辛灵彪
- 作品数：12 被引量：8H指数：2
- 供职机构：天津医科大学基础医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金天津市自然科学基金天津市应用基础与前沿技术研究计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 同义突变SND1慢病毒质粒的构建及回复表达被引量：1
- 2018年
- [目的]构建抵抗shRNA的同义突变SND1慢病毒质粒,并在SND1敲低的卵巢癌细胞系中回复表达SND1。[方法]依据密码子的简并性,针对shRNA识别的序列(TCTCGTCTCAAACTCTATTTG)设计同义突变序列(TAGGTATAACTTTAACCTGCT)并通过重叠延伸PCR的方法将同义突变序列引入SND1的编码序列中,得到recombination SND1(rSND1)目的片段,与pLVX-IRES-Hyg载体连接。测序验证pLVX-FLAG-rSND1质粒序列。pLVX-FLAG-rSND1质粒与包装质粒共转染293T细胞,获得携带FLAG-rSND1的慢病毒毒粒。用慢病毒感染SND1敲低的卵巢癌SKOV3-sh SND1-2细胞株,经潮霉素B筛选后,用Western Blot检测FLAG和SND1的表达。[结果]抵抗shRNA的真核pLVX-FLAG-rSND1重组慢病毒质粒构建成功,可检测到FLAG及SND1的表达。[结论]成功构建了同义突变SND1的pLVX-FLAG-rSND1质粒并在卵巢癌细胞中回复表达,为继续研究SND1蛋白在卵巢癌中的功能奠定了基础。
- 哈传博赵然雷静高茹杨洁辛灵彪
- 关键词：质粒构建重叠延伸PCR慢病毒
- 活细胞内人IGFBP2-3’UTR基因的GFP—MS2荧光系统标记
- 2014年
- 目的利用GFP—MS2系统在活细胞内对胰岛素样生长因子结合蛋白2（insulin-hke growth factor，bindin gprotein2，IGFBP2）mRNA3’非翻译区（3’untranslated region，3’UTR）进行绿色荧光标记，构建pT-／-IGFBP2-3’UTR-24×MS2重组质粒。方法提取HeLa细胞总RNA，以针对IGFBP2-3’非翻译区的特异性片段为反转录引物，反转录出cDNA，并以其为模板，降落PCR法扩增出带有EcoRI和BamHI双酶切位点的1GFBP2—3’UTR目的基因，再利用双酶切法将目的片段连接到psG5载体（启动子为T7）上，构建重组质粒pT-／．IGFBP2-3’UTR；同时。以BglII和BamHI双酶切法从pCR4-24xMS2SL．stable质粒上切下24×MS2结合位点片段并将其插入pT7-IGFBP2-3’UTR，构建重组质粒pT7-IGFBP2-3’UTR-24×MS2；然后将构建的重组质粒pT7-IGFBP2-3’UTR-24×MS2、pMS2．GFP质粒与pERFP-Tudor-SN质粒共同转染人HeLa细胞内，以激光共聚焦荧光显微镜检测IGFBP2—3’UTR的荧光标记情况及应激共定位。结果以酶切质粒法及基因测序法鉴定构建的重组质粒均无误．激光共聚焦结果显示在胞浆中检测到IGFBP2．3’UTR的绿色荧光信号，在细胞受到氧化应激时IGFBP2—3’UTR信号呈颗粒状聚集，且与应激颗粒（stressgranules，SGs）的标志蛋白Tudor-SN呈共定位关系。结论针对IGFBP2—3’UTR的GFP-MS2荧光标记系统质粒构建成功；细胞应激时，ICFBP2-3’UTR被招募至sGs结构中。
- 付雪高星杰张毅史雪彬辛灵彪刘欣于林杨洁何津岩
- 关键词：重组质粒
- SND1转基因小鼠的构建被引量：1
- 2016年
- 目的:构建SND1过表达的转基因小鼠模型。方法:利用对小鼠SND1基因转录本构建SND1过表达载体p Insulator-CAG-3×FLAG-SND1,利用受精卵原核注射技术,将外源线性p Insulator-CAG-3×FLAG-SND1转基因载体注射到受精卵细胞核内,将存活受精卵进行胚胎移植制备SND1转基因小鼠,用PCR、RT-PCR技术鉴定转基因小鼠是否构建成功。结果:成功构建过表达SND1基因的转基因小鼠模型,为进一步研究SND1基因在动物体内的生物学功能奠定基础。
- 左志宇辛灵彪杨洁王鑫廷
- 关键词：转基因小鼠
- SND1转基因小鼠改善高脂饮食诱导的脂肪肝和胰岛素抵抗
- 研究背景和目的： 多功能蛋白 SND1可以在转录水平激活脂肪形成相关基因的表达，并且调控脂肪细胞的分化。但是 SND1在体内与代谢的关系还不清楚。本研究的目的是检测全身过表达 SND1的小鼠对高脂饮食（HFD）诱导的非...
