、脏器系数等均未见有毒理学意义的规律性改变;疫苗低、高剂量组动物免疫后血清抗狂犬病病毒特异性抗体水平明显升高,均可产生具有保护作用(大于0.5 IU/ml)的中和抗体;辅料对照组和疫苗低、高剂量组部分动物注射局部可见轻微刺激性改变,4周恢复期结束时,局部刺激性反应消退。结论冻干人用狂犬病疫苗(Vero细胞)5剂/次(临床拟用剂量的5倍)以下为无毒性反应剂量,临床需重点关注注射部位局部刺激性反应。
- 苗丽丁丽丽李春艳赵博崔文广苑志刚刘岩杨屹
- 关键词：狂犬病疫苗VERO细胞长期毒性食蟹猴
- 一种应用生物反应器及片状载体生产狂犬疫苗的方法
- 本发明涉及一种应用生物反应器及片状载体生产狂犬疫苗的方法，属于生物制品技术领域。在具有固定床篮式搅拌系统的Celligen310型14L生物反应器中以台湾赛宇細胞科技股份有限公司的BioNOCII?cellculture...
- 郭秀侠杨屹苗丽刘岩蔡月红李宇辉崔文广姜文波井伟东苑志刚丁丽丽
- 文献传递
