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应用篮式生物反应器制备Vero细胞人用狂犬病疫苗: 目的:应用篮式生物反应器制备Vero细胞人用狂犬病疫苗。方法:以人用狂犬病疫苗株aGV为毒种,Vero细胞为培养基质,利用14 L生物反应器(500 g片状载体置于载体篮内)灌流式培养,连续收获的病毒液经超滤浓缩、灭活、...; 杨屹郭秀侠崔文广苗丽刘岩王亚军蔡月红苑志刚; 关键词：生物反应器狂犬病疫苗 VERO细胞; 文献传递

乙型肝炎病毒PreS2S基因在毕赤酵母中表达的研究: 构建重组质粒PHIL-D2/PreS2S以研究乙肝病毒PreS2(120-146)S基因编码蛋白在毕赤酵母中的表达.通过PCR扩增获得PreS2S片段,插入含AOX1启动子的Pichia Pastoris表达载体PHIL...; 李利金立杰杨屹邵丽军谷丽娟刘岩松董厉子王宇; 关键词：S基因毕赤酵母; 文献传递

毕赤酵母表达乙型肝炎病毒preS2S蛋白的纯化和免疫效果被引量：1: 2007年; 目的研究重组毕赤酵母表达的乙型肝炎病毒preS2S蛋白的纯化方法及免疫效果。方法甲醇诱导含preS2S基因的重组毕赤酵母菌,采用蔗糖区带速率离心、Butyl-S-Sepharose 4FF疏水层析和DEAE-Sepharose Fast Flow离子交换层析等方法,对表达产物进行纯化。纯化后蛋白经SDS-PAGE和Western blot方法鉴定,制备成疫苗,并进行效力试验。放射免疫法检测免疫小鼠血清抗体浓度,计算ED50和相对效力。ELISA法检测血清中的preS2S抗体。结果纯化后的preS2(epi)S蛋白相对分子质量约为27000,且能与特异性抗体结合。两批纯化蛋白制备的疫苗ED50分别为0.35和0.48μg/ml,参比苗为0.52μg/ml。2批疫苗的体外相对效力分别为1.5和1.1,均合格,血清抗体平均浓度为808和784mIU/ml,参比苗为312mIU/ml。2批疫苗免疫小鼠后均产生了preS2抗体。结论该纯化方法实用有效,纯化后的preS2(epi)S蛋白比S蛋白具有更好的免疫原性。; 李利金立杰赵小琳杨屹刘岩松董厉子郝富勇李建平; 关键词：乙型肝炎病毒 PRES2蛋白 S蛋白纯化免疫效果

纯化乙型肝炎病毒表面抗原新层析工艺的建立被引量：4: 2006年; 目的建立提高乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)纯度和收率的新工艺。方法采用微滤法、疏水层析、“穿透式”阴离子交换层析、硫酸纤维素亲和层析和凝胶过滤层析进行HBsAg的纯化。结果采用新建立的工艺,HBsAg收率在50%以上,纯度大于95%,各项检定结果均符合《中国药典》三部(2005版)要求。结论新工艺提高了HBsAg的纯度和收率,适用于规模化生产。; 李建平杨屹王宇李德娟陈万革; 关键词：乙型肝炎病毒表面抗原纯化层析

人用狂犬病疫苗株aGV的生物学特性被引量：4: 2011年; 目的研究人用狂犬病疫苗株aGV的生物学特性。方法取狂犬病病毒3aG株,接种于Vero细胞适应性传代,按照《中国药典》三部(2010版)要求建立毒种库,并进行全面检定:电镜观察毒种的形态结构,测定毒种的糖蛋白基因序列,直接免疫荧光法检测毒种的毒力,动物试验法和细胞培养法检测外源因子,免疫小鼠检测毒种的免疫原性,小鼠脑内中和试验法鉴定毒种的特异性,进行外周致病性试验,检测单次病毒收获液的效力。检测应用该毒株制备的疫苗的抗原性,并与上市疫苗进行比较。结果 aGV毒种在电镜下呈典型的子弹状,可见病毒包膜、刺突等结构;aGV株与3aG、PV、CTN-1、CVS株及街毒株糖蛋白基因序列的同源性分别为99%、92%、84%、91%、84%;病毒毒力逐代提高,第8～12代毒力稳定在108～109 FFU/ml;该病毒在Vero细胞上具有良好的适应性,外周致病性降低,无外源因子污染;aGV9和aGV12的中和指数分别为1 000和7 079,3个批次的aGV9免疫保护指数分别为38 019、7 943和13 489;中和抗体检测结果显示,试验组与对照组之间中和抗体效价差异无统计学意义(P>0.05)。结论本研究适应的狂犬病病毒aGV株有望作为人用狂犬病疫苗株应用于生产。; 郭秀侠杨屹崔文广苗丽丁丽丽韩轼奇王亚军李宇辉; 关键词：狂犬病疫苗免疫原性中和抗体

