范雄伟
- 作品数：18 被引量：14H指数：2
- 供职机构：湖南师范大学生命科学学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金湖南省自然科学基金国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学文化科学更多>>
- 利用生物信息学研究Tgfβ信号通路在人类结直肠癌发生发展中的作用
- 2015年
- 目的:系统性研究经典Tgfβ信号通路各成员,在人类早期结直肠癌组织中,转录水平上的表达差异,以探索Tgfβ信号通路在人类结直肠癌发生中作用机制。方法:利用生物信息学手段,在GEO数据库中下载符合纳入标准的早期人类结直肠癌芯片结果,通过Ultral Edit软件实现探针号和基因名的转换以建立全转录本表达数据表;通过KEGG信号通路图谱选择Tgfβ信号经典通路待测分子,统计学分析各待测分子在正常组癌症组中的表达差异。结果:在GEO数据库中下载和获得符合纳入标准的早期人类结直肠癌结直肠癌芯片12组基因芯片结果,对Tgfβ信号通路及其旁路共27个进行表达差异分析,其中表达水平上调的分子4个,下调的基因3个,具有或接近显著性意义。结论:在直肠癌发生过程中,Smads分子的表达下降阻断经典的Tgfβ信号的抗肿瘤作用,同时配体分子和受体分子的广泛上调可能刺激旁路分子的激活从而导致肿瘤的发生。
- 胡海星张仕超朱旋范雄伟
- 关键词：生物信息学直肠癌
- ZNF425基因抑制急性T淋巴细胞白血病细胞的凋亡被引量：2
- 2019年
- 为了解锌指(Zinc finger,ZNF)基因在癌症发生中的作用,利用生物信息学在CCLE数据库中分析得到ZNF425在白血病细胞系中存在高表达;在COSMIC和ICGC数据库中发现ZNF425在癌症患者的造血和淋巴组织中发生突变,并且表达存在差异。在急性T淋巴细胞白血病Jurkat细胞系瞬时过表达ZNF425,能抑制Jurkat细胞凋亡但Jurkat的细胞周期却不受影响,Western Blot检测发现过表达ZNF425导致ERK活化受到抑制。本研究结果首次揭示了ZNF425在血癌细胞中的功能,可能通过影响癌症细胞的凋亡调节癌症的发生。
- 朱双丽刘志强刘文邦江志钢林礼梁积峰陈宇王跃群范雄伟李淑均吴秀山
- 关键词：生物信息学细胞周期
- 心脏高表达基因ZNF425在肺癌中功能的探究被引量：1
- 2020年
- 为研究ZNF425与肺癌之间的关系,先利用生物信息学的方法研究ZNF425与肺癌的相关性。基于癌症和肿瘤基因图谱(TCGA)数据库、癌症和正常基因表达谱公共数据库(GEPIA)中ZNF425与肺癌两种亚型肺腺癌(LUAD)和肺鳞状细胞癌(LUSC)的数据进行后期运算分析,发现在癌组织中ZNF425表达降低,这种现象在肺癌Ⅲ期尤为明显。同时数据显示ZNF425高表达患者生存率更高。再利用人类肺癌样本免疫组化证实了生物信息学的分析结果,与癌旁组织相比,Ⅰ,Ⅱ,Ⅲ期癌症组织中的ZNF425显著下调。最后,构建ZNF425过表达质粒在肺癌A549细胞系瞬时过表达ZNF425后,WB显示A549细胞中的JNK和P38活性受到抑制。因此,推测ZNF425可能具有抑制早中期肺癌的功能,而且这种能力与MAPK信号通路具有相关性。
- 林礼揭雨婷刘凤萍王志宏吴星瑶张雨璐邓璐瑶刘帆肖梓淇丁浩东刘超范雄伟袁婺洲
- 关键词：肺癌MAPK信号通路
- 肥大软骨细胞特异性表达Cre重组酶转基因小鼠的建立被引量：2
- 2009年
