武学文
- 作品数：5 被引量：4H指数：1
- 供职机构：河北医科大学第二医院更多>>
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- SHIP基因真核表达载体的构建、鉴定及其表达抑制白血病细胞增殖的实验研究被引量：1
- 2009年
- 构建真核表达载体pCAG-IRES-SHIP-GFP,并观察其在K562细胞中的表达。将SHIP逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)产物克隆入pCAG-IRES-GFP,经酶切、PCR鉴定及测序分析,构建pCAG-IRES-SHIP-GFP重组真核表达载体;采用脂质体转染法将pCAG-IRES-SHIP-GFP及空载体转入K562细胞,实时荧光定量PCR(FQ-PCR)、Westernblot方法检测转染前后K562细胞中SHIPmRNA和蛋白的表达及Akt磷酸化水平改变,MTT、流式细胞仪检测等方法观察野生型SHIP基因表达对白血病细胞K562凋亡的影响。结果显示重组后的pCAG-IRES-SHIP-GFP质粒已成功载入SHIP的全长编码基因,序列测定的结果与预期设计完全一致。荧光显微镜下可见在转染pCAG-IRES-SHIP-GFP的K562细胞中存在荧光分布。外源性SHIP基因表达能使K562细胞增殖受抑;Westernblot检测提示K562细胞Akt308和Akt473的磷酸化水平较转染前显著下调,分别为转染前的38.7%和36.8%(P<0.01)。上述结果表明基因全长3.5kb的人野生型SHIP基因真核表达载体质粒pCAG-IRES-SHIP-GFP构建成功,并在K562细胞中表达;外源性SHIP基因表达能使K562细胞凋亡增加;这些改变可能与p-Akt表达下调有关。
- 杨琳罗建民刘小军成志勇温树鹏杜行严杨晓阳武学文
- 关键词：基因转染白血病K562细胞AKT磷酸化细胞增殖
- 甲磺酸伊马替尼对K562细胞bcr/abl、SHIP-2基因表达的影响及意义
- 2010年
- 目的研究甲磺酸伊马替尼对K562细胞bcr/abl、SHIP2的表达影响及意义。方法采用定量PCR方法检测甲磺酸伊马替尼干预K562细胞后bcr/abl、SHIP2基因表达变化。采用MTT及Western blot方法分别检测细胞增殖与AKT磷酸化水平的变化。结果随着甲磺酸伊马替尼浓度增加及作用时间的延长bcr/abl基因的表达下降(P<0.01),SHIP2的表达增加(P<0.01)。Akt磷酸化水平降低,细胞增殖能力降低。结论甲磺酸伊马替尼能下调bcr/abl基因的表达;SHIP2表达可能受bcr/abl基因的调节,并可能通过调节PI3K/AKT途径影响细胞的增殖。
- 刘小军罗建民杨林武学文温树鹏
- 关键词：甲磺酸伊马替尼基因表达
- 外源性SHIP基因对K562细胞周期及其相关蛋白表达的影响被引量：3
- 2009年
- 目的:探讨SHIP基因对人白血病细胞系K562细胞周期的调控作用。方法:用携带野生型SHIP基因及绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)基因的慢病毒及空载体慢病毒转染人白血病K562细胞。FCM检测转染效率、细胞凋亡率及细胞周期变化,实时荧光定量PCR(real-time fluorescent quantitative PCR,RFQ-PCR)检测SHIPmRNA水平的变化,Western印迹法检测SHIP、cyclinD1、p21WAF1/CIPI、p27KIP1蛋白表达水平的变化。结果:与转染空载体组和未转染组相比,转染野生型SHIP基因的K562细胞增殖减慢,凋亡率明显上升(P<0.05);细胞周期显示,G0/G1期延长,G1期前出现亚二倍体的凋亡峰,S期和G2/M期比例降低;cyclin D1表达降低,p21WAF1/CIPI和p27KIP1表达增加。结论:转染野生型SHIP基因可使细胞周期阻滞在G0/G1期,抑制白血病细胞增殖,促进白血病细胞凋亡。
- 杨琳罗建民王福旭刘晓军温树鹏成志勇武学文杨晓阳
- 关键词：细胞周期细胞周期蛋白类K562细胞
- 甲磺酸伊马替尼对K562细胞SHIP-2基因表达的影响及意义
- 目的:慢性粒细胞白血病/(chronic myelocytic leukemia, CML/)作为临床常见的一种骨髓增殖性疾病,其病变克隆中存在t/(9 ;22/)染色体异位,形成bcr//abl融合基因,所编码的蛋白P...
- 武学文
- 关键词：CML格列卫AKT磷酸化
- 文献传递
- SHIP基因真核表达载体的构建、鉴定及对白血病细胞系K562的抑制作用
- 2009年
- 目的构建真核表达质粒pCAG-IRES-SHIP-GFP,并观察其在K562细胞中的表达。方法将SHIP基因的RT-PCR产物克隆入载体pCAG-IRES-GFP,经酶切、鉴定及测序分析,构建pCAG-IRES-SHIP-GFP重组真核表达质粒。实验设置3个组:K562组(未转染)、K562/IRES组(转染空载体pCAG-IRES-GFP),K562/SHIP组(转染重组质粒pCAG-IRES-SHIP-GFP)。荧光显微镜和流式术检测重组质粒的转染效率;Western blotting检测各组SHIP蛋白的表达及Akt磷酸化水平变化;MTT法和流式术分析SHIP基因转染对细胞增殖的影响。结果重组质粒pCAG-IRES-SHIP-GFP已成功载入SHIP的全长编码基因,序列测定的结果与预期设计完全一致。荧光显微镜在K562/SHIP组可见绿色荧光,转染效率为48.2%±6.6%。Western blotting显示K562/SHIP组有明显的SHIP蛋白表达,且p-Akt-308和p-Akt-473的水平(分别为0.182和0.381)较K562/IRES组(0.361和0.716)和K562组(0.365和0.725)明显下降(P<0.01)。流式术分析显示K562/SHIP组细胞生长减慢,G0/G1期细胞增多、G2/M期细胞减少,增殖指数降低。结论成功构建了3 585bp的SHIP基因真核表达质粒pCAG-IRES-SHIP-GFP,并在K562细胞中表达。外源性SHIP基因转染能使K562细胞增殖受抑,原因可能与Akt的磷酸化下调有关。
- 杨琳罗建民刘小军成志勇温树鹏杜行严杨晓阳武学文
- 关键词：转染质粒SHIP白血病K562细胞
