肖伟
- 作品数：12 被引量：30H指数：3
- 供职机构：中山大学中山医学院眼科学国家重点实验室更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金广东省科技计划工业攻关项目教育部“新世纪优秀人才支持计划”更多>>
- 相关领域：医药卫生政治法律经济管理更多>>
- 体外培养人视网膜微血管内皮细胞屏障功能的研究被引量：8
- 2009年
- 目的:研究原代培养的人视网膜微血管内皮细胞屏障功能。方法:对人视网膜微血管内皮细胞进行原代培养并鉴定,第4代细胞接种于Polyester(PET)膜上,不同时点对滤膜表面行显微镜观察,通过紧密连接相关蛋白occludin的表达,间接反映细胞之间紧密连接的形成,应用共聚焦免疫显微镜观察2、3、4周occludin表达的变化;跨膜电阻(TER)检测屏障的稳定性,并通过测量正常培养条件和5μg/L的血管内皮生长因子(VEGF)干预下辣根过氧化物酶(HRP)通透性的改变反映屏障特性。结果:成功培养了人视网膜微血管内皮细胞,纯度可达95.8%。细胞接种1周后融合为单层,接种后2、3、4周细胞密度无明显变化,细胞接触紧密,呈单层生长,可见occludin在细胞相邻边界规则的表达;occludin在2、3、4周,在细胞内的分布逐渐移向相邻细胞交界处;2周时视网膜微血管内皮细胞跨上皮细胞电阻达(120.62±3.97)Ω/cm2,2、3、4周差异无显著(P>0.05);单层细胞的通透性检测结果显示,HRP从滤膜上方到达下方随时间延长呈线性增加,且在VEGF的干预下,各时点通透率明显增加(P<0.05)。结论:利用体外培养的人原代视网膜微血管内皮细胞建立单层细胞具有典型的屏障功能特性,可作为体外研究血视网膜内屏障的有用模型。
- 李建桥江静波罗燕刘清云肖伟史煜马红婕唐仕波
- 关键词：血管内皮细胞细胞培养血视网膜屏障
- 微小RNA与眼底疾病被引量：3
- 2013年
- 微小RNA（miRNAs）是一类内源性的非编码小分子RNA，广泛存在于真核生物细胞中。miRNAs通过抑制mRNA翻译或降解mRNA的方式下调目的基因的表达水平，被认为是基因转录后表达调控的主要方式，参与调节细胞的增生、分化、死亡等生物学过程。近年来的研究表明，miRNAs的表达水平和／或功能的改变与糖尿病视网膜病变（DR）、年龄相关性黄斑变性（AMD）、视网膜母细胞瘤（RB）等多种严重致盲性眼底疾病的发生、发展、治疗和预后密切相关。就近年来miRNAs与眼底疾病的研究进展进行综述。
- 肖伟何明光
- 关键词：微小RNA眼底疾病基因表达调控
- 论戒毒执法中的问题及建议
- 吸毒是全世界都面临的问题，我国对待吸毒问题处理的方式主要有行政处罚、强制隔离戒毒和社区戒毒等，还有劳教所、看守所和监狱实际上也承担着戒毒任务。但这些处理方式因为各有不同的性质、功能和作用，也隶属于不同的部门管理，适用不同...
- 肖伟
- 关键词：劳动教养司法监督
- 视网膜新生血管形成时紧密连接蛋白Claudins表达的时空变化的研究
- Claudins是近年发现的一个多基因家族，至今已发现超过24个家族成员，Claudins蛋白被认为是形成紧密连接的骨架。在不同的组织和不同的病理生理状态下，Claudins家族成员的表达与分布有明显变化，屏障功能相应改...