饲养细胞用于挽救濒死的珍稀贴壁细胞被引量：1: 2007年; 目的挽救濒于死亡的珍稀贴壁细胞。方法将濒于死亡的RINm5F细胞接种到一定量体外培养的小鼠腹腔细胞中,经过一段时间的培养,待RINm5F细胞逐渐长成岛状时,传代并再连续添加2次饲养细胞培养后,传2代,冻存。结果濒于死亡的RINm5F细胞与饲养细胞共培养,随着时间的延长,细胞生长速度加快,饲养细胞逐渐死亡,再经2次与饲养细胞共培养,细胞已恢复正常生长,冻存后复苏生长状态良好。结论添加饲养细胞的方法可用于挽救濒于死亡的细胞。; 李利杨屹张宇邵丽军谷丽娟金立杰; 关键词：饲养细胞贴壁细胞

人用狂犬病疫苗株aGV的研究与应用: 目的:研究人用狂犬病疫苗株aGV的生物学特性及应用。方法:电镜和荧光显微镜分别观察病毒形态结构及感染状态;免疫荧光法检测病毒毒力;按照《中国药典》三部(2010版)建立毒种库,并进行全面检定;毒种感染Vero细胞后,NI...; 郭秀侠杨屹崔文广苗丽丁丽丽韩轼奇王亚军李宇辉; 关键词：狂犬病疫苗免疫原性中和抗体; 文献传递

HBV PreS2-MBP融合蛋白在大肠杆菌中表达条件的优化被引量：4: 2007年; 目的优化HBV PreS2-MBP融合蛋白在大肠杆菌中的表达条件。方法通过改变重组质粒的宿主菌、培养基、诱导温度、诱导剂、诱导剂浓度、诱导时间等条件,利用SDS-PAGE和BandScan凝胶分析软件,分析以上条件改变对表达产物表达量的影响。将重组质粒连续传100代,检测融合蛋白的表达稳定性。结果重组质粒在大肠杆菌BL21菌株、GS培养基、28℃、0.5mmol/L IPTG或1.5mmol/L乳糖诱导4h时,目的蛋白的表达量最高,占菌体总蛋白的43.5%。重组质粒传代100代,融合蛋白的表达稳定。结论已确定出了融合蛋白在大肠杆菌中表达的最佳条件。; 刘照惠邵丽君李猛金立杰李利谷丽娟赵晓琳杨屹; 关键词：HBV 大肠杆菌

Matrex Cellufine Sulfate在重组HBs Ag纯化中的应用被引量：2: 2002年; 建立纯化重组CHO细胞HBsAg的新工艺。将含有HBsAg的重组CHO细胞培养收获液 ,采用ButylSSepharose疏水作用柱层析、MatrexCellufineSulfate亲和柱层析、Sepharose 4FF凝胶过滤柱层析进行纯化 ,得到HBsAg纯品 ,该HBsAg经检定合格。HBsAg回收率为 72 %。; 陈万革金立杰阎昆明李德娟赵睿杨屹; 关键词：HBSAG 纯化乙型肝炎疫苗

改良M199培养基在Vero细胞培养中的适用性被引量：2: 2014年; 目的比较改良M199培养基与进口M199培养基培养Vero细胞及狂犬病病毒的效果,旨在筛选出更适合Vero细胞生长及其相关病毒培养的培养基。方法分别用含5%新生牛血清的改良M199培养基和进口M199培养基培养Vero细胞,于倒置显微镜下观察细胞的生长状态,并进行细胞计数,台盼蓝染色法测定细胞活力;分别用含1%新生牛生血清的改良M199培养基和进口M199培养基培养狂犬病病毒,采用小鼠脑内滴定法测定病毒滴度。结果改良M199培养基培养的Vero细胞形态更规则,增殖更快,细胞密度和活力均高于进口M199培养基培养的Vero细胞;使用改良M199培养基培养狂犬病病毒,病毒增殖更快,滴度更高,峰值可达109log LD50/ml,明显高于使用进口M199培养基培养的病毒滴度。结论改良M199培养基更适合Vero细胞以及狂犬病病毒的培养。; 陈嘉雯陈维金蔡月红于文影杨屹刘剑刚; 关键词：VERO细胞细胞培养

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杨屹

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