- 产毒型O139群霍乱弧菌实时荧光双重TaqMan聚合酶链反应检测体系的临床应用前研究被引量：1
- 2009年
- 目的：探讨产毒型O139群霍乱弧菌实时荧光双重TaqMan聚合酶链式反应检测体系对临床模拟标本检测的意义,为该检测体系的临床应用提供可靠的技术依据。方法：将O139群霍乱弧菌灭活菌株悬液[1.0×10^10cfu（菌落形成单位）/ml]连续10倍稀释后与健康成人新鲜粪便混匀,制备成5.0×10^1 - 5.0×10^8cfu/g梯度浓度的模拟带菌者粪便标本并提取DNA,用以评价我们自行建立的产毒型O139群霍乱弧菌实时荧光双重TaqMan聚合酶链式反应检测体系对临床模拟标本检测的敏感度、特异性和稳定性。结果：实时荧光双重TaqMan聚合酶链式反应快速检测体系对O139群霍乱弧菌的模拟带菌者粪便标本的检测敏感度为1.0×10^3cfu每反应体系（5.0×10^4cfu/g）,其线性检测范围是1.0×10^3-1.0×10^7cfu每反应体系;在稳定性评价中,对1.0×10^3-1.0×10^7cfu模拟带菌者粪便标本DNA进行3次重复检测的结果显示,ctxA基因扩增反应Ct值的变异系数为1.40%-4.10%,rfb-O139基因扩增反应Ct值的变异系数为0.04%-2.08%;在特异性评价中,3名健康成人新鲜粪便标本的阴性对照均未见特异性扩增曲线。结论：我们建立的产毒型O139群霍乱弧菌实时荧光双重TaqMan聚合酶链式反应检测体系可用于O139群霍乱弧菌临床粪便标本的检测。
- 胡继红杨辉吴丽娟龚成蔡剑平
- 关键词：霍乱肠毒素
- 产毒型O139群霍乱弧菌特异性基因序列实时荧光双重TaqMan聚合酶链反应快速检测体系的建立被引量：1
- 2009年
- 目的:建立针对O139群霍乱弧菌的高敏感、高特异的实时荧光双重TaqMan聚合酶链反应快速检测体系。方法:根据O139群霍乱弧菌主基因组O抗原编码基因rfb-0139和霍乱弧菌肠毒素A亚基的编码基因ctxA的特异性序列设计引物及探针,利用TaqMan标记探针和便携式Smartcycler II荧光实时PCR检测平台探讨该检测体系的检测敏感性,用19种其他肠道致病菌或院内感染中的常见致病菌评价该检测体系的特异性。结果:实时荧光双重TaqMan聚合酶链反应快速检测体系对O139群霍乱弧菌的检测敏感度为1.0×102拷贝每反应体系;对O139群霍乱弧菌基因组DNA的检测敏感度为1.0×100pg每反应体系;该检测体系在检测19种其他肠道致病菌或院内感染中的常见致病菌时均不存在非特异性扩增;整个反应在2 h内完成。结论:本研究建立的实时荧光双重TaqMan聚合酶链反应检测体系可作为O139群霍乱弧菌特异、敏感、快速的检测手段,并可同时检测O139群霍乱弧菌产生霍乱肠毒素的能力。
- 杨辉吴丽娟龚成胡继红汪仕奎蔡剑平
- 关键词：霍乱肠毒素
- 产毒型霍乱弧菌实时荧光三重TaqMan聚合酶链反应检测体系的临床应用前研究
- 2009年
- 目的:探讨产毒型霍乱弧菌实时荧光三重TaqMan聚合酶链反应检测体系对临床模拟标本检测的意义,为该检测体系的临床应用提供可靠的技术依据。方法:将已知浓度霍乱弧菌灭活菌株悬液连续10倍稀释后与新鲜健康成人粪便混匀;制备成含菌量为5.0×101CFU/g^5.0×109CFU/g梯度浓度的模拟带O1群霍乱弧菌者粪便标本和含菌量为5.0×101CFU/g^5.0×108CFU/g梯度浓度的模拟带O139群霍乱弧菌者粪便标本;用以评价我们自主建立的产毒型霍乱弧菌实时荧光三重TaqMan聚合酶链反应检测体系对临床模拟标本检测的敏感度、特异性和稳定性。结果:该实时荧光三重TaqMan聚合酶链反应快速检测体系对O1群霍乱弧菌或O139群霍乱弧菌的模拟带菌者粪便标本的检测敏感度均为1.0×103CFU每反应体系,亦相当于模拟带菌者粪便标本5.0×104CFU/g;对不同含菌量的模拟带菌者粪便标本的3次重复实验结果显示,各靶序列扩增反应Ct值的检测变异系数均小于5%;对新鲜健康成人粪便标本的检测未见明确的异常扩增。结论:我们建立的产毒型霍乱弧菌实时荧光三重TaqMan聚合酶链反应检测体系可作为O1群或O139群产毒型霍乱弧菌临床粪便标本敏感、特异和稳定的检测手段。
- 胡继红杨辉吴丽娟龚成蔡剑平
- 关键词：霍乱弧菌霍乱肠毒素
- 炭疽芽孢杆菌特异性基因序列双重TaqMan聚合酶链反应快速检测体系的建立
- 2006年
