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NS5B与HCV负链RNA3′末端特异性结合的分析被引量：1: 2001年; NS5B是RNA依赖性RNA聚合酶 ,在病毒RNA合成过程中起到中心催化酶的作用 .在大肠杆菌中表达和提纯了GST NS5B融合蛋白 ,应用紫外交联试验 (UVcross linking)检测NS5B与丙型肝炎病毒 (HCV)负链RNA 3′末端的结合 ,确定NS5B是否参与HCV负链RNA 3′末端复制体的形成 .NS5B可与HCV负链RNA 3′末端发生结合 ,这种结合存在量效关系 ,比与正链RNA 3′UTRX区的结合强约 10倍 ,超大量的非同源性RNA和蛋白质不能竞争抑制NS5B与负链RNA 3′末端的结合 ,证明这种结合存在特异性 .结果提示NS5B是HCV负链RNA 3′末端复制体的成分之一 .; 黄志明黄开红邓庆丽王巍邵静; 关键词：丙型肝炎病毒 NS5B 负链

PIP融合蛋白在大肠杆菌中的表达纯化及其与PRE特异性的结合被引量：2: 2001年; 目的　表达纯化PIP融合蛋白 ,探讨研究PIP与PRE特异性结合的方法。方法　构建GST PIP融合蛋白表达质粒pGENKS PIP ,表达质粒在大肠杆菌BL2 1中诱导表达GST PIP融合蛋白 ,并用亲和层析柱加以纯化。利用这一融合蛋白通过Northwesternblot、UV crosslinking方法研究PIP与PRE的特异性结合。结果　GST PIP融合蛋白表达质粒pGENKS PIP在大肠杆菌BL2 1中成功地诱导表达了可溶性GST PIP融合蛋白 ,纯化后获得了单一的GST PIP融合蛋白。Northwesternblot和UV crosslinking证实PIP与PRE特异性结合。比较两种方法 ,前者较后者特异性高 ,灵敏度低 ,而后者操作简便。结论　表达和获得纯化的PIP融合蛋白。; 邓庆丽黄志明王巍邵静; 关键词：大肠杆菌纯化 PRE

经树突状细胞递呈的HBcAg特异性细胞毒T淋巴细胞的体外研究被引量：4: 2004年; 目的　从人的外周血树突状细胞 (DC)的抗原递呈方面研究慢性乙型肝炎的发病机制 ,并诱导出针对HBcAg特异性的细胞毒T淋巴细胞 (CTL)。方法　取健康人DC和患者DC ,比较两组的抗原递呈功能是否存在差异。以HBcAg体外冲击致敏DC ,与自体T淋巴细胞共育 ,诱导出HBcAg特异性CTL ;以HepG2细胞为对照靶细胞 ,转染HBVDNA的HepG2 2 15细胞为靶细胞 ,分别测定CTL在效靶比为 2∶1、6∶1和 2 0∶1时对HepG2细胞的非特异性杀伤率及对HepG2 2 15细胞的特异性杀伤率 ,并比较患者组与正常组特异性杀伤率的差异。结果　患者DC的抗原递呈功能(10 99.2 6 7± 2 39.12 ,1374 .8± 36 4 .15 5 ,2 717.78± 15 89.72 )较健康人 (314 7.933± 72 6 .5 7,384 3.0 0 0±10 6 0 .85 ,5 4 86 .86 7± 1790 .6 4 )弱 ;健康组与患者组CTL对HepG2各效靶比的非特异性杀伤作用差异无显著性。健康组与患者组CTL对HepG2 2 15的特异性杀伤作用差异有显著性 ;患者组CTL的活性 (7.1± 4 .33,15 .6 8± 3.3,2 7.6 6± 4 .5 9)较健康组 (2 0 .76± 6 .0 8,33.97± 8.0 0 ,4 9.6 3± 9.4 8)弱。结论　用HBcAg体外负载患者DC ,能诱导出抗原特异性的CTL ,这些CTL能特异性地杀伤相应靶细胞。; 周雨迁邓庆丽詹俊邵静黄志明魏菁智慧; 关键词：HBCAG 特异性细胞毒体外研究

