钱冬萌
- 作品数：172 被引量：342H指数：9
- 供职机构：青岛大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金山东省自然科学基金青岛市科技发展计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学文化科学更多>>
- 抑制人巨细胞病毒即刻早期基因的siRNA及其应用
- 本发明涉及一种生物医药技术领域，具体涉及一种抑制人巨细胞病毒即刻早期基因的siRNA及其应用。本发明所述的siRNA分子包括核苷酸序列正义链和反义链，其中正义链的序列如序列表SEQ ID NO：1所示，反义链的序列如序列...
- 胡明王斌李环廷钱冬萌邓文帅马俊伟张丙旭李佳文
- HSV-1感染对人星形胶质瘤细胞增殖、凋亡和细胞周期的影响被引量：1
- 2010年
- 目的:研究单纯疱疹病毒1型(Herpes simplex virus,HSV-1)感染对人星形胶质瘤细胞U251增殖、凋亡和细胞周期的影响。方法:以感染复数(MOI)为5的HSV-1感染体外培养的U251细胞,在感染后24h、48h、72h和96h用倒置显微镜观察U251细胞的形态改变;用MTT法、流式细胞术观察HSV-1感染对U251细胞增殖、凋亡和细胞周期的影响。结果:U251细胞在感染24h后开始出现细胞融合,48h后开始出现典型的细胞病变效应(Cytopathic effect,CPE),72h后超过80%的细胞出现CPE,。96h后细胞大部分死亡。②MTT法显示HSV-1感染U251细胞24h、48h、72h及96h的U251细胞OD值均低于对照组(P<0.05)。③HSV-1感染U251细胞12h后凋亡率与对照组无显著差异(P>0.05),感染24h和36h后凋亡率比相应对照组有显著差别(p<0.05)。④HSV感染12h、24h和36h后均可引起U251细胞S期细胞增多和G0/G1期细胞减少,24h后G2/M期细胞比例开始增加。结论:HSV-1能感染体外培养的U251细胞,抑制其增殖,促进其凋亡并影响其细胞周期。
- 王倩李玲于向民王斌白志强钱冬萌宋旭霞赵巍丁守怡
- 关键词：HSV-1U251凋亡细胞周期
- 狂犬病毒核蛋白在大肠杆菌中的克隆及高效表达
- 2007年
- 目的构建原核表达系统对狂犬病毒（RV）CVS株的核蛋白（NP）进行表达，并对其进行初步的血清学鉴定。方法以重组质粒Teasy—RVNP为模板，利用PCR方法扩增狂犬病毒（RV）CVS株核蛋白（NP）的DNA片段，并重组入原核高效表达载体PET-15b。用酶切电泳验证重组结果的正确性；并通过测序检查质粒重组后序列有无变化。在大肠杆菌BL21中进行表达。结果SDS-PAGE电泳结果表明，在51KDa处有一条蛋白表达带Western-blot分析证明，51KDa蛋白带可与抗体血清发生特异性反应。结论成功构建了PET-15b，NP原核表达载体，表达产物为狂犬病毒核蛋白，为生产纯度高且价廉的RVNP抗原奠定了基础。为制备测定RVNP抗体的免疫诊断试剂提供了条件。
- 王宏唐青王斌钱冬萌闫志勇丁守怡宋旭霞刘海婷刘明军
- 关键词：狂犬病毒核蛋白基因表达
- 与TLRs通路相关的炎性反应因子在大肠癌中的表达及意义被引量：1
- 2014年
- 目的探讨与Toll样受体(Toll-like receptors,TLRs)通路相关的炎性反应因子在大肠癌中的临床意义。方法收集56例大肠癌组织和36例结肠腺瘤组织,以癌旁正常肠黏膜组织为对照,应用免疫组织化学法检测TLR2、核因子κB(nuclear factorκB,NF-κB)及白细胞介素8(interleukin 8,IL-8)的表达情况,并分别找出与大肠癌临床病理特征的相关关系。结果在大肠癌组织、癌旁正常组织及结肠腺瘤组织中TLR2蛋白的阳性表达率分别为71.4%、42.9%、58.3%,NF-κB的阳性率分别为78.6%、46.4%、83.3%,IL-8阳性率分别为75.0%、46.4%、72.2%,3种组织中的表达差异均具有统计学意义(均P<0.05);大肠癌组织中NF-κB的表达与TLR2及IL-8密切相关(P<0.05);此外,大肠癌组织中TLR2的表达与分化程度、有无淋巴结转移及TNM分期相关(P<0.05),NF-κB及IL-8的表达与脉管受侵、有无淋巴结转移及TNM分期相关(P<0.05)。结论 TLRs通路介导的慢性炎性反应因子的高表达与大肠癌的临床病理特征密切相关,提示TLRs信号通路在大肠癌的发生、发展中有重要的作用。
