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上皮细胞间质样转化相关基因在胃癌组织中的表达及其相互关系: 2011年; 目的:研究上皮细胞间质样转化(epithelial to mesenchymal transition,EMT)的相关基因在胃癌组织中的表达及相互关系。方法:用实时定量PCR方法检测23例胃癌患者癌及癌旁组织中介导EMT发生的转录因子Slug、Twist以及E-钙黏附蛋白(E-cadherin)的表达情况,并分析胃癌组织这三者间的相互关系。结果:23例胃癌患者的大多数胃癌组织中Slug、Twist和E-钙黏附蛋白的表达均高于癌旁组织,但差异无统计学意义(P均>0.05);胃癌组织中Slug与Twist之间呈显著的正相关(r=0.56,P<0.01);而E-钙黏附蛋白与Slug、Twist的表达无相关性(r=0.03,P>0.05;r=-0.09,P>0.05)。结论:Slug、Twist可能是胃癌发生过程中的重要分子,两者之间的相互作用可能是胃癌发生的重要环节。; 陶洋王梅顾红兵彭秀娟赵崇晖徐会涛陈瑜钱晖; 关键词：SLUG TWIST E-钙黏附蛋白胃癌

BMP7基因检测在结直肠癌和胃癌诊断中的意义被引量：4: 2009年; 目的建立检测骨形态发生蛋白7(BMP7)基因的实时荧光定量RT-PCR法,探讨BMP7对结直肠癌、胃癌的诊断意义。方法构建BMP7基因的标准质粒,建立RT-PCR,real-time RT-PCR等方法检测并比较BMP7基因在21例胃癌组织、19例结直肠癌组织与对应癌旁组织中的表达水平,用免疫组织化学验证BMP7的蛋白水平差异。结果建立的BMP7检测法稳定和准确;19例结直肠癌中16例(84.2%)癌组织表达的BMP7基因显著高于对应的癌旁组织(P<0.05)。21例胃癌组织中11例(52.4%)癌组织表达高于对应癌旁组织,但无显著差异(P>0.05)。免疫组织化学在蛋白水平上证实了肿瘤组织和癌旁组织中BMP7的表达水平差异。结论成功建立了检测BMP7的实时荧光定量PCR方法,BMP7基因可作为结直肠癌检测的新靶点。; 钱晖谢颖彭秀娟顾红兵曹慧玲许晓蒙王梅张玲陶洋许文荣; 关键词：骨形态发生蛋白7 实时荧光定量PCR 结直肠癌

应用蛋白质芯片技术检测血清自身抗体的初步探讨被引量：2: 2006年; 目的研究应用蛋白质与抗原分子微阵列技术检测血清自身抗体。方法运用胶体金免疫金银染色法在氧化型琼脂糖凝胶膜结合戊二醛(GA)分子衍生的活性表面,制作蛋白质与抗原分子微阵列,建立检测血清自身抗体的方法。结果在未经选择的自身免疫病患者中[包括系统性红斑狼疮(SLE)、类风湿关节炎(RA)和混合性结缔组织病(MCTD)],共检出有多种自身抗体阳性,其中抗ssDNA抗体、抗甲状腺球蛋白(TG)抗体、抗甲状腺过氧化切酶(TPO)抗体、子宫内膜抗体(EmAb)和类风湿因子(RF)等的检出频率较高;但心磷脂抗体(ACA)、抗肝细胞膜特异性脂蛋白(LSP)和抗精子抗体(AsAb)未检出1项阳性,经初步的方法学对比考证,与酶联免疫吸附试验(ELISA)测试结果有较好的重复性(结果一致性达90%)。结论本法敏感度高,结果直观且实验条件易于控制,为阵列芯片的可视化提供了一种很好的模式。; 陶洋顾红兵; 关键词：寡核苷酸序列分析免疫组织化学胶体金自身抗体

PCR-SSCP检测白血病患者C/EBPζ基因突变方法学建立被引量：1: 2012年; 目的建立一种快速、批量筛查白血病患者骨髓C/EBPζ基因外显子突变的多聚酶链反应-单链构象多态性(PCR-SSCP)分析方法。方法用Bio-Rad iCycler梯度PCR仪对25μL PCR反应体系中的Mg++、Taq酶等浓度及反应条件进行优化,并用2%琼脂糖电泳检验产物质量。在此基础上,再对中性聚丙烯酰胺凝胶浓度、上样缓冲液种类、上样量、上样次数及相隔时间、PCR产物稀释倍数、电压、电泳温度等因素进行探讨。同时比较80个健康体检者外周血与20个胸外科良恶性肿瘤患者肋骨骨髓DNA的PCR-SSCP图谱。结果 25μL PCR反应体系中的Mg++、Taq酶浓度分别为1.5～2.0mM和1.0～1.5U,退火温度为54℃～57℃时PCR扩增效率高;应用8%～10%非变性聚丙烯酰胺凝胶,低离子强度(LIS)上样缓冲液,PCR产物稀释4～5倍,上样量为5～10μL,同一块凝胶相隔0.5～1.0小时可上样2次产物,电压为320V挂冰,室温或4℃电泳5～7小时,SSCP分析可得到较为满意的图谱。80例健康体检者外周血与20例正常肋骨骨髓DNA的C/EBPζ基因图谱相同。结论可以用正常体检者外周血DNA代替正常肋骨骨髓DNA行SSCP分析,作为C/EBPζ基因突变检测的对照图谱,两次上样的PCR-SSCP方法节约了试剂、时间、人力,可用于快速大量筛查白血病患者C/EBPζ基因突变。; 程旻陶洋丁金国顾红兵; 关键词：SSCP 白血病

