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SARS病毒S蛋白片段与细胞结合作用分析: 2005年; 目的研究SARS冠状病毒(SARSCoV)S蛋白片段与SARSCoV敏感细胞Vero的相互作用,明确S蛋白的受体结合位点。方法在E.coli中表达S蛋白第260～600位氨基酸(S260600)和397～796位氨基酸(S397796)片段,通过Westernblot对蛋白表达进行确认,用NiSepharose螯合层析对重组蛋白进行纯化。将纯化的S260600和S397796蛋白与Vero细胞4℃共同孵育1h后,先后与SARS患者血清及FITC标记的抗人IgG作用,通过流式细胞仪检测蛋白与细胞表面受体的结合情况。结果成功构建了原核表达质粒pET30a/S260600和pET30a/S397796,并表达、纯化出S260600和S397796重组蛋白。分别用SARS患者血清和抗6×His单克隆抗体进行Westernblot检测,证实重组蛋白得到正确表达。流式细胞仪分析显示S260600和S397796重组蛋白均可与Vero细胞发生结合,但S397796的结合力要弱于S260600。同时发现S260600重组蛋白与SARSCoV非敏感细胞NIH3T3细胞不能结合,进一步证明S260600重组蛋白与Vero细胞表面受体的结合是特异性的。结论重组蛋白S397796和S260600具有受体结合能力,尤其S260600包含了重要的受体结合位点,对进一步研究介导SARSCoV感染的细胞表面受体、开展疫苗和抗病毒药物的筛选均具有重要意义。; 魏海燕王健伟欧阳晶王彦斌屈建国赵蔚明洪涛; 关键词：严重急性呼吸综合征冠状病毒科蛋白质S

酵母朊蛋白Sup35NM体外淀粉样纤维的形成动态研究被引量：1: 2006年; 目的研究酵母朊蛋白Sup35在近似于生理环境的体外条件下淀粉样纤维形成的动态过程,为阐明淀粉样纤维的形成机制提供材料和线索。方法在E.coli中表达Sup35蛋白的NM段,并用Ni2+螯合层析对重组蛋白在变性条件下进行纯化,在不同的时间点用透射电子显微镜观察、圆二色谱检测以及蛋白酶K消化试验,同时利用硫黄素(thioflavin T,ThT)结合试验对淀粉样纤维形成的动态过程进行检测。结果在变性条件下成功纯化出Sup35NM重组蛋白。利用透射电子显微镜观察到了Sup35NM蛋白在PBS(pH7·4)缓冲液中发生聚集时的形态变化,圆二色谱检测显示该过程伴随蛋白结构由α-螺旋到β-折叠的转变。纤维具有较强的抗蛋白酶K消化的特性。ThT结合试验提示淀粉样纤维的形成在经过了一个快速的上升阶段后达到平台期,纤维形成的速率会随着蛋白浓度的提高而加快。结论酵母朊蛋白Sup35NM在接近生理环境的体外条件下极易发生聚集,聚集物具有淀粉样纤维性质,Sup35NM淀粉样纤维形成的动态过程为淀粉样变成核聚集模型的研究提供了依据。; 魏海燕刘英霞王健伟屈建国赵蔚明于修平洪涛; 关键词：淀粉样蛋白朊病毒酵母菌

SARS冠状病毒结构蛋白在血清学诊断中潜在应用价值的比较被引量：5: 2005年; 为了确定特异的SARS抗体检测抗原,比较了SARS冠状病毒(SARS-CoV)主要结构蛋白与SARS患者血清的反应性。从SARS死亡患者的肺组织提取的总RNA为模板,用RT-PCR技术分别扩增S、N、M和E4种结构蛋白基因,对3种S截短突变体和N、M、E的重组蛋白在大肠杆菌中进行表达。以表达的蛋白为抗原,应用Westernblot跟踪检测11例SARS患者血清54份。结果显示:SARS-CoV的重组N蛋白和S蛋白有很强的抗原性,S蛋白的3个区段的抗原性强弱存在差异,S3抗原性强于S1和S2;在患病第1周、2周、3周及3周以上,N蛋白和S3蛋白抗体检出率分别为40%、65.2%、100%、100%和40%、61%、76.2%、100%;提示SARS-CoV重组N蛋白和S3蛋白在SARS的血清学诊断中有一定的应用价值。; 王彦斌常昭瑞魏海燕晁彦公曲成毅王健伟洪涛; 关键词：SARS冠状病毒结构蛋白 WESTERN BLOT 血清学诊断

酵母朊蛋白Sup35NM及其突变体蛋白在体外聚集与解聚的动力学研究: 目的:研究酵母朊蛋白Sup35NM及突变体在体外条件下形成淀粉样纤维及纤维解聚的动态过程,以阐明淀粉样纤维的形成机制及加热处理是否会引起多聚体结构的解聚或是蛋白折叠状态的变化。方法:构建5个Sup35NM的突变体,将Su...; 刘英霞魏海燕王健伟屈建国洪涛; 关键词：动力学; 文献传递

酵母朊蛋白Sup35NM体外淀粉样纤维形成与解聚的动力学及其细胞毒性研究: 淀粉样纤维是一种高度有序的蛋白聚集体,富含β折叠的结构,具有较强的抗蛋白酶K消化能力,并且可被刚果红染色而呈现出特定的黄绿色双折光。已发现人类大约有20种疾病与淀粉样纤维的沉积有关,如可传播性海绵状脑病(transmis...; 魏海燕; 关键词：朊蛋白动力学细胞毒性

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魏海燕