- 目的 以炭疽芽孢杆菌的主基因和致病毒素基因pagA特异性序列为检测标志，建立高敏感、高特异的荧光双重实时TaqMan聚合酶链反应快速检测体系。方法 根据炭疽杆菌主基因组特异性序列（Gs）和特异的毒力岛pagA基因序列（Pag）设计引物及探针，通过构建目的质粒获得标准模板，利用TaqMan标记探针和便携式Smartcycle实时聚合酶链反应检测平台探讨该检测体系的检测敏感性和特异性。结果该体系炭疽芽孢杆菌的检测敏感度为10^2拷贝每反应体系，与其他蜡样杆菌群细菌未出现非特异性扩增，具有较高的特异性。整个反应在1h内完成，适合于实验室或野外环境下炭疽芽孢杆菌的快速检测。结论 本研究建立的双重TaqMan实时聚合酶链反应检测体系可作为炭疽芽孢杆菌快速、准确、特异、敏感的检测手段。
- 汪仕奎胡继红侯明龚成申子瑜郭辉蔡剑平
- 关键词：DNA探针聚合酶链反应
- 产毒型霍乱弧菌实时定量三重TaqMan PCR快速检测方法的建立被引量：2
- 2009年
- 目的研究建立可同时检测产毒型O1群及O139群霍乱弧菌的实时荧光三重TaqManPCR快速检测方法。方法根据O1群和O139群霍乱弧菌主基因组O抗原编码基因的特异性序列rfb-O1和rfb-O139，以及霍乱弧菌肠毒素A亚基的编码基因ctxA序列设计引物及探针，利用TaqMan标记探针和便携式SmartcyclerII实时荧光PCR检测平台探讨该三重检测方法的检测敏感性，并用19种其他肠道致病菌或院内感染中的常见致病菌评价了该检测方法的特异性。结果实时荧光三重TaqManPCR快速检测方法对01群及0139群霍乱弧菌的检测灵敏度均为每反应体系1．0×10^2拷贝，线性检测范围为每反应体系1．0×10^2～1．0×10^2拷贝；对01群霍乱弧菌基因组DNA的检测灵敏度为每反应体系1．0×10～pg，对0139群霍乱弧菌基因组DNA的检测灵敏度为每反应1pg，该检测体系在检测19种其他肠道致病菌或院内感染中的常见致病菌时不存在非特异性扩增；整个反应在2h内完成。结论本研究建立的实时荧光三重TaqManPCR检测方法可作为鉴别产毒型O1群及O139群霍乱弧菌特异、敏感、快速的检测手段，也可同时检测相应霍乱弧菌产生霍乱毒素的能力。
- 杨辉龚成吴丽娟胡继红蔡剑平
- 关键词：聚合酶链反应霍乱毒素
- 产毒型O1群霍乱弧菌特异性基因序列实时荧光双重TaqMan PCR快速检测体系的建立被引量：3
- 2009年
- 目的建立针对O1群霍乱弧菌的高敏感、高特异的实时荧光双重TaqMan聚合酶链式反应快速检测体系。方法根据O1群霍乱弧菌主基因组O抗原编码基因rfb-O1和霍乱肠毒素的A亚基编码基因ctxA的特异性序列设计引物及TaqMan探针,利用便携式SmartcyclerⅡ实时荧光PCR检测平台探讨该检测体系的敏感性,用19种其他肠道致病菌及院内感染常见致病菌评价该检测体系的特异性。结果实时荧光双重TaqMan聚合酶链式反应快速检测体系对O1群霍乱弧菌的检测敏感度为1.0×102拷贝每反应体系;对O1群霍乱弧菌基因组DNA的检测敏感度为1.0×10–1pg每反应体系;该检测体系在检测19种其他肠道致病菌或院内感染中的常见致病菌时不存在非特异性扩增;整个反应在2h内完成。结论本研究建立的实时荧光双重TaqMan聚合酶链式反应检测体系可作为产毒型O1群霍乱弧菌特异、敏感、快速的检测手段,也可同时检测O1群霍乱弧菌产生霍乱肠毒素的能力。
- 杨辉龚成吴丽娟胡继红汪仕奎蔡剑平
- 关键词：DNA探针霍乱毒素
- 产毒型O1群霍乱弧菌实时荧光双重TaqMan PCR的临床应用前研究被引量：1
- 2009年
- 目的探讨产毒型O1群霍乱弧菌实时荧光双重TaqMan PCR法对临床模拟标本检测的意义,为该法的临床应用提供可靠的技术依据。方法将O1群霍乱弧菌灭活菌株悬液[1.0×1011CFU(菌落形成单位)/ml]连续10倍稀释后与健康成人新鲜粪便混匀,制备成5.0×101～5.0×109CFU/g梯度浓度的模拟带菌者粪便标本并提取DNA,用以评价产毒型O1群霍乱弧菌实时荧光双重TaqMan PCR法对临床模拟标本检测的灵敏度、特异性和稳定性。结果实时荧光双重TaqMan PCR法对O1群霍乱弧菌的模拟带菌者粪便标本的检测灵敏度为1.0×103CFU(5.0×104CFU/g)每反应体系,其检测线性范围为1.0×103～1.0×108CFU每反应体系;在稳定性评价中,对含菌量1.0×103～1.0×108CFU每反应体系模拟带菌者粪便标本DNA进行3次重复检测的结果显示,ctxA基因扩增反应Ct值的变异系数为0.54%～1.36%,rfb-O1基因扩增反应Ct值的变异系数为1.65%～3.75%;在特异性评价中,3名健康成人新鲜粪便标本的阴性对照均未见特异性扩增曲线。结论产毒型O1群霍乱弧菌实时荧光双重TaqMan PCR法可用于O1群霍乱弧菌临床粪便标本的检测。
- 胡继红杨辉吴丽娟龚成戴大鹏蔡剑平庄辉
- 关键词：聚合酶链反应霍乱毒素
