陈晓云
- 作品数：7 被引量：21H指数：3
- 供职机构：中山大学中山医学院眼科学国家重点实验室更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金广东省科技计划工业攻关项目教育部“新世纪优秀人才支持计划”更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 氧化损伤在眼底疾病发生发展中的作用被引量：3
- 2010年
- 氧化损伤在多种眼底疾病的发病机制中有着重要的作用。视网膜内活性物质的蓄积,对各种生物大分子均可造成氧化损伤,导致视网膜细胞的死亡,引起视网膜功能障碍。线粒体在氧化损伤的机制中起着核心作用,它是活性氧簇产生的主要场所并作为氧化损伤首当其冲的目标。本文就氧化损伤在眼底疾病发生发展中的作用进行综述。
- 陈晓云罗燕
- 关键词：活性氧活性氮线粒体眼底疾病
- 靶向血管内皮生长因子的RNA干扰抑制氧诱导视网膜病变小鼠视网膜新生血管生成的研究被引量：1
- 2012年
- 目的探讨玻璃体腔注射靶向血管内皮生长因子（VEGF）的RNA干扰慢病毒抑制氧诱导视网膜病变（OIR）小鼠视网膜新生血管生成的作用及其机制。方法实验研究。构建4对针对靶基冈小鼠VEGF的siRNA干扰载体，筛选并进行慢病毒包装。60只C57Bif6J小鼠分成4组（每组15只）：正常对照组．OIR模型组，OIR＋空载体组，OIR＋VEGF-RNA干扰组。OIR＋空载体组和OIR＋VEGF-RNA干扰慢病毒组的小鼠在生后第5天玻璃体腔注射相应的1μ1的7.5×10^7空载体慢病毒和VEGF-RNA干扰慢病毒。后3组小鼠在生后第7天建立OIR模型。第17天时FITC-Dextran灌注视网膜铺片观察4组小鼠视网膜血管形态及面积变化，视网膜铺片免疫荧光染色检测紧密连接蛋白Claudin-5和Occludin的分布变化．Westernblot检测VEGF、磷酸肌醇3激酶（P13K）、酪氨酸蛋白激酶SRC、磷酸化细胞外信号调节激酶（P-ERK）蛋白表达量的变化。数据采用单因素方差分析进行比较。结果FITC-Dextran灌注视网膜铺片显示正常组视网膜血管分布呈均匀网状；RNA干扰组新生血管面积（0．271399mm^2）明显较OIR模型组（1.212782mm^2）、空载体组（1．152504mm^2）少（F=449．924，P〈0．01）。OIR模型组和空载体组间差异无统计学意义，其余两两间差异均有统计学意义（P〈0．01）。视网膜铺片免疫荧光染色显示紧密连接蛋白Claudin-5和Occludin在RNA干扰组中与正常组相似，呈均匀光滑线性分布，而在OIR模型组、空载体组的分布中断、不均匀，在新生血管团中可见团块状的强荧光；VEGF的RNA干扰组中VEGF、P13K、酪氨酸蛋白激酶SRC和p-ERK的蛋白表达量较OIR模型和空载体组低。结论玻璃体腔注射靶向VEGF的RNA干扰慢病毒能有效抑制OIR小鼠模型中VEGF及其下游通路蛋白的表达．从而抑制视网膜新生血管的形成．为临床上早产儿视网膜病变的防治提供了新思路和新途径。
- 毛娅妮李正原黄娟肖伟陈晓云凌士奇项道满
- 关键词：RNA干扰视网膜新生血管化视网膜病
- 线粒体靶向抗氧化剂SS31对人晶状体上皮细胞氧化损伤的影响被引量：1
- 2013年
- 背景老视是影响中老年视觉质量和生活质量的主要原因之一，主要与晶状体上皮细胞（LECs）随年龄增长而发生的氧化损伤有关。SS31是线粒体靶向的抗氧化剂，研究其对LECs氧化损伤的保护作用对老视的预防和治疗有重要意义。目的探讨SS31对叔丁基过氧化氢（t-BHP）诱导的人LECs氧化损伤的保护作用。方法用含质量分数10％胎牛血清（FBS）的DMEM低糖培养液对人LECs细胞株HLEB．3进行培养和传代，用200μmol／Lt-BHP处理HLEB一3细胞18h以构建细胞氧化损伤模型。培养的细胞分为空白对照组、t-BHP模型组、10nmol／LSS31±T—BHP组、100nmol／LSS31±T—BHP组、1μmol／LSS31±T—BHP组、10μmol／LSS31±T—BHP组和100μmol／Lt-BHP组，应用噻唑蓝（MTT）法检测各组细胞的存活率，以筛选SS31的最佳药物浓度。再将培养的细胞分为空白对照组、t-BHP模型组和1p^mol／LSS31±t．BHP共培养组。