盛晔
- 作品数：12 被引量：26H指数：4
- 供职机构：苏州大学医学部基础医学与生物科学学院更多>>
- 发文基金：苏州市科技支撑计划项目国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生轻工技术与工程更多>>
- SpltMNPV日本分离株gp41的克隆表达及gp41和ph的进化分析被引量：4
- 2006年
- 从斜纹夜蛾核型多角体病毒(Spodopteralituramulticapsidnucleopolyhedrovirus,SpltMNPV)日本分离株(C3)基因组中克隆了gp41基因。该基因编码区含993bp核苷酸,编码分子量为36.9kDa的多肽。将该基因克隆至原核表达载体pET28a,经IPTG诱导后在大肠杆菌BL21(DE3)中获得了表达。应用CLUSTAL程序分析表明,SpltMNPV日本株(C3)gp41的核苷酸序列和氨基酸序列与SpltMNPV中国G2株相似性最高,均达99.9%。用MEGA分别构建了基于gp41和ph的聚类分析图和分子进化树,发现它们具有相似的拓扑结构。将这两个基因序列结合在一起构建进化树,该树的结构与基于gp41的进化树相似。突变率分析显示gp41的突变率高于ph,这意味着在杆状病毒进化过程中,gp41和ph面临不同的选择压力。
- 胡兆丽朱江盛晔王文兵李新平沈颂东
- 关键词：斜纹夜蛾核型多角体病毒GP41
- 斜纹夜蛾核型多角体病毒日本株pif-2基因的克隆及原核表达被引量：1
- 2010年
- 为研究斜纹夜蛾核型多角体病毒(Spodoptera litura multicapsid nucleopoledrovirus,SpltMN-PV)侵染规律,根据SpltMNPV中国株(G2)ORF135基因序列设计引物,经PCR扩增,从SpltMNPV日本株(B)基因组中克隆了pif-2基因。核苷酸序列分析表明,该基因是甜菜夜蛾核型多角体病毒(Spodoptera exigua nucleopoledrovirus,SeMNPV)pif-2的同源物,读码框含1278 bp,编码425个氨基酸的蛋白质,推定分子量为48.6 kD。与其他杆状病毒的同源物比对显示,SpltMNPV-JP-B PIF-2蛋白中14个Cys残基高度保守。联配分析表明,SpltMNPV-JP-B pif-2的核苷酸序列与其他13种核型多角体病毒的同源性有较大差异。将pif-2克隆至原核表达载体pET32a(+),经IPTG诱导后在大肠杆菌BL21中获得了融合表达,SDS-PAGE分析表明在约69 kD处有特异性表达条带,经Western blot验证该蛋白即为融合表达的目的蛋白。
- 胡贵玉王文兵盛晔黄光镁石瑞英金玉婷朱江
- 关键词：斜纹夜蛾核型多角体病毒原核表达
- 斜纹夜蛾核型多角体病毒日本株ie0、ie1基因和25k基因结构和功能的初步研究
- 斜纹夜蛾核型多角体病毒(Spodoptera litura multicapsid：nucleopolyhedrovirus，SpltMNPV)属NPV科A亚群。国内于1972年在广州地区首次从野外死亡的斜纹夜蛾虫体分离...
- 盛晔
- 关键词：斜纹夜蛾多角体病毒细胞凋亡基因结构
- 文献传递
- 斜纹夜蛾核型多角体病毒Ⅱ型（SpltMNPV Ⅱ）BV、ODV组成型蛋白质谱分析和4种ORF的基因分析
- 斜纹夜蛾(Spodoptera litura, Spli)属鳞翅目夜蛾科,是一种杂食性农业和林业害虫,主要危害甘蓝、白菜、藕、芋、蕹菜、苋菜、马铃薯、茄子、辣椒、番茄、豆类、瓜类以及葱韭等。由于斜纹夜蛾的食性杂、世代重叠...
