赵巍
- 作品数：22 被引量：32H指数：3
- 供职机构：青岛大学医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金山东省自然科学基金'泰山学者'建设工程专项更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- MB染色检测PKA调节亚基对烟曲霉萌发孢子活性的影响
- 2017年
- 烟曲霉是一种机会性致病真菌,肺巨噬细胞(AM)通过活性氧物质(ROS)清除萌发的烟曲霉孢子。蛋白激酶A(PKA)参与调节多种生物体内的氧化损伤应答反应。本实验通过亚甲基蓝(MB)染色和再培养试验,检测烟曲霉野生株(WT)与PKA调节亚基(pkaR)缺失株(ΔpkaR)萌发孢子的活性,分析pkaR基因对烟曲霉萌发孢子抗氧化损伤的影响。实验结果表明,ΔpkaR株的萌发孢子,对于氧化压力有更强的抵抗能力,表明pkaR基因参与调节烟曲霉对于氧化损伤的抵抗。
- 张姗姗吴翠娇赵巍邵建业王伟伟牛倩倩王斌
- 关键词：烟曲霉
- HSV-1感染对人星形胶质瘤细胞增殖、凋亡和细胞周期的影响被引量：1
- 2010年
- 目的:研究单纯疱疹病毒1型(Herpes simplex virus,HSV-1)感染对人星形胶质瘤细胞U251增殖、凋亡和细胞周期的影响。方法:以感染复数(MOI)为5的HSV-1感染体外培养的U251细胞,在感染后24h、48h、72h和96h用倒置显微镜观察U251细胞的形态改变;用MTT法、流式细胞术观察HSV-1感染对U251细胞增殖、凋亡和细胞周期的影响。结果:U251细胞在感染24h后开始出现细胞融合,48h后开始出现典型的细胞病变效应(Cytopathic effect,CPE),72h后超过80%的细胞出现CPE,。96h后细胞大部分死亡。②MTT法显示HSV-1感染U251细胞24h、48h、72h及96h的U251细胞OD值均低于对照组(P<0.05)。③HSV-1感染U251细胞12h后凋亡率与对照组无显著差异(P>0.05),感染24h和36h后凋亡率比相应对照组有显著差别(p<0.05)。④HSV感染12h、24h和36h后均可引起U251细胞S期细胞增多和G0/G1期细胞减少,24h后G2/M期细胞比例开始增加。结论:HSV-1能感染体外培养的U251细胞,抑制其增殖,促进其凋亡并影响其细胞周期。
- 王倩李玲于向民王斌白志强钱冬萌宋旭霞赵巍丁守怡
- 关键词：HSV-1U251凋亡细胞周期
- 烟曲霉蛋白激酶A催化亚基对孢子萌发和抗氧化损伤的调节作用被引量：3
- 2010年
- 目的烟曲霉（Aspergillus fumigatus）是一种重要的条件致病性真菌,在免疫受损宿主体内引起侵袭性曲霉病。cAMP-PKA信号通路调控真菌的生长、发育等重要过程。文中检测了烟曲霉野生株（WT株）及蛋白激酶A（protein kinase a,PKA）催化亚基基因突变株（ΔpkaC1株）的孢子萌发曲线、菌株生长、对H2O2的敏感性,分析pkaC1在烟曲霉孢子萌发、抗氧化损伤中的作用。方法WT株和ΔpkaC1株孢子接种于曲霉菌基础培养液（Aspergillusminimal medium,AMM）,观察孢子萌发曲线和菌株径向生长曲线。孢子与不同浓度H2O2作用后涂于AMM上培养,计数残存菌落个数。结果WT株和ΔpkaC1株孢子均于培养4.5 h后开始出现第1个萌发管,ΔpkaC1株孢子萌发1个或1个以上萌发管的萌发动力学降低;ΔpkaC1出现第2个萌发管的时间相对于WT株推迟约1 h,于培养13 h时,WT株100%萌发2个或2个以上萌发管,此时ΔpkaC1株萌发2个或2个以上萌发管的萌发率约为42%。ΔpkaC1株生长缓慢,同时期菌落直径仅为WT株的1/3~1/2。低浓度的H2O2（0.005%~0.050%）处理后,WT株与ΔpkaC1株孢子的存活率差异有显著统计学意义（P〈0.01）;对高浓度H2O2（0.100%~0.500%）,存活率差异无统计学意义（P〉0.05）。结论cAMP-PKA信号通路中PKA催化亚基在烟曲霉孢子萌发和抗氧化损伤中起着调节作用。
- 周秀芝赵巍王斌喻娜娜闫志勇钱冬萌宋旭霞丁守怡
- 关键词：烟曲霉过氧化氢
- 人巨细胞病毒感染诱导U251星形胶质瘤细胞凋亡及其差异蛋白的表达