Tim4基因定量检测方法的建立及在消化道肿瘤中的初步应用被引量：2: 2009年; 目的:建立T细胞免疫球蛋白及黏蛋白域分子4(T cells immunoglobu lin-and muc in-dom ain-contain ing mole-cu le 4,Tim4)基因表达的实时荧光定量PCR(实时RT-PCR)的检测方法,探讨Tim4基因在消化道肿瘤中的表达差异。方法:构建包含Tim4基因片段的标准质粒,通过RT-PCR,实时RT-PCR等检测并比较Tim4基因在37例胃癌组织、19例结直肠癌组织与对应癌旁组织中的表达水平。结果:建立的Tim4基因定量检测方法准确可靠;在37例胃癌组织中,26例癌旁组织Tim4基因表达量高于对应癌组织(26/37),且在26例癌旁组织高表达的样本中,18例(69.2%)胃癌癌旁组织与癌组织表达比率大于2;在19例结直肠癌中12例癌旁组织表达高于对应的癌组织(12/19),其中癌旁组织高表达率(大于2)为75.0%(9/12)。结论:成功建立了检测Tim4基因的实时RT-PCR方法,Tim4基因在结直肠癌和胃癌的癌组织中表达呈低趋势,这为深入探讨Tim4基因与肿瘤的关系提供了实验基础。; 钱晖彭秀娟许晓蒙顾红兵王梅徐会涛陶洋徐三荣许文荣; 关键词：实时荧光定量RT-PCR 结直肠癌

结直肠癌患者血浆中骨形态发生蛋白7的检测及意义: 2011年; 目的探讨结直肠癌患者血浆中骨形态发生蛋白7(BMP7)的水平及临床意义。方法收集56例结直肠癌患者术前血浆标本,以60例体检健康者作健康对照,ELISA法测定血浆中BMP7水平。结果 56例结直肠癌患者中,35例术前血浆BMP7平均含量为115.2 pg/mL,升高率为62.5%;60例健康对照者血浆中未检测到BMP7升高率异常。两组间血浆BMP7升高率有显著性差异(χ2=37.5,P<0.01)。检出BMP7异常的35例结直肠癌患者,有14例同时进行了血浆CEA检测,其中6例(42.9%)高于正常参考值。而在21例BMP7正常的结直肠癌患者中,7例标本CEA检测均在正常值范围。结论 BMP7在结直肠癌患者血浆中有较高的表达水平,其升高率明显高于CEA,敏感性为62.5,特异性为100%,可作为结直肠癌诊断的辅助指标。; 张庆玲陶洋蒋茜彭秀娟徐会涛钱晖; 关键词：骨形态发生蛋白7 结直肠癌 ELISA

基于免疫金银染色的蛋白质与抗原分子微阵列技术被引量：11: 2004年; 目的　研制适于自身抗体检测的蛋白质与抗原分子微阵列。方法　利用氧化型琼脂糖凝胶膜结合戊二醛分子衍生的活性表面 ,制作蛋白质与抗原分子微阵列 ,建立了检测血清自身抗体的胶体金免疫金银染色方法 (IGSS)。结果　在未经选择的风湿病患者中 (包括SLE ,RA和MCTD) ,检出多种自身抗体阳性 ,其中又以子宫内膜抗体 (EmAb)、抗ssDNA抗体、抗TG抗体、抗TPO抗体和RF等的检出频率较高 ;但心磷脂抗体 (ACA)、抗LSP和抗精子抗体 (AsAb)均为阴性。经初步方法学对比考证 ,实验结果与ELISA有较好的一致性 (达 90 % )。结论　本法具有方法敏感 ,结果直观和实验条件易于控制等特点 ,为发展可视化阵列芯片提供了一种很好的模式。; 虞伟陶洋王艾丽武建国; 关键词：免疫金银染色蛋白质自身抗体检测蛋白质芯片

生长抑制因子4基因在胃癌中的表达及临床意义: 2010年; 目的检测生长抑制因子4(ING4)在胃癌患者组织及外周血中的表达,探讨其与胃癌发生、发展的相关性及在胃癌诊疗中的应用。方法收集30例胃癌患者手术切除的癌组织、对应的癌旁组织和外周血,用RT-PCR、实时定量RT-PCR、巢式RT-PCR检测ING4 mRNA表达;用western blot和免疫组织化学法在蛋白质水平上进行验证,分析ING4在胃癌中的表达水平与临床病理因素的相关性。结果 RT-PCR和定量结果显示76.7%(23/30)的胃癌组织ING4表达低于对应的癌旁组织,差异有统计学意义(P<0.05);western blot和免疫组织化学法在蛋白质水平上证实了胃癌组织较癌旁组织中ING4的表达水平下降。胃癌组织ING4的表达与肿瘤分化状态和复发相关,但与临床分期无关。分化水平越低,ING4 mRNA表达越低(P<0.05);复发的患者癌组织ING4 mRNA表达显著低于未复发患者(P<0.05)。胃癌患者外周血ING4 mRNA的表达也显著低于健康人。结论胃癌组织ING4的表达下调,且与胃癌的分化与复发相关,ING4的基因和蛋白质水平检测可能作为胃癌病程进展或复发监测的新指标。; 钱晖李继刚王胜王梅彭秀娟顾红兵陶洋许文荣; 关键词：生长抑制因子4 胃癌 RT-PCR 免疫组化免疫印迹

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陶洋

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