陈冬
- 作品数：13 被引量：27H指数：4
- 供职机构：中国医科大学附属第一医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金教育部留学回国人员科研启动基金辽宁省教育厅科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学理学轻工技术与工程更多>>
- 流感病毒反向遗传技术合成rH_5/PR8融合病毒的生物学活性被引量：1
- 2010年
- 目的探讨用流感病毒反向遗传技术合成的人工融合病毒株的生物学活性,对人工合成的融合流感病毒株进行全面、系统地研究,对其作为疫苗株的可行性、有效性提供科学依据。方法用流感病毒反向遗传技术合成rH5/PR8减毒病毒株,测定5代病毒与原代病毒HA基因序列,确认外来基因的遗传稳定性;用细胞实验确认其增殖性,用动物实验确认其致病性的强弱。结果人工合成的rH5/PR8融合病毒株除HA外,均来自A/PR/8/34(PR8),HA来自H5N1型强致病性禽流感病毒,第1050碱基从G定点突变成C,导致344号氨基酸从精氨酸变为苏氨酸,并剪除第1054～1065碱基,致使第346～349的碱性氨基酸(RKKR)部位被去除。该病毒的增殖能力可以达到109PFU/ml,外来基因HA5基因遗传稳定、不易变异,达到疫苗株的要求;鸡脑内即静脉接种活病毒实验证实病毒呈现弱毒性。结论用流感病毒反向遗传技术合成的人工融合病毒株有良好的增殖性及基因遗传稳定性,用基因剪切技术对HA的碱性氨基酸连续序列的敲除可以减低病毒的致病性,对鸡呈现弱毒性。
- 乔莹蔡鑫泽温庆华赵连爽韩晓旭陈冬冀敏尚红
- 关键词：流感病毒疫苗
- 不同恶性度膀胱癌细胞系的比较蛋白组学研究
- 2011年
- 目的利用比较蛋白质组学双向电泳技术,观察不同恶性程度和侵袭力的人膀胱移行细胞癌细胞系T24和BIU-87蛋白表达谱的变化。方法人膀胱癌细胞(BIU-87和T24)经培养后提取总蛋白。双向凝胶电泳,经考马斯亮蓝染色后比较两者蛋白图谱寻找差异表达蛋白质。采用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)和蛋白质数据库检索鉴定差异蛋白。结果比较T24和BIU-87的蛋白质斑点发现差异大于2倍的蛋白质点153个,对其中94个差异蛋白斑点进行了质谱鉴定和肽质量指纹图分析。相对于BI-U-87,恶性度高的T24表达上调的蛋白质有Rho GDP-解离抑制因子1、组织蛋白酶D、细胞角化蛋白19、ACTG1蛋白、超氧化物歧化酶、热休克蛋白、ACTB蛋白和硫氧还蛋白4等;表达下调的蛋白有14-3-3δ蛋白、orphan hormone nuclear receptor RORalpha3等。结论人膀胱移行细胞癌T24和BIU-87细胞有153个蛋白质的表达发生变化。深入分析这些差异表达蛋白的功能与调控,有望为寻找恶性程度相关的生物学标记物提供重要的实验依据。
- 都姝妍蔡鑫泽刘楠陈冬姜奕
- 关键词：膀胱移行细胞癌二维凝胶电泳蛋白质组
- 反相高效液相色谱法测定人乳腺癌MCF7细胞中基因组DNA甲基化水平被引量：2
- 2010年
- 目的利用反相高效液相色谱法检测MCF7细胞系中基因组DNA的甲基化水平。方法采用Nano LC(75μm×15 cm,5μm)和Micro LC(1.0 mm×15 cm,5μm)的C18反相色谱柱,以甲醇-醋酸铵缓冲液(pH 5.0)为流动相,使用线性梯度程序,将MCF7细胞中基因组DNA水解产物进行分离,两种体系流速分别是300 nl/min和40μl/min,在273 nm波长处检测,利用外标法分别检测DNA中脱氧胞嘧啶(dC)和甲基化脱氧胞嘧啶(5mdC)含量。结果 MCF7基因组DNA的水解产物,经反相色谱分离得到的峰图有较好的准确性与重复性;DNA水解后的产物为弱保留化合物,且Micro LC分离效果优于Nano LC;乳腺癌细胞MCF7甲基化水平为19.3%,高于正常细胞中基因组DNA甲基化水平。结论成功的将MCF7细胞中基因组DNA水解产物经反相色谱分离;使用Micro LC分离DNA水解后的弱保留产物较佳;MCF7细胞系基因组DNA甲基化水平高于正常细胞。
- 蔡鑫泽乔莹都姝妍刘楠陈冬车睿超姜奕
- 关键词：反相高效液相色谱法基因组甲基化水平乳腺癌
- 食管鳞癌FRA189A处微卫星DNA杂合性丢失被引量：1
- 2001年
- [目的]检测食管癌组织FRA189A处微卫星DNA标记杂合性丢失情况 ,为新的抑癌基因定位提供依据。[方法]应用聚合酶链式反应(PCR) ,结合SSLP -硝酸银染色技术以D18S978位点为遗传标记 ,检测和分析食管癌及癌旁组织中杂合性丢失情况。[结果]26例食管癌中23例为信息个体 ,杂合性丢失频率为60.8%(14/23信息个体) ,染色体定位于18q12.2。[结论]FRA189A处D18S978位点杂合性丢失可能与食管癌的发生有关 ,提示此处可能存在新的抑癌基因。