- 肥大软骨细胞是软骨细胞的终末分化形式,在软骨内成骨过程中发挥十分关键的作用。为了研究肥大软骨细胞在骨骼发育过程中的功能,文章构建了在8.2 kb小鼠X型胶原基因(Coll0a1)启动子控制下表达Cre重组酶的转基因小鼠品系(Coll0a1(8.2)-Cre)。采用显微注射法将11.5 kb的转基因片段导入小鼠基因组,共注射受精卵328枚,获得子代鼠51只,经PCR基因型鉴定有3只在基因组上整合有Cre重组酶基因。PCR检测发现Coll0a1(8.2)-Cre转基因在含有肥大软骨细胞的组织中表达。为了检测Cre重组酶表达的强度和组织特异性,转基因小鼠与ROSA26报告小鼠交配,子代ROSA26;Coll0a1(8.2)-Cre双转基因小鼠LacZ染色检测的结果显示,Cre重组酶在所有的肥大软骨细胞中表达。原位杂交的结果证实Coll0a1(8.2)-Cre转基因表达在肥大区的上端。通过对比发现Coll0a1(8.2)-Cre转基因表达的组织特异性和强度均优于之前我们构建的Coll0a1(1.0)-Cre转基因品系。以上结果表明,建立的肥大软骨细胞特异性表达Cre重组酶的转基因小鼠品系可以作为一种遗传学工具,介导目的基因在肥大软骨细胞中的敲除。
- 侯宁杨冠范雄伟吴秀山杨晓
- 关键词：CRE重组酶转基因小鼠组织特异性
- 甲醛溶液浸泡的人类组织样本基因组DNA的提取方法与质量鉴定
- 2022年
- 甲醛溶液浸泡的人类组织样本很多情况下是可遇不可求的珍贵资源,而其DNA的提取是一大难题。本文分别使用改进的甲醛溶液浸泡样本基因组DNA提取方法以及通用型基因组DNA提取试剂盒,对四份不同时间固定的福尔马林浸泡的人类胚胎皮肤和肌肉的样本进行基因组DNA提取。使用紫外分光光度计鉴定所提取DNA的纯度和质量浓度,DNA溶液点样进行琼脂糖凝胶电泳及成像,结果显示,改进的提取方法所得基因组DNA的质量浓度和纯度均优于通用型基因组DNA提取方法。以提取所得的基因组DNA模板进行PCR扩增,电泳结果显示,改进的提取方法所提取的基因组DNA有更好的PCR扩增效果。本研究为甲醛溶液浸泡的珍贵样本的基因组DNA的提取提供了方法指导和改进方向的参考。
- 杨博宇蔡毅孙鲁宁栾泽东庞文艳吴秀山范雄伟江志钢
- 关键词：DNA提取PCR检测琼脂糖凝胶电泳
- 小鼠LRRC10腺病毒载体构建及其在心肌细胞中的表达
- 2014年
- 目的:构建含有小鼠Lrrc10(Leucine-rich Repeat Containing protein10)基因的重组腺病毒表达载体。方法:设计小鼠Lrrc10特异性引物,以小鼠cDNA为模板,通过PCR扩增出mLrrc10的编码区,并引入HA标签蛋白和SalΙ酶切位点。该片段经凝胶电泳纯化后插入pMD-18T载体。测序后,用SalΙ和Hind III酶切,将目的片段亚克隆至pAd-track-cmv穿梭载体中。用PmeΙ线性化后,用100 ng转化细菌BJ5183,在细菌内同源重组后得到pAd-Lrrc10质粒。pAd-Lrrc10经PacⅠ线性化后用LipofectamineTM 2000转染293A细胞,包装得到含Lrrc10基因的病毒重组子。将病毒重组子在293A细胞中扩增后,反复冻融得到滴度较高的含Lrrc10的病毒液。将收集的病毒液感染心肌细胞,绿色荧光观察GFP、免疫印迹检测Lrrc10-HA蛋白的表达。结果:用病毒液感染原代心肌细胞,24小时后在荧光显微镜下可观察被感染的细胞发出绿色荧光,提取心肌细胞总蛋白,Western可检测到Lrrc10-HA融合蛋白的表达。结论:小鼠Lrrc10腺病毒载体构建成功,并可将编码Lrrc10-HA的目的片段导入心肌细胞中表达。