采用JC-1染色法并用流式细胞仪检测各组HLEB一3细胞线粒体膜电位的改变，用MitoSOX染色在荧光显微镜下检测各组活细胞线粒体中产生活性氧簇（ROS）的情况。结果200μmol／Lt-BHP加入培养液作用HLEB一3细胞18h后，与空白对照组的细胞存活率（100±0）％比较，模型组细胞存活率下降至（53．424-2．52）％，不同浓度的SS31组细胞存活率均较模型组明显升高，各组细胞存活率的差异有统计学意义（F=58．349，P〈0．01），其中以1μmol／LSS31组细胞存活率最高（82．134-3．15）％，明显高于t-BHP模型组，差异有统计学意义（t=28．710，P〈0．05）。各组HLEB-3细胞线粒体膜电位检测结果提示，正常对照组红／绿荧光强度比值为7．07±0．06，t-BHP模型组为4．46±0．14，1μmol／LSS31±t—BHP共培养组为5．76±O．26，3个组间差异有统计学意义（F=172．332，P〈0．01），空白对照组和1Izmol／LSS31±t—BHP共培养组红／绿荧光强度比值均�
- 蔡萌李金李静陈晓云黄娟罗燕
- 关键词：晶状体老视
- 复方血栓通对人视网膜血管内皮细胞抗氧化损伤的保护作用及其机制被引量：9
- 2011年
- 背景氧化损伤是引起内皮细胞功能障碍和细胞死亡的重要因素之一，它还可导致视网膜血管性疾病的发生。复方血栓通对多种视网膜血管性疾病有一定的疗效，但分子机制尚不明确。目的研究复方血栓通对叔丁基过氧化氢（t—BHP）诱导的人视网膜血管内皮细胞（RVECs）氧化损伤的保护作用及其机制。方法分离健康人供体眼的视网膜，用组织块培养法进行人RVECs的原代培养，并用FITC-vwF染色流式细胞仪对培养细胞进行鉴定。取3～5代的细胞用于实验，在含有5×10^4个／L细胞密度的培养孔中分别加入质量浓度为0．0625、0．1250、0．2500、0．5000、1．000g／L复方血栓通溶液，各质量浓度复方血栓通组和t-BHP模型组均加入终浓度为100μmol／Lt-BHP，干预24h后用MTT法检测各组人RVECs的吸光度（A490）值以评估复方血栓通的细胞毒性。t-BHP模型组分别加入终浓度为75、100、200和300μmol／L的t-BHP，相应的复方血栓通组在不同浓度t-BHP造成细胞氧化损伤的同时均加入终质量浓度为0．2500g／L复方血栓通溶液，干预6h后，用MTT法检测复方血栓通对t-BHP引起氧化损伤的作用。用Annexin V—FITC／PI双染流式细胞仪检测各组细胞的凋亡和坏死率；用倒置显微镜和Hoechst33258细胞核染色观察各组细胞的形态学，利用免疫荧光法检测人RVECs中蛋白氧化损伤和DNA氧化损伤的生物标记物硝基酪氨酸（NT）和8-羟基脱氧鸟苷（8-OHdG）的表达；Western blot法检测t-BHP损伤6、12、24h各组细胞核转录因子．KB（NF—KB）、p53、bcl-2和bax的蛋白表达水平。结果正常对照组、0．0625、0．1250、0．2500、0．5000、1．000g／L复方血栓通组人RVECs的A490值总体比较差异无统计学意义（F=1．989，P〉0．05），75、100、200和300μmol／L的t-BHP作用后细胞存活率下降，而相应的复方血栓通组细胞存活率均较t-BHP模型组升高，差�
- 陈晓云李建桥朱晓波肖伟黄娟李涛唐仕波罗燕
- 关键词：复方血栓通视网膜血管内皮细胞核转录因子-ΚB凋亡
- 靶向人白细胞源性精氨酸氨肽酶基因shRNA重组腺病毒的构建
- 2012年
- 目的:构建靶向人白细胞源性精氨酸氨肽酶(LRAP)基因的shRNA重组腺病毒,有效抑制LRAP基因在人视网膜血管内皮细胞中的表达。方法:设计并合成3对靶向人LRAP基因shRNA的单链寡核苷酸,退火后克隆至腺病毒穿梭载体pRNAT-H1.1/Adeno得到3个重组穿梭质粒。将重组穿梭质粒和腺病毒骨架质粒pAdEasy-1在大肠杆菌BJ5183-AD-1中进行同源重组形成腺病毒表达质粒,并在293a细胞中包装形成重组腺病毒颗粒。重组腺病毒经扩增和滴度测定后感染原代培养的人视网膜血管内皮细胞,应用荧光实时定量PCR测定LRAP mRNA的相对表达量,筛选得到沉默效率最高的LRAP shRNA重组腺病毒,并应用Western blot法验证经RNA干扰后视网膜血管内皮细胞中LRAP的蛋白表达水平。结果:PCR、酶切和DNA测序证实LRAP shR-NA重组穿梭质粒和表达质粒的插入序列正确。收获病毒后的PCR证实重组腺病毒颗粒包装成功。实时荧光定量PCR筛选得到具有最大沉默效率的重组腺病毒,其沉默效率达到约79%。Western blot法证实经RNA干扰后,人视网膜血管内皮细胞中的LRAP蛋白水平显著降低。结论:成功构建了靶向人LRAP基因的shRNA重组腺病毒,可有效抑制人视网膜血管内皮细胞中LRAP基因的表达。