- 辛灵彪
- 关键词：非酒精性脂肪性肝胆固醇胰岛素抵抗
- SND1激活SLUG的表达促进卵巢癌的转移
- 目的：卵巢癌是一种常见的妇科肿瘤，由于缺乏早期诊断的方法以及后期对化疗药物的抵抗，导致卵巢癌的致死率很高.SND1在多种肿瘤中高表达，且与肿瘤的增值和转移关系密切.SND1可以作为转录共激活因子促进下游基因的表达.但是S...
- 辛灵彪赵然雷静杨洁
- 关键词：SLUGEMT卵巢癌
- 一种高表达SND1-FLAG转基因小鼠模型的制备方法
- 一种高表达SND1-FLAG转基因小鼠模型的制备方法。SND1蛋白与哮喘、过敏、结肠癌、肺癌等多种疾病相关。本发明即为针对位于染色体6A3.3的鼠源SND1转基因小鼠构建方法。主要流程：首先构建pInsulator-CA...
- 杨洁高星杰魏民新王鑫廷段中潮辛灵彪
- 文献传递
- SND1激活SLUG的表达促进卵巢癌的转移
- 目的:卵巢癌是一种常见的妇科肿瘤,由于缺乏早期诊断的方法以及后期对化疗药物的抵抗,导致卵巢癌的致死率很高。SND1在多种肿瘤中高表达,且与肿瘤的增值和转移关系密切。SND1可以作为转录共激活因子促进下游基因的表达。但是S...
- 辛灵彪赵然雷静杨洁
- 关键词：SLUGEMT卵巢癌
- 文献传递
- 重组真核质粒pEGFP—C2-hTudor—SN—SN（1～4）的构建及表达
- 2012年
- 目的将人类Tudor—SN（tudor staphylococcal nuclease）蛋白SN（1～4）基因片段分别定向连入pEGFP-C2质粒，使Tudor—SN蛋白SN各功能片段与绿色荧光蛋白在HeLa细胞内融合表达。方法以重组质粒pSG5-Tudor-SN-flag为模板，PCR法扩增出目的基因，利用EcoRⅠ和SalⅠ双酶切法将目的片段连接到pEGFP—C2载体上，再将构建成功的pEGFP-C2-Tudor—SN-SN（1～4）重组质粒转染入HeLa细胞内，以荧光显微镜及Western印迹法检测绿色荧光蛋白与目的蛋白的融合表达情况。结果以单／双酶切及基因测序法鉴定构建的重组质粒均无误，荧光显微镜及Western印迹结果均检测到绿色融合蛋白的表达。结论重组pEGFP-C2-hTudor—SN-SN（1—4）质粒成功构建并表达。
- 辛灵彪高星杰付雪张毅史雪彬陈朴尹洁何津岩杨洁
- 关键词：PEGFP-C2重组质粒融合蛋白
- 过表达和敲除SLUG基因卵巢癌SKOV3细胞稳定株的建立被引量：3
- 2017年