慢性乙型肝炎患者外周血树突细胞的体外扩增及鉴定被引量：1: 2001年; 目的　尝试从慢性乙型肝炎患者外周血扩增培养出大量树突细胞 ,为进一步临床应用树突细胞治疗慢性乙型肝炎提供物质基础。方法　分别取健康人和患者外周血分离培养单核细胞 ,加入rhGM CSF、rhIL 4,经 7天培养后收获即为不完全成熟树突细胞 (DC)。以倒置显微镜观察摄影、透射电镜摄影、流式细胞仪测定表面特异性分子的表达、混合淋巴细胞反应测定功能 ,对DC进行鉴定。结果　第七天记数有明显树突状突起的大个细胞或细胞团 ,产率为 0 2～ 4 5× 10 5/6ml血 ;透射电镜可见细胞表面伸展的突起 ;70 %以上细胞有DC特异性标志CD1a高表达 ,而单核细胞特异性标志CD14表达小于 4% ;能刺激同种异体淋巴细胞强烈增殖 ,随刺激细胞数目的增加 ,其促增殖作用增强 ,P <0 0 1。结论　在本实验条件下 ,从慢性乙型肝炎患者外周血单核细胞可诱导扩增出大量DC。; 周雨迁詹俊邓庆丽黄志清邵静智慧黄志明; 关键词：树突细胞体外扩增

形成丙型肝炎病毒负链复制体的相关蛋白的分析被引量：1: 2002年; 【目的】确定丙型肝炎病毒 (HCV)非结构蛋白NS5B以及肝母细胞瘤株HepG2胞浆提取物中的宿主蛋白与HCV负链RNA 3′末端的特异性结合作用。【方法】用蛋白核酸紫外交联试验分别检测NS5B以及HepG2胞浆提取物中的宿主蛋白与HCV负链RNA 3′末端的结合作用 ,用非同源RNA和非同源蛋白作为竞争物分析这种结合的特异性。【结果】NS5B以及宿主细胞内一约 4 5ku的蛋白质 (简称P4 5 )均可与HCV负链RNA 3′末端特异性结合。【结论】NS5B和P4 5是HCV负链RNA; 黄开红邓庆丽王巍邵静黄志明; 关键词：丙型肝炎病毒蛋白

与丙型肝炎病毒复制中间体3′末端结合的宿主蛋白的研究: 2002年; 宿主细胞蛋白在HCV复制过程中起着重要的作用 .应用蛋白质核酸紫外交联法检测多个细胞株 ,目的是明确是否存在可与HCV复制中间体 3′末端特异性结合的细胞蛋白质 .结果显示 ,在多个细胞株中存在一个分子质量约为 45ku的蛋白质 (命名为 p45 ) ,可与HCV复制中间体 3′末端 131～ 2 78nt结合 ,这种结合可被过量的自身未标记RNA竞争抑制 ,而非同源蛋白和非同源RNA均不能竞争抑制这种结合 .根据计算机RNA二级结构分析推测 ,p45可能特异性结合于HCV复制中间体 3′端的一茎环结构内 .这一结果提示 ,p45在HCV子代RNA复制中可能起着重要作用 .; 邓庆丽黄开红邵静黄志明王巍; 关键词：丙型肝炎病毒宿主蛋白

形成丙型肝炎病毒负链复制体的相关蛋白的分析: 丙型肝炎病毒(HCV)是单链正链RNA病毒,基因组全长为9.3-9.4kb,包括一个开放读框和两端各一非编码区.目前,HCV的复制过程尚未清楚.大多数的研究集中在复制的初期,即正链复制体的形成和负链RNA合成的启动.而负...; 邓庆丽王巍黄开红邵静黄志明; 文献传递

RNA-蛋白质印迹筛选HBsAg转录后调节因子表达克隆被引量：1: 2000年; RNA结合蛋白是基因表达的重要调节因子.RNA蛋白质印迹(Northwesternblot)是近年来国外建立的筛选这类因子的重要方法之一.应用这一方法从肝细胞株HepG2cDNA文库中成功筛选到乙型肝炎病毒表面抗原转录后调节片段互相作用蛋白表达克隆.结果显示:该蛋白与探针结合特异性强,经三轮筛选后,100%克隆为阳性克隆;PCR和EcoRⅠ酶切初步鉴定,编码该蛋白的cDNA长约1kb.; 邓庆丽黄志明邵静黄志清; 关键词：HBSAG PRE PIP

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邵静