目的探讨鱼藤酮诱导PC12细胞损伤作用的可能途径,为神经防护药物的研发提供理论基础。方法将培养的PC12细胞分为正常对照组和0.5μmol.L-1鱼藤酮实验组,持续作用72 h后MTT法检测细胞存活率、Hoechst33342观测细胞凋亡、提取实验组和对照组细胞的总蛋白,应用荧光差异凝胶电泳系统(Differential Gel Electrophoresis,DIGE)获得差异蛋白点的表达信息,通过MALDI-TOF质谱鉴定差异蛋白点。结果MTT法显示鱼藤酮实验组较正常对照组细胞存活率明显降低(P<0.01);Hoechst33342荧光染色显示鱼藤酮实验组凋亡率明显高于对照组(P<0.01)。DIGE分析软件提示实验组与对照组相比发现三个有意义的差异蛋白。通过质谱分析和数据库检索,鉴定分别为γ-烯醇化酶(γ-enolase)、磷酸丙糖异构酶1(Tpi1)和真核细胞翻译起始因子4A(eIF4A)。结论γ-enolase、Tpi1和eIF4A参与细胞损伤,可能成为神经防护药物作用的靶点。
目的:探讨泛素-蛋白酶体系统(UPS)功能障碍诱发帕金森病(PD)细胞模型的作用机制,为深入研究PD的发病机制提供理论依据。方法:建立PSI诱导的PC12细胞模型,实验组、对照组分别加入PSI和DMSO(终浓度为10μmol.L-1)孵育36 h后提取蛋白,应用荧光差异凝胶电泳(DIGE)系统获得差异蛋白点,运用基质辅助激光解吸/电离飞行时间质谱仪(MALDI-TOF Pro MS)鉴定出差异蛋白。结果:实验组与对照组比较,在36 h可见细胞内嗜酸性类Lewy小体形成及细胞凋亡(细胞核呈固缩状或碎裂状),凋亡百分率为25.53%。实验组内质网蛋白ERp29与对照组比较表达量显著降低,差异有显著性(P<0.01)。结论:内质网应激(ERS)在UPS功能障碍引起PD的病理变化过程中起重要作用。