- 马萍陈洋陈冬李莉任常山
- 关键词：食管肿瘤鳞状细胞癌抑癌基因微卫星DNA杂合性丢失
- 核转录因子κBp65在子宫颈鳞癌中的表达及意义被引量：6
- 2005年
- 目的: 探讨核转录因子κB(NF- κB)p65蛋白在人宫颈鳞癌组织中的表达及意义。方法: 32例人宫颈鳞状细胞癌为实验组,慢性宫颈炎及正常宫颈组织各30例为对照组。应用免疫组织化学方法检测NF- κBp65蛋白在组织中的表达水平。结果:免疫组织化学方法显示32例宫颈癌组织中NF- κBp65蛋白阳性表达率为68. 7.%,慢性宫颈炎组织中NF -κBp65蛋白阳性表达率为6. 66%,而30例正常组织中无表达,实验组与对照组之间差异显著(P<0.05)。结论:NF- κB活化与宫颈癌的发生有关,NF -κBp65可能成为人宫颈癌治疗的新靶点。
- 程大丽陈冬陈浩阳张淑兰
- 关键词：核转录因子ΚB免疫组织化学肿瘤发生
- NZB和NZW小鼠脾淋巴细胞CD48和CD244分子表达及其基因多态性研究
- 2005年
- 目的:了解NZB小鼠中是否存在与其CD8+T细胞增殖相关的CD48和CD244分子表达异常及其机制。方法:利用流式细胞分析技术检测NZB和NZW小鼠脾淋巴细胞表面CD48和CD244分子的表达。利用DNA序列测定进行CD48和CD244基因多态性分析。结果:NZB小鼠活化的CD8+T细胞表面CD48和CD244分子表达水平均高于NZW小鼠。DNA序列分析显示CD48和CD244cDNA序列在NZB和NZW小鼠间不存在多态性,但是NZB小鼠的CD48基因转录起始点上游-119bp处存在5个碱基缺失。结论:NZB小鼠活化的脾淋巴细胞高水平表达CD48和CD244分子可能是其CD8+T细胞增生的原因之一。NZBCD48基因转录调控区域异常可能与其高水平表达CD48分子有关。
- 张庆瑞祁赞梅马凤毛李丽李莉王若梅都姝妍陈洋陈冬姜奕
- 关键词：CD8^+T细胞多态性
- 不同处理技术对流式细胞术检测淋巴细胞免疫表型的影响被引量：4
- 2008年
- 通过比较全血法和提取单个核细胞法两种不同处理方法对淋巴细胞免疫表型检测结果和细胞活率的影响。证明上述两种方法对免疫表型和细胞活率的影响存在明显差异性,本试验将为正确选择所需试验方法提供理论依据。
- 都姝妍郭丽洁陈冬陈洋姜奕
- 关键词：流式细胞术淋巴细胞表型
- 新西兰小鼠血清抗DNA抗体水平的研究
- 2005年
- 目的::研究新西兰小鼠NZB、NZW、及其杂交子代(NZB×NZW)F1小鼠血清抗DNA抗体的水平差异。方法:酶联免疫吸附分析检测新西兰小鼠血清IgG及IgM型抗dsDNA及抗ssDNA抗体滴度。结果:与亲代NZB及NZW相比,其F1子代小鼠IgG型抗dsDNA及抗ssDNA抗体滴度明显增高(P<0.01),IgM型抗dsDNA及抗ssDNA抗体滴度则比NZW增高(P<0.01),比NZB反而降低。结论:致病性IgG型抗DNA抗体是促使新西兰小鼠狼疮发病的主要原因。
- 李丽祁赞梅李莉陈洋陈冬都姝妍王若梅马凤毛张庆瑞姜奕
- 关键词：抗DNA抗体酶联免疫吸附分析
- 乳腺癌患者不同时期细胞免疫水平的变化及意义被引量：5
- 2007年
- 目的:探讨乳腺癌患者术前、术后及化疗后外周血T细胞水平的变化。方法:采用直接免疫荧光标记方法利用流式细胞术(FCM)检测正常人及乳腺癌患者术前、术后及化疗后外周血T细胞亚群的变化。结果:患者术前与正常人相比CD3+、CD4+及CD4+/CD8+明显下降,有显著性差异(P<0.01),CD8+升高有显著性差异(P<0.05);术后较术前CD3+及CD4+/CD8+有显著性升高(P<0.05),CD4+略有升高无显著性,CD8+略有下降也无显著性差异;化疗前后CD3+、CD4+、CD8+及CD4+/CD8+均有所变化但无显著性差异(P>0.05)。结论:在乳癌患者不同时期外周血T细胞水平有一定的变化,可以了解乳腺癌患者的细胞免疫功能进而对判断病情、估计预后有一定的临床意义。
- 都姝妍王霜陈冬陈洋姜奕
- 关键词：乳腺癌细胞免疫流式细胞术
- 快速蛋白液相色谱系统纯化和分析小鼠肝癌细胞热休克蛋白70的研究被引量：3
- 2001年
- 目的 :应用快速蛋白液相色谱 (FRLC)系统建立分离和纯化 615系小鼠肝癌细胞系Hcaf细胞膜上热休克蛋白 (HSP70 )的分离方法。方法 :用经 4 3℃热处理 8h的Hcaf细胞制备裂解液 ,用ConA Sepharose 4B和MonoQ柱进行连续分离 ,所得蛋白经电泳及Western blot进行蛋白分子量及性质鉴定。结果 :纯化蛋白经鉴定为分子量70 0 0 0的HSP70。结论 :用此层析法经FRLP可分离纯度较高的HSP70。
- 马萍孟凡东傅庆国陈冬李莉刘杰
- 关键词：肝癌细胞热休克蛋白70