- 肖伟
- 关键词：视网膜病变新生血管生长蛋白表达
- 文献传递
- 靶向血管内皮生长因子的RNA干扰抑制氧诱导视网膜病变小鼠视网膜新生血管生成的研究被引量：1
- 2012年
- 目的探讨玻璃体腔注射靶向血管内皮生长因子（VEGF）的RNA干扰慢病毒抑制氧诱导视网膜病变（OIR）小鼠视网膜新生血管生成的作用及其机制。方法实验研究。构建4对针对靶基冈小鼠VEGF的siRNA干扰载体，筛选并进行慢病毒包装。60只C57Bif6J小鼠分成4组（每组15只）：正常对照组．OIR模型组，OIR＋空载体组，OIR＋VEGF-RNA干扰组。OIR＋空载体组和OIR＋VEGF-RNA干扰慢病毒组的小鼠在生后第5天玻璃体腔注射相应的1μ1的7.5×10^7空载体慢病毒和VEGF-RNA干扰慢病毒。后3组小鼠在生后第7天建立OIR模型。第17天时FITC-Dextran灌注视网膜铺片观察4组小鼠视网膜血管形态及面积变化，视网膜铺片免疫荧光染色检测紧密连接蛋白Claudin-5和Occludin的分布变化．Westernblot检测VEGF、磷酸肌醇3激酶（P13K）、酪氨酸蛋白激酶SRC、磷酸化细胞外信号调节激酶（P-ERK）蛋白表达量的变化。数据采用单因素方差分析进行比较。结果FITC-Dextran灌注视网膜铺片显示正常组视网膜血管分布呈均匀网状；RNA干扰组新生血管面积（0．271399mm^2）明显较OIR模型组（1.212782mm^2）、空载体组（1．152504mm^2）少（F=449．924，P〈0．01）。OIR模型组和空载体组间差异无统计学意义，其余两两间差异均有统计学意义（P〈0．01）。视网膜铺片免疫荧光染色显示紧密连接蛋白Claudin-5和Occludin在RNA干扰组中与正常组相似，呈均匀光滑线性分布，而在OIR模型组、空载体组的分布中断、不均匀，在新生血管团中可见团块状的强荧光；VEGF的RNA干扰组中VEGF、P13K、酪氨酸蛋白激酶SRC和p-ERK的蛋白表达量较OIR模型和空载体组低。结论玻璃体腔注射靶向VEGF的RNA干扰慢病毒能有效抑制OIR小鼠模型中VEGF及其下游通路蛋白的表达．从而抑制视网膜新生血管的形成．为临床上早产儿视网膜病变的防治提供了新思路和新途径。
- 毛娅妮李正原黄娟肖伟陈晓云凌士奇项道满
- 关键词：RNA干扰视网膜新生血管化视网膜病
- 过表达Claudin-5增强体外培养的人视网膜微血管内皮细胞屏障功能被引量：2
- 2014年
- [目的]探讨过表达Claudin-5后对视网膜血管内皮细胞屏障功能的影响.[方法]体外原代培养人视网膜血管内皮细胞（hRVEC）.当接种至transwell膜的P2～P5代hRVEC近60％融合时进行慢病毒介导的转染实验.hRVEC分为对照组,慢病毒空载体组,慢病毒介导的Claudin-5高表达转染组.荧光活细胞动态显微镜观察慢病毒介导的转染效率.Western Blot检测各组细胞中Claudin-5表达水平.CCK8法检测病毒转染对细胞的毒性.待接种至transwell膜的hRVEC培养2周后建立稳定的单层人视网膜血管内皮细胞屏障模型后,电阻仪检测hRVEC屏障的跨内皮电阻（TER）,异硫氰酸荧光素右旋糖酐检测hRVEC屏障的通透性.[结果]慢病毒可以介导Claudin-5在hRVEC高表达,其转染率达60％,Western Blot检测证实Claudin-5蛋白表达显著增加.CCK8检测表明慢病毒转染不影响细胞的活性,对细胞毒性小;过表达Claudin-5后也不影响hRVEC的增殖;过表达Claudin-5后能降低体外单层人视网膜血管内皮细胞屏障模型的通透性,并提高其TER.[结论]过表达Claudin-5后可以显著提高体外人视网膜血管内皮细胞屏障的功能,这为视网膜血管性疾病的治疗提供新思路.
- 田蓉刘秋慧蔡萌李静王菁肖伟罗燕
- 关键词：CLAUDIN-5慢病毒转染
- 不同年龄组人视网膜微血管内皮细胞特性的研究(英文)
- 2009年
- 目的:研究2个不同年龄组供体来源的人视网膜微血管内皮细胞的特性。方法:分离培养2个不同年龄组的人视网膜微血管内皮细胞,分别为出生后30 d内和40-65岁供体组。视网膜微血管内皮细胞具有特异性表达,通过免疫荧光染色CD31、vWF和乙酰化低密度脂蛋白(Dil-Ac-LDL)的摄取来定位内皮细胞的标记。通过使用matrigel基质胶培养细胞,激光共聚焦显微镜和Western blotting分析vWF在细胞内的分布,评估2组细胞管状结构形成能力以及vWF在细胞内的不同分布。结果:从2个不同年龄组中成功地获得高纯度视网膜微血管内皮细胞。2组在种到基质胶后6 h均能形成典型的二维管腔样结构,但婴幼儿组评分比成人组高(27.2%±2.2%),且二维管腔样结构在30 h仍可较好地维持,而成人组已看到部分自发降解。另外可见到vWF在婴幼儿组主要表达在细胞核内,而成人组主要表达在胞浆。结论:不同年龄来源的人视网膜血管内皮细胞具有某些自身特定的性状特征,在与年龄相关的疾病的体外研究中,供体年龄因素可能造成的影响应该得到一定的重视。
- 李建桥罗燕马伟丁小燕袁玲肖伟李杰史煜唐仕波
- 关键词：血管内皮细胞视网膜WILLEBRAND因子
- 组织、领导传销活动罪司法适用问题研究
- 2009年2月28日第十一届全国人民代表大会常务委员会第七次会议通过《中华人民共和国刑法修正案（七）》，新增组织、领导传销活动罪。本文从司法实践对组织、领导传销活动罪的构成要件的认定切入，对该罪的的要件属性、与相关犯罪活...
