段萍
- 作品数：31 被引量：64H指数：4
- 供职机构：郑州大学基础医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金河南省自然科学基金河南省科技攻关计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学文化科学农业科学更多>>
- 临床医学生理学双语教学的深化及探讨
- ＜正＞为适应国际双语教育的发展,我们立项研究"临床医学生理学双语教学的深化及探讨",针对双语教学实践中面临的缺教材、缺师资、同学抵触畏难等突出问题,提出有效的对策和方法,经过三年的探索和实践,实施效果显著,学生乐于接受,...
- 章茜王志举叶振坤樊红琨段萍朱涵杨春张桂红赵文超景莹
- 文献传递
- RyR2-shRNA重组慢病毒载体的构建及其对离体心肌细胞RyR2基因表达的影响
- 2012年
- 目的构建携带RyR2-shRNA的慢病毒载体,并检测其对小鼠离体心肌细胞中RyR2的基因沉默效果。方法设计并合成针对小鼠RyR2基因的shDNA,克隆入含U6启动子和EGFP报告基因的慢病毒载体psiHIV-U6-eGFP,构建表达RyR2-shRNA的慢病毒载体,通过将慢病毒转移质粒和包装质粒共转染293T细胞,得到重组慢病毒载体颗粒,然后离体感染小鼠心肌细胞,采用Real-timePCR检测RyR2在mRNA水平的沉默效应。结果经测序证实RNAi慢病毒载体构建成功并成功包装。流式细胞仪测得重组慢病毒感染小鼠心肌细胞的阳性率达80%以上。Real-timePCR证实,重组慢病毒Lenti-siRyR2感染的小鼠心肌细胞中RyR2在mRNA水平基因抑制率达90%以上。结论成功构建了表达RyR2-shRNA的重组慢病毒表达载体,并在小鼠心肌细胞中实现有效的基因沉默效应。
- 王前段萍朱涵穆永慧赵伟达王志举章茜
- 关键词：慢病毒载体RNA干扰新生小鼠
- 启动子区甲基化调控骨髓间充质干细胞向神经细胞分化
- 间充质干细胞(MSCs)是来源于中胚层的成体干细胞,广泛存在于全身结缔组织和器官间质中,以骨髓组织中含量最为丰富。MSCs具有高度增殖、自我更新和多向分化潜能。本室在体外采用细胞因子或化学诱导法均成功诱导骨髓MSCs分化...
- 段萍张英韩雪飞许燕刘俊玲鄢文海邢莹
- 文献传递
- 骨髓间充质干细胞向神经细胞分化中相关基因DNA甲基化状态的研究
- 目的 检测骨髓间充质干细胞(MSC)向神经细胞分化前后和脑组织中转录因子OCT4、微管相关蛋白TAU和神经特异性烯醇化酶NES基因启动子区甲基化状态,探讨DNA甲基化调控在MSC向神经细胞分化中的作用.方法 体外分离培养...
- 鄢文海张英段萍韩雪飞刘素芳许燕邢莹
- 关键词：骨髓间充质干细胞DNA甲基化
- β-淀粉样蛋白诱导骨髓间充质干细胞向神经元样细胞分化过程中Tau蛋白的过度磷酸化
- 2011年
- 背景：大多数学者认为β-淀粉样蛋白是阿尔茨海默病发病的始动因素,而Tau蛋白过度磷酸化可能是阿尔茨海默病最重要的分子病理变化之一。目的：观察β-淀粉样蛋白25~35对大鼠骨髓间充质干细胞分化的神经元样细胞Tau蛋白磷酸化的影响。方法：体外分离纯化大鼠骨髓间充质干细胞,将第4代骨髓间充质干细胞分为两组：实验组中加入预诱导培养基和20μmol/Lβ-淀粉样蛋白25~35,24h后用含2%二甲基亚砜和200μmol/L丁羟茴醚的DMEM诱导其向神经细胞分化,5h后收取细胞。对照组诱导方法同实验组,但在诱导过程中未加入β-淀粉样蛋白25~35。结果与结论：光镜下可见纺锤状的骨髓间充质干细胞诱导后出现长突起,呈现神经细胞样形态,但实验组突起数量和长度均少于对照组;免疫细胞化学法检测两组诱导后的神经元样细胞为神经元特异性烯醇化酶阳性;免疫蛋白印记法证明实验组的GSK-3β、Tau[pSer262]和Tau[pSer396]表达均显著高于对照组。结果提示β-淀粉样蛋白25~35能够通过GSK-3β途径诱导骨髓间充质干细胞分化的神经元样细胞Tau蛋白过度磷酸化。
- 李俊赵天春段萍韩雪飞梁晨邢莹
- 关键词：TAU蛋白磷酸化骨髓间充质干细胞
- 慢病毒Tet-On系统调控Notch1-EGFP融合蛋白在PC12细胞中表达的研究被引量：5
- 2013年