- 盛晔
- 关键词：斜纹夜蛾核型多角体病毒BV基因分析
- 文献传递
- 斜纹夜蛾核型多角体病毒ⅡORF56基因的序列分析及原核表达被引量：1
- 2010年
- 对斜纹夜蛾核型多角体病毒ⅡORF56基因的序列特征及原核表达进行了初步研究。ORF56基因编码区全长675 bp,编码224个氨基酸,预测编码蛋白分子量25.9 ku。序列分析显示,ORF56具有典型的晚期启动子特征序列GTAAG,推导的氨基酸序列中含有13个磷酸化位点和3个N-糖基化位点。PCR扩增获得该基因,克隆到融合表达载体pET-32 a(+)中,在大肠杆菌BL21中诱导表达。用纯化的融合蛋白免疫家兔,制备了多克隆抗体,为深入研究Sp ltMNPVⅡORF56的结构与功能提供基础。
- 石瑞英金玉婷盛晔王文兵朱江
- 关键词：斜纹夜蛾核型多角体病毒原核表达
- 斜纹夜蛾核型多角体病毒ⅡORF146基因的克隆、表达与启动子活性分析被引量：2
- 2010年
- 【目的】研究斜纹夜蛾核型多角体病毒II ORF146基因的结构与功能。【方法】根据SpltMNPV IIORF146基因序列设计引物,经PCR扩增克隆ORF146基因。在生物信息学分析基础上进行启动子活性分析和转录时相分析。构建ORF146片段的原核表达载体,表达并纯化融合蛋白后制备多克隆抗体。【结果】核苷酸序列分析表明,读码框含1383 bp,编码460个氨基酸的蛋白质,推定分子量为50.4 kDa。启动子活性分析和转录时相分析都表明该基因是个早、晚期都表达的基因,在病毒感染8 h和18 h有两个转录峰,24 h以后转录水平略有下降,但趋于稳定。pET-28a-ORF13原核表达的融合蛋白经纯化后制备的多克隆抗体特异性高,效价可达1∶3200以上。【结论】SpltMNPV II ORF146基因是一个早期和晚期都表达的病毒组成型结构蛋白基因。推测ORF146基因可能与SpltMNPV II病毒感染宿主细胞后病毒DNA复制有关。制备的多克隆抗体可用于深入研究该蛋白的生物学特性与功能。
- 盛晔闵丹李轶女张志芳朱越雄朱江
- 关键词：斜纹夜蛾核型多角体病毒原核表达多克隆抗体
- 斜纹夜蛾核型多角体病毒基因ⅡORF13的克隆、表达与启动子活性分析被引量：3
- 2011年
- 【目的】研究新发现的斜纹夜蛾核型多角体病毒Ⅱ株基因ORF13的结构与功能。【方法】根据SpltMNPV Ⅱ ORF13基因序列设计引物,经PCR扩增并克隆ORF13。在生物信息学分析基础上进行启动子活性分析和转录时相分析。构建ORF13片段的原核表达载体,表达并纯化融合蛋白后制备多克隆抗体。【结果】核苷酸序列分析表明,起始密码子上游-84bp处发现杆状病毒晚期启动子基序ATAAG,没有发现明显的早期启动子基序。启动子活性分析和转录时相分析证实,ORF13是一个早期和晚期都表达的基因,在病毒感染2 h就开始转录,18 h达到最高峰,24 h以后转录水平有所下降,但基本维持恒定。pET-28a-ORF13原核表达的融合蛋白经纯化后制备的多克隆抗体特异性高,效价可达1:3200以上。【结论】SpltMNPV Ⅱ ORF13是一个早期和晚期都表达的病毒组成型结构蛋白基因。ORF13编码的蛋白可能是一种BV的膜蛋白,与细胞跨膜转运有关,制备的多克隆抗体可用于深入研究该蛋白的生物学特性与功能。
- 盛晔闵丹李轶女张志芳朱越雄朱江
- 关键词：斜纹夜蛾核型多角体病毒原核表达多克隆抗体
- 斜纹夜蛾核型多角体病毒少多角体遗传突变株的鉴定被引量：1
- 2008年