- 李绪彤王斌钱冬萌卢琳胡明
- 关键词：TOLL样受体白细胞介素8
- 胚胎停育患者72例胎儿绒毛组织CMA检测结果分析被引量：1
- 2021年
- 目的通过对72例早孕期胚胎停育患者的胎儿绒毛组织进行染色体微阵列(CMA)检测,对检测结果进行分析,探讨胚胎停育和染色体结果异常的相关性。帮助患者了解导致胚胎停育的影响因素,及由胚胎停育带来的危害性。以便对患者再次生育进行指导。方法收集2017—2020年就诊于日照市妇幼保健院产前诊断中心的孕妇流产组织样本一共72例,年龄20~43岁(平均年龄32.0岁),比较<35岁组和≥35岁组染色体异常比率的差异,对检测结果进行统计及综合分析。结果两组样本均采用CMA检查技术进行检测,胚胎停育病例中低龄组和高龄组染色体异常的检出率分别是67.3%和73.9%,将两组样本的染色体异常比率进行比较,P>0.05,差异不具有统计学意义,失败率分别为6.1%和8.7%。<35岁组染色体异常中16三体和X单体占比最多分别达到14.3%和10.20%。≥35岁组染色体异常占比最多的是X单体,占比为13.00%,其他异常种类占比较分散,这种情况可能与高龄组样本数量较少有一定的关系,样本数量的扩充可能更有代表性。就所有样本来看,染色体异常率69.4%,实验失败率6.9%。结论染色体数目异常是胚胎停育的主要病因,不同染色体异常发生率在高龄组与低龄组中的分布不存在差异。
- 宋振龙钱冬萌王斌
- 关键词：胚胎停育染色体异常
- HCMV感染对恶性胶质瘤U87细胞迁移及侵袭能力的影响
- 2016年
- 研究人巨细胞病毒(HCMV)感染对恶性神经胶质瘤U87细胞迁移及侵袭能力的影响。采用HCMV(MOI=5)感染神经胶质瘤U87细胞,Transwell体外迁移实验、Transwell体外侵袭实验检测HCMV感染对U87细胞迁移侵袭能力的影响;Western-blot检测肿瘤迁移、侵袭的标志性蛋白局部粘着斑激酶(FAK)及pTyr397FAK的表达变化。Transwell结果显示,HCMV感染U87细胞后迁移侵袭到小室膜下的细胞数量明显高于未感染组(P<0.05);Western-blot结果显示,HCMV感染组及对照组均出现FAK、pTyr397FAK蛋白的表达;HCMV感染组pTyr397FAK蛋白相对表达量高于对照组(P<0.05)。HCMV感染U87细胞通过促进FAK,Tyr397的磷酸化而促进胶质瘤U87细胞的迁移及侵袭。因此,抑制HCMV感染细胞后的FAK蛋白的磷酸化可以成为恶性胶质瘤预防及治疗的新靶点。
- 周睿钱冬萌王斌华晓敏胡明陈豪
- 关键词：人巨细胞病毒迁移
- 干扰素治疗慢性乙型肝炎病人HBV-DNA的实时FQ-PCR检测及其意义被引量：1
- 2005年
- ①目的探讨实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)定量检测乙型肝炎病毒DNA(HBV-DNA)对干扰素(IFN)治疗慢性乙型肝炎(CHB)疗效预测及评价的价值.②方法21例CHB病人,在治疗前、治疗过程中第1～6个月、疗程结束后随访6和12个月共9个时间点分别取血,用FQ-PCR定量检测HBV-DNA、放免法定量检测HBeAg.③结果用药后第1～5个月,HBV-DNA载量逐月下降(H=137.50,q=4.68～14.04,P均＜0.01);其后不再下降.治疗前血清HBV-DNA与HBeAg和谷丙转氨酶(ALT)呈高度正相关(r=0.719、0.492,P＜0.05),治疗期间及随访过程中各时间点HBV-DNA与ALT呈负相关(r=-0.259～-0.057,P＜0.05),与HBeAg呈低度正相关(r=0.014～0.138,P＜0.05).④结论FQ-PCR以其高度的敏感性及简便、快速、准确而成为目前HBV-DNA定量检测的首选方法;在应用IFN治疗CHB前,应根据血清HBV-DNA拷贝数和其他预测因子慎重选择病例,可以明显提高疗效.