- 目的:构建Te-t On系统调控的人源性Notch1胞内段(NICD)和EGFP融合蛋白的慢病毒真核表达载体,并探讨Notch1-EGFP在PC12细胞中的表达条件。方法:采用RT-PCR从人胎盘组织中获得NICD的cDNA,利用PCR扩增pEGFP-C1质粒中EGFP的编码序列,两者均定向克隆到pcDNA3.1(+)质粒中组成Notch1-EGFP片段,将该片段进一步酶切回收,并定向克隆到pLVX-Tigh-t puro载体获得pLVX-Notch1-EGFP。将构建好的质粒进行病毒包装并感染PC12细胞,抗性筛选2周。在不同时间点和不同浓度Dox作用下,用荧光显微镜观察EGFP表达,流式细胞术检测Notch1表达。结果:酶切和DNA测序均证实pLVX-Notch1-EGFP质粒构建成功。镜下可见感染后的PC12细胞在500 ng/ml Dox诱导36 h时90%以上细胞均表达EGFP。流式细胞术检测Notch1表达结果显示,随着Dox浓度增加,Notch1阳性细胞百分比逐渐增加;随着Dox诱导时间延长,Notch1阳性细胞百分比逐渐增高,到36 h时达到最高(81.5%)。结论:成功构建携带Notch1-EGFP融合蛋白的Te-t On调控的慢病毒真核表达载体,实现在PC12细胞中调控Notch1-EGFP融合蛋白的表达。
- 刘永敏段萍黄春田李博韩雪飞许燕鄢文海邢莹
- 关键词：NOTCH1PC12细胞
- 人骨髓间充质干细胞分化神经元样细胞表达单胺类受体mRNA被引量：1
- 2009年
- 目的检测体外人骨髓间充质干细胞(human mesenchymal stem cells,hMSCs)经DMSO/BHA联合诱导后所分化的神经元样细胞表达单胺类受体基因的状况,以探讨体外诱导hMSCs向神经元样细胞分化的条件和机制。方法采用密度梯度离心法和贴壁培养的方法分离纯化hMSCs,DMSO/BHA联合诱导分化,免疫细胞化学法检测神经元特异性烯醇化酶(neurone specific enolase,NSE)的表达,RT-PCR检测5-HT2受体和多巴胺2受体(DRD2)mRNA。结果分离纯化的hMSCs加入诱导剂后,hMSCs形成多极神经元的形态;免疫组化结果显示NSE蛋白表达阳性;RT-PCR结果显示诱导后细胞表达5-HT2受体的mRNA,而不表达DRD2的mRNA。结论DMSO/BHA可诱导hMSCs表达5-HT受体基因,但不表达DRD2受体基因。
- 段萍许燕吴素霞韩雪飞鄢文海邢莹
- 关键词：分化神经细胞5-HT受体
- 重组人类Tau蛋白的大量制备及鉴定
- 2006年
- 目的:重组人Tau蛋白的大量制备。方法:将携带人类全长Tau蛋白基因的质粒转入工程菌E.ColiBl21,经IPTG诱导表达后,通过差速离心、离子交换层析、凝胶过滤层析方法纯化Tau蛋白,以SDS-PAGE电泳和Western印迹法进行鉴定。结果:纯化Tau蛋白的得率约为43.3%。在SDS-PAGE上呈均一的蛋白条带,其相对分子质量约为60 000。结论:本实验以较高产量成功地纯化了重组Tau蛋白,纯化的蛋白质可以满足制备Tau抗体的需要,且其生物活性保存较好,可用于Tau蛋白生化特性的研究。
- 段萍景莹韩雪飞王建枝
- 关键词：TAU蛋白纯化阿尔茨海默病
- 骨髓间充质干细胞向神经细胞分化过程中Tau蛋白表达量的变化被引量：1
- 2008年
- 目的:观察体外诱导新生豚鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)分化为神经细胞过程中神经细胞Tau蛋白表达量的改变。方法:用H-DMEM培养基加胎牛血清(H-DMEM/FBS)体外培养新生豚鼠MSCs并传代扩增;分为实验组和对照组,实验组使用含细胞因子的培养基诱导MSCs向神经细胞分化,对照组加入不含细胞因子的培养基;用倒置显微镜观察2组细胞形态学改变;用ELISA法定量分析诱导分化第1、4、7、10天和第14天Tau蛋白含量的变化;免疫细胞化学法检测第14天神经元特异性烯醇化酶(NSE)和Tau蛋白的表达。结果:在细胞因子作用下豚鼠骨髓MSCs逐渐向神经细胞分化,在诱导第10天时形态上有典型神经细胞样改变;ELISA法检测发现Tau蛋白在诱导分化早期含量很低,随着诱导分化时间的延长,Tau蛋白含量逐渐升高,第10天趋于稳定,至第14天时Tau蛋白含量无明显增加;免疫细胞化学法可检测到NSE和Tau蛋白抗体阳性细胞。结论:间充质干细胞向神经细胞分化过程中Tau蛋白表达量逐渐升高,其稳定表达可能是神经细胞分化完成或成熟的标志之一。
- 段萍许烜慧许燕韩雪飞鄢文海邢莹
- 关键词：间充质干细胞分化神经细胞TAU蛋白
- 综合性大学医学教育教学相关激励与约束机制的研究与实践
- 医学教师是医学院教学质量建设的主体,高校只有吸引和培养最优秀的教师从事教育和科研事业,才能培养出优秀医生.本文从综合性大学医学院教师由于其自身的特殊性出发,探讨现存医学教育教学相关激励与约束机制的不足之处,并与医学院管理...
- 李博段萍赵松田晨光鄢文海
- 关键词：教学策略激励机制