- 【目的】研究病毒基因感染昆虫宿主的分子机制。【方法】从自然界分离和鉴定斜纹夜蛾核型多角体病毒(Spodoptera litura multicapsid nucleopolyhedrovirus,SpltMNPV)的遗传突变株,筛选到少多角体基因突变株-SpltMNPVB型株,克隆该株的少多角体基因(fp25K)。对不同株系SpltMNPV的fp25K进行序列分析、病毒感染的细胞培养和虫体感染试验。【结果】核苷酸序列分析表明,与中国株相比,A型和C型分别发生了4个和3个核苷酸改变,但编码的氨基酸不变;B型株3′端核苷酸发生了多处缺失和一处插入,导致FP25K蛋白C端21个氨基酸改变。病毒感染的细胞培养试验表明,fp25K基因突变导致多角体明显减少的表型。虫体试验表明,感染fp25K突变的SpltMNPV B型株的宿主液化减弱。【结论】SpltMNPV B型株是一株自然的少多角体遗传突变株,该突变株可用于更深入地解析少多角体表型成因、病毒感染后虫尸降解和液化作用的分子机制。
- 盛晔王文兵浦冠勤沈智蓉朱江
- 关键词：斜纹夜蛾核型多角体病毒
- 斜纹夜蛾核型多角体病毒日本株(C3)p10基因的克隆及序列分析被引量：4
- 2004年
- 从斜纹夜蛾核多角体病毒(Spodopteralituramulticapsidnucleopolyhedrovirus,SpltMNPV)日本株(C3)基因组中克隆了p10基因.核苷酸序列分析表明,该克隆片断涵盖了318bp的读码框及5′端启动子区191bp和3′端终止区62bp的序列.在起始密码子ATG上游-63～-59bp处有一杆状病毒晚期和晚晚期启动子基序TAAG.联配分析表明,SpltMNPV日本株(C3)的核苷酸序列和氨基酸序列与其它9种核多角体病毒的同源性有较大差异.以p10基因为基础绘制的杆状病毒分子进化树将家蚕核多角体病毒(Bombyxmorinucle opolyhedrovirus,BmNPV)与苜蓿丫纹夜蛾核多角体病毒(Autographacalifornicamulticapcidnucleopolyhe drovirus,AcMNPV)归到同一分枝,这与以gp37基因和egt基因为基础绘制的杆状病毒分子进化树结果一致.
- 朱江沈颂东王文兵朱玉芳曹广力胡兆丽盛晔
- 关键词：10基因杆状病毒核型多角体病毒斜纹夜蛾
- 日本三株斜纹夜蛾核型多角体病毒的增殖特性及其多角体蛋白基因的序列分析被引量：20
- 2004年
- 利用斜纹夜蛾Spodopteralitura培养细胞 ,对近年来在日本本州、九州和四国等地发现并筛选出的对斜纹夜蛾幼虫具有强烈杀虫活性的 3株斜纹夜蛾核型多角体病毒 (SpltMNPV) (K 3、G1 2和G10 3)进行了生物学活性和分子生物学的初步研究 ,克隆了多角体蛋白基因 ,并进行了序列分析和比较。结果表明 :(1)SpltMNPV日本分离株K 3、G1 2和G10 3分别具有不同的特征性酶切图谱 ,分别属于 3种基因型 (A型、B型和C型 ) ;(2 ) 3个分离株的芽生型病毒 (buddedvirus)产生能力和多角体产生能力有差异 ,免疫印迹分析表明 ,多角体蛋白的分子量也不同 ;(3)日本株SpltMNPV核型多角体蛋白结构基因由 74 7个核苷酸编码序列 (编码 2 4 9个氨基酸 )组成 ,其序列与中国株SpltMNPV的同源性为 98 9% ,与其他 6种核型多角体病毒有较高的同源性 (6 1 7%～ 74 2 % ) ,但其 5′端侧翼序列 (nt_1～_10 0 )与AcMNPV和BmNPV相比差异显著 ,在对该基因表达调控起决定性作用的 8个高度保守核苷酸序列中 (nt_4 4～_5 1)有 2处发生自然突变。
- 朱江沈颂东王文兵朱玉芳池田素子胡兆丽盛晔
- 关键词：斜纹夜蛾核型多角体病毒多角体蛋白增殖
