黏病毒抗性蛋白A(myxovirus resistance protein A,MxA)是由干扰素诱导的具有重要抗乙肝病毒(hepatitis B virus,HBV)功能的蛋白质,我们前期工作发现,MxA主要依赖其中心互作结构域(central interactive domain,CID)与病毒直接相互作用发挥功能,但其具体的抗病毒功能区以及功能区是否具有独立的抗病毒活性仍不清楚。本研究拟鉴定MxA蛋白上的抗乙肝病毒活性肽。首先从全长MxA构建缺失突变体ΔCID和截短体CID,以HepG2.2.15细胞为病毒模型,分别转染空载质粒、MxA、ΔCID和CID,免疫荧光法检测转染效率,Western印迹法检测质粒表达,酶联免疫法测定细胞培养液中HBsAg、HBeAg的量及荧光定量PCR法测定乙肝病毒DNA的量,评估CID段的抗乙肝病毒活性。根据CID段的晶体结构,缩短肽段长度,构建α1、α2、α3等9段肽段质粒,鉴定各段的抗乙肝病毒活性和细胞毒性(MTT法)。运用计算生物学手段——分子对接法预测MxA蛋白与病毒相互作用的模式和位点。结果显示,ΔCID、CID和9段肽段质粒的序列及表达正确,9段肽段的表达量未见显著性差异,无显著的细胞毒性。CID组和黏病毒抗性蛋白A组较对照组乙肝病毒的复制水平显著降低,CID组细胞上清中HBsAg、HBeAg及乙肝病毒DNA的量分别减少了55.57%±8.48%、68.37%±6.24%、66.67%±6.40%,P<0.01;MxA组的3个指标分别减少了61.63%±3.11%、70.77%±7.25%、73.73%±6.18%,P<0.01;ΔCID组较对照组无明显变化。9段肽段中α1组较对照组HBsAg、HBeAg及乙肝病毒DNA的量有显著下降,分别减少了48.33%±1.70%、70.67%±3.30%、68.95%±2.55%,P<0.001,表明α1对乙肝病毒具有强抑制活性。分子对接的结果显示,384~408位氨基酸是MxA蛋白与病毒互作的关键位点,该区域落在α1肽段上,验证了α1是MxA蛋白抗乙肝病毒及与乙肝病毒相互作用中的关键区段。本研究筛选并鉴定出人干扰素诱导蛋白MxA上最有效的抗乙肝病毒活性肽α1,研究结�
目的探讨丙酮酸乙酯(ethyl pyruvate,EP)对脾切除术后老龄大鼠认知功能的影响。方法健康雄性SD大鼠84只,18月龄,体重500~600g,采用随机数字表法将其分为四组,每组21只:对照组(C组)、手术组(S组)、EP溶液组(E组)和溶剂组(R组)。S组、E组和R组行脾切除术,E组腹腔注射EP 40mg/kg,R组腹腔注射等量EP溶液的溶剂,S组和C组腹腔注射等量生理盐水。于术前5d、术后1、3、7d进行Morris水迷宫实验,记录大鼠逃避潜伏期和游泳距离,水迷宫实验结束后处死大鼠,采用Western blot和RT-PCR法检测四组大鼠海马高迁移率族蛋白1(high mobility group box 1,HMGB1)及晚期糖基化终末产物受体(receptor for advanced glycation end products,RAGE)的蛋白含量和mRNA表达量。结果与C组比较,术后1、3dS组、E组和R组逃避潜伏期和游泳距离明显延长,海马HMGB1、RAGE蛋白含量和mRNA表达量明显增加(P<0.05)。与S组比较,术后1、3dE组逃避潜伏期和游泳距离明显缩短,海马HMGB1、RAGE蛋白含量和mRNA表达量明显减少(P<0.05)。与术前比较,术后1、3dS组、E组和R组逃避潜伏期和游泳距离明显延长(P<0.05)。结论丙酮酸乙酯可能通过下调海马HMGB1及RAGE的表达改善认知功能。