- 2009年
- 目的分析人巨细胞病毒(HCMV)感染对人星形胶质瘤细胞凋亡的影响及其细胞内差异蛋白的表达。方法以HCMV AD169株感染U251细胞,复制HCMV体外感染模型,通过RT-PCR和免疫细胞化学技术检测HCMV IE蛋白和结构蛋白pp65的表达。用AnnexinⅤ-FITC和PI染色检测细胞凋亡,通过SELDI-TOF质谱分析感染细胞内差异蛋白的表达。结果HCMV感染后6 h,U251细胞经RT-PCR可扩增出242 bp的IE基因条带,感染后3 d,细胞核内有大量IE蛋白表达,核周及细胞浆内有大量pp65蛋白表达。病毒感染后3 d,约47%的细胞产生凋亡。HCMV感染后细胞内Caspase-8和磷脂酶A2的表达明显增加。结论HCMV感染可能通过上调Caspase-8和磷脂酶A2的表达而诱导U251星形胶质瘤细胞产生凋亡损伤。
- 白志强李玲王斌刘志军王海涛钱冬萌闫志勇赵巍宋旭霞丁守怡
- 关键词：人巨细胞病毒凋亡
- 人巨细胞病毒感染及其IE86蛋白对ARPE-19细胞周期的影响被引量：2
- 2010年
- 目的研究人巨细胞病毒(human cytomegalovirus,HCMV)感染ARPE-19细胞后对其细胞周期的影响,观察这种变化与HCMVIE2基因的关系,探讨HCMV感染的发病机制。方法用HCMV感染同步化的ARPE-19作为感染组,同时设模拟感染组为对照组。于感染后第1、2、3、4、5天收获细胞,RT-PCR方法检测HCMV IE mRNA的表达水平,用免疫荧光法检测细胞核内HCMV IE蛋白的表达,Western blot法检测HCMV早期蛋白IE和晚期蛋白pp65的表达。采用PCR方法从质粒pIEP86AD169扩增出IE2片段,构建真核表达质粒pEGFP-N3-IE2,脂质体介导瞬时转染ARPE-19细胞,RT-PCR、免疫荧光法分析IE2基因的表达。流式细胞术检测细胞周期的变化。结果 HCMV IE72、IE86和pp65可分别在病毒感染ARPE-19细胞后第2、3和5天时检测到表达,流式细胞术示感染组在感染第3、4、5天细胞周期的S期细胞比例显著增高,与对照组比较差异均有显著性统计学意义,P(0.05。瞬时转染质粒pEGFP-N3-IE2后细胞周期表现为S期细胞比例显著增高。结论 ARPE-19是HCMV的允许细胞,HCMV可引起ARPE-19细胞周期的改变,这种变化与IE2基因的表达有一定的关系。
- 刘海燕王斌李玲白志强姜光域王海涛钱冬萌赵巍闫志勇丁守怡宋旭霞
- 关键词：人巨细胞病毒ARPE-19细胞周期
- 深部真菌的临床分布与耐药分析被引量：1
- 2015年
- 目的分析掌握本院临床分离出的深部真菌菌群分布及耐药情况,为临床合理应用抗念珠菌药物提供依据。方法回顾性分析青岛市第三人民医院2012至2014年9 875例门诊和住院的感染患者各种临床标本中,经常规培养分离出真菌后,用VITEK-2全自动微生物分析仪鉴定到种;用丹麦Rosco抗真菌药敏纸片扩散法进行药敏试验,以确定其耐药性。结果从9 875份标本中分离出6种237株深部真菌,各类标本的真菌培养阳性率为2.4%(237/9 875份);以白色假丝念珠菌和热带假丝念珠菌为主,分别占70.9%(168/237株)、19.8%(47/237株);其余为近平滑假丝念珠菌[2.1%(5/237株)]、葡萄牙假丝念珠菌[1.3%(3/237株)]、光滑假丝念珠菌[2.5%(6/237株)]、曲霉[3.4%(8/237株)];2012至2014年深部真菌培养检出阳性率分别为1.9%(54/2 798株)、2.4%(76/3 127株)、2.7%(107/3 950株),分别占阳性标本的6.9%(54/781株)、8.1%(76/933株)、8.6%(107/1248株),真菌培养检出阳性率有逐年上升趋势。其中白色假丝念珠菌和热带假丝念珠菌对氟康唑、伊曲康唑、酮康唑耐药率较高,分别为16.1%(27/168株)、14.3%(24/168株)、14.9%(25/168株)和12.8%(6/47株)、19.1%(9/47株)、17.0%(8/47株)。结论临床深部真菌的检出率有逐年上升趋势,以白色假丝念珠菌和热带假丝念珠菌为主,二者对氟康唑、伊曲康唑、酮康唑均具有较高的耐药率,应引起临床关注。
- 程绍云刘泽涛王海燕赵巍