- 周作琼彭夕洋肖丽娜李佑锋彭浩吴秀山范雄伟李永青
- 关键词：腺病毒载体心肌细胞
- FHL2基因异位表达对肺癌细胞的影响被引量：1
- 2019年
- 依据细胞的全能性,心肌细胞中的高表达基因可能对细胞增殖具有一定的抑制作用。FHL2作为心脏高表达的基因,为证实其对癌细胞增殖具有一定的抑制作用,通过COSMIC网站对FHL2基因进行生物信息学、统计学分析,发现其与肺癌的发生有一定的相关性;采用流式细胞术检测过表达FHL2基因的A549细胞的表型,并进一步通过蛋白免疫印迹检测相关的周期蛋白调控因子,结果表明,在A549细胞中过表达FHL2基因会使细胞周期阻滞,伴随着G1/S检验点的相关蛋白因子的表达变化。因此,心脏高表达基因FHL2可能是通过调节细胞周期蛋白阻碍A549细胞的增殖,从而达到对肺癌的发生发展的阻碍作用。
- 刘志强朱双丽花瑞江志刚林礼梁积峰陈宇温瑶王跃群刘作良吴秀山范雄伟
- 关键词：生物信息学细胞周期流式细胞术蛋白免疫印迹
- POPDC2在肺癌中的功能探究被引量：1
- 2021年
- 为揭示POPDC2与肺癌发生之间的关系,先利用癌症基因组图谱(TCGA)数据库分析POPDC2在肺腺癌(lung adenocarcinoma,LUAD)和肺鳞状细胞癌(pulmonary squamous cell carcinoma,LUSC)中的表达情况,再使用实验室早期构建的pCMV-Tag2B-POPDC2质粒,在人类肺腺癌肺泡基底上皮细胞A549细胞系中过表达POPDC2,采用流式细胞检测细胞凋亡水平,并通过免疫印迹检测POPDC2对细胞凋亡和MAPK信号通路相关基因表达水平的影响。结果显示,POPDC2在癌组织的mRNA表达显著降低,POPDC2过表达显著增加A549细胞的凋亡百分比,凋亡相关基因p53和自噬相关基因beclin1和LC3A/B的蛋白水平表达上调。信号通路检测分析发现,过表达POPDC2的A549细胞中,P38和JNK的蛋白磷酸化水平升高。结果提示POPDC2具有促进肺癌细胞凋亡的功能,POPDC2在肺癌中的表达下降说明其可能参与肺癌的发生。本研究为临床诊断和干预肺癌的发生提供了新的分子靶标。
- 梁积峰温瑶杨博宇林礼范雄伟张凯李芳
- 关键词：肺癌细胞凋亡MAPK信号通路
- 心肌特异性Hole转基因小鼠模型的构建与鉴定
- 2013年
- 目的:建立在小鼠心肌细胞中特异性过表达Hole转基因小鼠。方法:构建心肌特异性过表达Hole的转基因载体,显微注射导入小鼠受精卵,通过胚胎移植,获得转基因首建者小鼠。利用PCR检测Hole基因整合情况,并通过实时定量PCR检测Hole基因过表达效率。结果:PCR检测发现有6只小鼠在其基因组上整合有Hole载体基因。实时定量PCR结果显示,在心脏组织中Hole基因的转录本表达明显升高。结论:成功建立了在小鼠心肌细胞中特异性过表达Hole转基因小鼠,为研究Hole基因在心脏发育与相关疾病中的功能及机制提供了动物模型。
- 徐伟周军媚江志刚刘明范雄伟王跃群吴秀山
- 关键词：HOLEGENE心肌细胞心脏小鼠转基因
- 心肌肥厚中的第一道防线——抵御心脏疾病发生的第一类抑制因子
- 众所周知,心肌细胞在病理肥大过程中,存在着胚胎型转化。但是在心肌肥大的过程当中,人们从来没有把细胞类型转化上升到一个理论的高度去理解疾病的发生。虽然过去人们对心肌肥厚中胚胎期基因的重新激活十分重视,并认为这些基因的重新激...
- 范雄伟
- 关键词：心肌肥大启动子
- 文献传递