- 邹红霞张文卿钱冬萌
- 关键词：干扰素聚合酶链反应
- 沙蚕消化道细菌D2胞外蛋白酶的分离纯化及其性质被引量：8
- 2008年
- 目的分离纯化沙蚕消化道菌D2胞外蛋白酶,并对其性质进行分析。方法收集48 h发酵液上清,经80%饱和硫酸铵沉淀、DEAE-Sepharose阴离子交换层析、Superdex G-75凝胶过滤层析逐步纯化D2蛋白酶,分析其酶学性质,并用ESI-MS/MS测定其酶解后的部分氨基酸序列。结果经纯化,得到电泳纯的D2蛋白酶,纯化倍数为4.9倍,活性回收率为33%,相对分子质量约42 000,纯度大于99%;最适作用温度为60℃,最适pH为9,在pH6-11及0-60℃具有较好的稳定性,水解酪蛋白的Km值为2.44 mg/ml;Cu2＋、Ca2＋、Mg2＋、K＋等金属离子对酶活力有明显促进作用,EDTA和PMSF对酶活力有强烈抑制作用;该酶对尿素、SDS、DTT等变性剂有较好的耐受性,其两个内部肽段经质谱测序,序列分别为AHGFLPLTK和APSATG-GSALYPLEFVVGK。结论该酶为一高温碱性丝氨酸蛋白酶,具有较高的工业开发价值和较大的应用潜力。
- 代玉梅闫志勇王斌钱冬萌宋旭霞丁守怡刘明军张艳丽
- 关键词：消化道蛋白酶
- 人巨细胞病毒感染对人神经干细胞定向星形胶质细胞分化过程中Notch相关信号分子表达的影响被引量：6
- 2010年
- 目的人巨细胞病毒（human cytomegalovirus,HCMV）感染可抑制神经干细胞（neural stem cell,NSC）的增殖和分化,Notch信号对NSC的增殖和分化具有重要的调控功能。文中研究HCMV感染对人NSC向星形胶质细胞分化过程中Notch信号相关分子Notch1~3、Jagged（JAG）1、delta-like（DLL）1及早老素（presenilin,PS）1表达的影响。方法体外分离培养海马NSC,并诱导其向星形胶质细胞分化。同时以感染复数（multiplicity of infection,MOI）为5的HCMV AD169株感染NSC,分别在感染后0、1、3、5、7 d收获细胞,用实时RT-PCR法检测细胞内Notch1-3及其受体JAG1、DLL1的转录水平,Westernblot法检测Notch1细胞内段（Notch 1 intracellular domain,NICD）含量的变化。结果未分化状态的NSC含有大量Notch1NICD,Notch1-3、JAG1、DLL1mRNA呈高表达。诱导分化1d后,Notch各受体、配体mRNA表达均显著下降,3 d后表达回升,至第7天显著升高且可检出大量激活的NICD。HCMV感染组细胞在诱导分化1 d后Notch相关受体、配体mRNA水平亦明显下降,与对照组相比Notch1、Notch2和DLL1的表达更少。在以后各个时间点Notch相关受体、配体mRNA水平均低于对照组。PS1的表达仅在1 d时低于对照组。病毒感染7 d后,细胞内NICD含量明显低于对照组。结论HCMV感染可抑制Notch相关受体、配体的表达与活化,Notch信号异常表达参与HCMV感染所致NSC分化和增殖异常。
- 李玲白志强李鹏刘志军王海涛刘海燕姜光域宋旭霞钱冬萌闫志勇丁守怡王斌
- 关键词：神经干细胞人巨细胞病毒
- 烟曲霉蛋白激酶A催化亚基对孢子萌发和抗氧化损伤的调节作用被引量：3
- 2010年
- 目的烟曲霉（Aspergillus fumigatus）是一种重要的条件致病性真菌,在免疫受损宿主体内引起侵袭性曲霉病。cAMP-PKA信号通路调控真菌的生长、发育等重要过程。文中检测了烟曲霉野生株（WT株）及蛋白激酶A（protein kinase a,PKA）催化亚基基因突变株（ΔpkaC1株）的孢子萌发曲线、菌株生长、对H2O2的敏感性,分析pkaC1在烟曲霉孢子萌发、抗氧化损伤中的作用。方法WT株和ΔpkaC1株孢子接种于曲霉菌基础培养液（Aspergillusminimal medium,AMM）,观察孢子萌发曲线和菌株径向生长曲线。孢子与不同浓度H2O2作用后涂于AMM上培养,计数残存菌落个数。结果WT株和ΔpkaC1株孢子均于培养4.5 h后开始出现第1个萌发管,ΔpkaC1株孢子萌发1个或1个以上萌发管的萌发动力学降低;ΔpkaC1出现第2个萌发管的时间相对于WT株推迟约1 h,于培养13 h时,WT株100%萌发2个或2个以上萌发管,此时ΔpkaC1株萌发2个或2个以上萌发管的萌发率约为42%。ΔpkaC1株生长缓慢,同时期菌落直径仅为WT株的1/3~1/2。低浓度的H2O2（0.005%~0.050%）处理后,WT株与ΔpkaC1株孢子的存活率差异有显著统计学意义（P〈0.01）;对高浓度H2O2（0.100%~0.500%）,存活率差异无统计学意义（P〉0.05）。结论cAMP-PKA信号通路中PKA催化亚基在烟曲霉孢子萌发和抗氧化损伤中起着调节作用。
- 周秀芝赵巍王斌喻娜娜闫志勇钱冬萌宋旭霞丁守怡
- 关键词：烟曲霉过氧化氢