- 关键词：念珠菌耐药率药敏试验
- D2蛋白酶双抗体夹心ELISA定量检测方法的建立被引量：2
- 2010年
- 目的：建立一种定量测定D2蛋白酶的双抗体夹心ELISA方法。方法：用棋盘滴定法确定捕获抗体、检测抗体的最佳工作浓度;绘制标准曲线,确定线性范围、检测限和定量限;检测该方法的准确性（回收率）、精密性和特异性,并与Bradford法检测结果进行比较。结果：包被抗体和捕获抗体的最佳包被效价分别为1∶4 000和1∶5 000;检测的线性范围为（28~1 180）μg/L,检测限为4.6μg/L。经方法学考核,批内、批间变异系数分别为5.64%和7.17%,回收率为92.44%~105.26%,与碱性蛋白酶、蛋白酶K等其他蛋白无交叉反应,与Bradford法检测结果具有良好的相关性。结论：该方法灵敏度高,重复性好,为后期D2蛋白酶规模发酵优化、分离纯化研究提供了定量检测的方法,并为后期药代动力学、临床研究提供了思路和备选方法。
- 苏洁王斌鲁晓晴赵巍闫志勇钱冬萌丁守怡宋旭霞杨丽
- 关键词：ELISA双抗体夹心法
- D2蛋白酶间接ELISA检测方法的建立
- 2010年
- 目的建立D2蛋白酶间接ELISA检测方法,为D2蛋白酶的进一步研究及应用奠定基础。方法以纯化的D2蛋白酶为抗原,免疫新西兰白兔,制备D2蛋白酶多克隆抗体,建立D2蛋白酶间接ELISA检测方法,并进行验证及初步应用。结果D2蛋白酶间接ELISA检测方法的最佳反应条件为:一抗稀释度为1∶64000,二抗稀释度为1∶80000,抗原稀释度为1∶100,饱和包被浓度为1160ng/ml,封闭剂为10%胎牛血清。标准曲线的线性检测范围为18～1160ng/ml。该方法准确性、重复性良好,特异性强、敏感性高,与琼脂扩散试验检测结果的符合率为95.5%。结论已建立了D2蛋白酶间接ELISA检测方法,可用于D2蛋白酶含量的检测。
- 苏洁王斌鲁晓晴赵巍闫志勇钱冬萌丁守怡宋旭霞杨丽刘海燕
- 关键词：间接ELISA多克隆抗体
- HSV-1感染对神经胶质瘤细胞NGF和BDNF表达变化的研究被引量：4
- 2011年
- 目的:探讨单纯疱疹病毒1型(HSV-1)感染时神经胶质细胞内源性神经生长因子(NGF)和脑源性神经生长因子(BDNF)的表达变化。方法:采用RT-PCR法检测HSV-1糖蛋白D(gD)基因扩增,RT-PCR法和Westernblotting法检测正常培养和感染HSV-1的神经胶质瘤(U251)细胞的NGF和BDNF。结果:HSV-1可感染U251细胞;正常U251细胞可表达NGF和BDNF;HSV-1感染U251细胞后,NGF和BDNF在感染后第6小时达高峰,之后随感染时间延长逐渐降低。结论:HSV-1可诱导U251细胞中的NGF和BDNF表达异常。
- 侯云王斌李玲胡明辛晓妮钱冬萌闫志勇赵巍宋旭霞
- 关键词：神经胶质瘤单纯疱疹病毒1型神经生长因子脑源性神经生长因子
- 蜂毒肽/变构hIL-2融合蛋白的原核表达及其对宿主菌生长的影响被引量：2
- 2009年
- 目的构建蜂毒肽(Melittin)与变构hIL-2融合基因原核表达质粒,并检测表达的融合蛋白对宿主菌E.coli生长的影响。方法以质粒pGEX-4T-2/Melittin-IL-2(88Arg)为模板,通过PCR定点诱变为Melittin-IL-2(88Arg,125Ala),将PCR产物和pET-15b载体分别经双酶切后连接,构建重组表达质粒pET-15b/M-IL-2(88Arg,125Ala),转化E.coliBL21(DE3),IPTG诱导表达。SDS-PAGE及ELISA分析表达产物;检测诱导不同时间重组菌的A600值,绘制生长曲线,并进行活菌计数。结果PCR扩增的目的片段长542bp,重组表达质粒测序分析证明目的基因如预期突变;ELISA可检测到目的蛋白表达,但表达量较低;SDS-PAGE分析未见目的条带;诱导表达4h,重组菌A600值由0.8下降至0.6;诱导2h,活菌计数由108个/ml降至104个/ml。结论已成功构建了原核表达质粒pET-15b/M-IL-2(88Arg,125Ala),表达的融合蛋白可能对宿主菌具有毒性,从而杀伤宿主菌。
- 郑旭鲁晓晴宋卫青赵巍闫志勇钱冬萌丁守怡宋旭霞徐莉莉李鹏王斌
- 关键词：免疫毒素蜂毒肽白细胞介素-2原核表达