- 肖伟
- 关键词：传销活动犯罪构成司法适用
- 文献传递
- 复方血栓通胶囊对叔丁基过氧化氢诱导人视网膜色素上皮细胞氧化损伤保护作用被引量：7
- 2010年
- 目的 探讨复方血栓通胶囊对叔丁基过氧化氢（t-BHP）诱导体外培养的人视网膜色素上皮细胞（hRPE）氧化损伤的保护作用.方法 原代培养hRPE细胞后取第3～5代进行实验.应用MTT法筛选复方血栓通的最佳药物浓度;再分别用MTT及Annexin V/PI双染法检测复方血栓通及其各单方药物对细胞氧化损伤的保护作用.hRPE细胞分为正常对照组、t-BHP模型组和t-BHP＋复方血栓通（0.25mg/ml）组,倒置相差显微镜和Hoechst33258染色观察各组细胞的形态和细胞核;MitoSOX染色检测活细胞线粒体中ROS的产生;JC-1染色检测线粒体膜电位的变化;ELISA法检测细胞分泌的VEGF浓度.结果 500μmol-BHP干预6h后,模型组细胞存活率下降到（49.9±6.3）%,而不同浓度的复方血栓通组细胞存活率均较模型组升高,且以0.25mg/ml的保护作用最佳;细胞存活率、凋亡及坏死率的结果显示复方血栓通较各单方药物的保护作用更为明显;模型组多数细胞肿胀、变圆、漂浮和核固缩,复方血栓通组损伤的细胞明显减少,线粒体内ROS的产生、线粒体膜电位的下降、分泌的VEGF均较模型组明显减少.结论 复方血栓通胶囊对t-BHP诱导hRPE细胞的氧化损伤具有保护作用,且其保护作用较各单方药物更为明显,其作用机制为清除ROS,阻止线粒体膜电位的下降,抑制VEGF的分泌,从而抑制细胞凋亡和坏死,提高细胞存活率.
- 陈晓云肖伟罗燕马伟李涛陈方朱晓波曾美珍唐仕波
- 关键词：复方血栓通胶囊人视网膜色素上皮细胞
- Claudin-23在血管增生性视网膜病变小鼠视网膜中的差异表达
- 2013年
- 背景多种claudin亚型与血-视网膜屏障的功能密切相关，参与病理性新生血管的形成，从而导致多种视网膜血管性病变的发生．Claudin-23是近年来新发现的claudin亚型，研究其在视网膜中的定位、表达及其与视网膜血管病变的关系对相关病变的靶向治疗具有重要的临床意义。目的探讨氧诱导视网膜病变（OIR）小鼠视网膜中claudin-23的动态表达变化。方法将生后第7天（P7）的SPF级C57BL／6J乳鼠与母鼠放入含氧体积分数为75％±3％的密闭饲养箱中饲养5d建立小鼠OIR模型，用50g／L异硫氰酸荧光素一葡聚糖（FITC—dextran）行小鼠眶后注射并行全视网膜铺片，检测成模后缺氧小鼠的视网膜血管情况并与正常小鼠进行对照。采用实时荧光定量PCR（real—timePCR）和Westernblot法检测P12、P17和P25小鼠视网膜中claudin-23mRNA及蛋白的表达，采用real—timePCR法检测elaudin-23mRNA在小鼠视网膜中的动态表达；制备P7小鼠视网膜冰冻切片，用免疫荧光双染法检测claudin-23在正常对照组和OIR模型组小鼠视网膜中的表达定位。结果OIR模型组P17小鼠全视网膜铺片可见视网膜大血管迂曲、扩张，后极部视网膜出现无灌注区，周边部血管网状结构紊乱或消失，出现大量病理性新生血管。正常对照组小鼠随着日龄的增加，视网膜中claudin-23mRNA的表达量增加缓慢，P25时的表达量是P7时的2．3倍，蛋白表达则先增加后减少，在P12出现高峰；OIR模型组小鼠随日龄的增加claudin-23mRNA和蛋白的表达水平均快速增加，claudin-23mRNA在P25的表达量较P7增加12．5倍。正常P7小鼠与OIR模型组P7小鼠claudin-23mRNA和蛋白的表达量比较差异均无统计学意义（P〉O．05），但OIR模型组P12、P17和P25小鼠视网膜中claudin-23mRNA的表达量均明碌高于同龄正常对照组小鼠，差异均有统计学意义（P〈0．05）；P25时，elaudin．23蛋白的表达量�
- 李静肖伟李士清郭凯蔡萌陈晓云黄娟罗燕
- 关键词：视网膜氧诱导视网膜病变