- 目的利用慢病毒载体和改良的CRISPR/Cas9基因编辑系统分别构建过表达和敲除SLUG基因的卵巢癌SKOV3细胞稳定株。方法 (1)以质粒p CMV-Myc-SLUG为模板扩增出HA-SLUG基因,将其连接到慢病毒表达质粒p LVX-IRES-Hyg中。将此重组表达载体p LVX-HA-SLUG通过病毒感染法感染SKOV3细胞(实验组),以相同条件制备p LVX-IRES-Hyg空载体的慢病毒作为阴性对照,Western blotting法检测两组SLUG蛋白表达。(2)将一对能特异结合SLUG基因的sgRNA分别连接到载体PX462中,获得的一对重组质粒通过脂质体法共转染SKOV3细胞,筛选稳定株,挑取单克隆细胞(实验组),用Western blotting法检测SLUG蛋白表达,另设空白对照组,不加任何处理。结果 (1)对挑取的单克隆菌液进行PCR扩增,阳性者提取质粒进行PCR和双酶切,两者验证正确后进行DNA测序鉴定,结果证实重组质粒构建成功。阴性对照组与实验组SLUG蛋白相对表达量分别为0.92±0.02和3.14±0.04,实验组SLUG蛋白表达高于阴性对照组(P<0.01)。(2)挑取4个单克隆细胞进行测定,SLUG蛋白的相对表达量分别为0.07±0.01、0.06±0.01、0.21±0.02、0.20±0.01,空白对照组为0.56±0.03。实验组SLUG蛋白相对表达量低于空白对照组(P均<0.01)。结论过表达和稳定敲除SLUG基因的SKOV3细胞株构建成功,为进一步探讨SLUG在卵巢癌中的作用提供了细胞模型。
- 雷静赵然高茹辛灵彪刘欣
- 关键词：SLUG基因慢病毒载体SKOV3细胞卵巢癌细胞模型
- 人SND1基因慢病毒载体构建及稳定表达SND1蛋白的人卵巢癌SKOV3细胞株筛选被引量：3
- 2016年
- 目的构建人SND1基因慢病毒载体,筛选稳定表达SND1蛋白的人卵巢癌SKOV3细胞株,为探讨SND1基因对卵巢癌的调控作用提供细胞系模型。方法采用PCR法从pCMV-FLAG-SND1质粒中扩增FLAG-SND1基因片段,连接到慢病毒载体表达质粒pLVX-IRES-Hyg中,获得重组慢病毒载体pLVX-FLAG-SND1。以pLVX-FLAGSND1瞬时转染293T细胞48 h,采用Western blotting法检测SND1蛋白表达量。pLVX-FLAG-SND1重组质粒通过与包装质粒共转染293T细胞,获得携带FLAG-SND1的重组慢病毒。以慢病毒感染SKOV3细胞48 h,在细胞培养基中加入1μg/mL潮霉素B,筛选稳定表达SND1蛋白的细胞株,采用Western blotting法检测该细胞株内SND1蛋白表达量。结果重组慢病毒载体经双酶切和基因测序比对鉴定正确。重组慢病毒载体在瞬时转染的293T细胞中SND1蛋白表达量高于野生型SKOV3细胞(P<0.01)。SKOV3细胞经慢病毒感染、药物筛选后获得的稳定表达株中SND1蛋白表达量高于野生型SKOV3细胞(P<0.01)。结论成功构建了SND1基因慢病毒载体pLVXFLAG-SND1,并筛选出稳定表达SND1蛋白的SKOV3细胞株,为进一步明确卵巢癌发生、发展机制奠定了基础。
- 任媛媛雷静赵然辛灵彪苏超高星杰杨洁
- 关键词：慢病毒载体SKOV3细胞卵巢癌