- 曾美珍罗燕林少芬陈晓云田景毅唐仕波
- 关键词：SHRNA重组腺病毒视网膜血管内皮细胞
- 复方血栓通胶囊对叔丁基过氧化氢诱导人视网膜色素上皮细胞氧化损伤保护作用被引量：7
- 2010年
- 目的 探讨复方血栓通胶囊对叔丁基过氧化氢（t-BHP）诱导体外培养的人视网膜色素上皮细胞（hRPE）氧化损伤的保护作用.方法 原代培养hRPE细胞后取第3～5代进行实验.应用MTT法筛选复方血栓通的最佳药物浓度;再分别用MTT及Annexin V/PI双染法检测复方血栓通及其各单方药物对细胞氧化损伤的保护作用.hRPE细胞分为正常对照组、t-BHP模型组和t-BHP＋复方血栓通（0.25mg/ml）组,倒置相差显微镜和Hoechst33258染色观察各组细胞的形态和细胞核;MitoSOX染色检测活细胞线粒体中ROS的产生;JC-1染色检测线粒体膜电位的变化;ELISA法检测细胞分泌的VEGF浓度.结果 500μmol-BHP干预6h后,模型组细胞存活率下降到（49.9±6.3）%,而不同浓度的复方血栓通组细胞存活率均较模型组升高,且以0.25mg/ml的保护作用最佳;细胞存活率、凋亡及坏死率的结果显示复方血栓通较各单方药物的保护作用更为明显;模型组多数细胞肿胀、变圆、漂浮和核固缩,复方血栓通组损伤的细胞明显减少,线粒体内ROS的产生、线粒体膜电位的下降、分泌的VEGF均较模型组明显减少.结论 复方血栓通胶囊对t-BHP诱导hRPE细胞的氧化损伤具有保护作用,且其保护作用较各单方药物更为明显,其作用机制为清除ROS,阻止线粒体膜电位的下降,抑制VEGF的分泌,从而抑制细胞凋亡和坏死,提高细胞存活率.
- 陈晓云肖伟罗燕马伟李涛陈方朱晓波曾美珍唐仕波
- 关键词：复方血栓通胶囊人视网膜色素上皮细胞
- Claudin-23在血管增生性视网膜病变小鼠视网膜中的差异表达
- 2013年
- 背景多种claudin亚型与血-视网膜屏障的功能密切相关，参与病理性新生血管的形成，从而导致多种视网膜血管性病变的发生．Claudin-23是近年来新发现的claudin亚型，研究其在视网膜中的定位、表达及其与视网膜血管病变的关系对相关病变的靶向治疗具有重要的临床意义。目的探讨氧诱导视网膜病变（OIR）小鼠视网膜中claudin-23的动态表达变化。方法将生后第7天（P7）的SPF级C57BL／6J乳鼠与母鼠放入含氧体积分数为75％±3％的密闭饲养箱中饲养5d建立小鼠OIR模型，用50g／L异硫氰酸荧光素一葡聚糖（FITC—dextran）行小鼠眶后注射并行全视网膜铺片，检测成模后缺氧小鼠的视网膜血管情况并与正常小鼠进行对照。采用实时荧光定量PCR（real—timePCR）和Westernblot法检测P12、P17和P25小鼠视网膜中claudin-23mRNA及蛋白的表达，采用real—timePCR法检测elaudin-23mRNA在小鼠视网膜中的动态表达；制备P7小鼠视网膜冰冻切片，用免疫荧光双染法检测claudin-23在正常对照组和OIR模型组小鼠视网膜中的表达定位。结果OIR模型组P17小鼠全视网膜铺片可见视网膜大血管迂曲、扩张，后极部视网膜出现无灌注区，周边部血管网状结构紊乱或消失，出现大量病理性新生血管。正常对照组小鼠随着日龄的增加，视网膜中claudin-23mRNA的表达量增加缓慢，P25时的表达量是P7时的2．3倍，蛋白表达则先增加后减少，在P12出现高峰；OIR模型组小鼠随日龄的增加claudin-23mRNA和蛋白的表达水平均快速增加，claudin-23mRNA在P25的表达量较P7增加12．5倍。正常P7小鼠与OIR模型组P7小鼠claudin-23mRNA和蛋白的表达量比较差异均无统计学意义（P〉O．05），但OIR模型组P12、P17和P25小鼠视网膜中claudin-23mRNA的表达量均明碌高于同龄正常对照组小鼠，差异均有统计学意义（P〈0．05）；P25时，elaudin．23蛋白的表达量�
- 李静肖伟李士清郭凯蔡萌陈晓云黄娟罗燕
- 关键词：视网膜氧诱导视网膜病变
