梁瑾
- 作品数：7 被引量：26H指数：2
- 供职机构：山东宝来利来生物工程股份有限公司更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生更多>>
- 新城疫病毒一步法RT-PCR检测方法的建立及初步应用被引量：4
- 2013年
- 目的建立新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)一步法RT-PCR检测方法,并进行验证及初步应用。方法根据NDV F基因序列,设计合成了1对特异性引物,建立一步法RT-PCR检测方法,并验证其特异性及敏感性;应用建立的方法对23份疑似新城疫(Newcastle disease,ND)病料进行检测,并与血凝及血凝抑制试验检测结果进行比对。结果建立的一步法RT-PCR同时检测NDV、传染性法氏囊病病毒(Infectious bursal disease virus,IBDV)和禽流感病毒(Avian influenza virus,AIV)H9亚型,仅NDV为阳性,IBDV和AIV H9均为阴性;该方法最低可检出约4 pg的NDV RNA;23份疑似ND病料,一步法RT-PCR检出11份阳性,血凝及血凝抑制试验检出13份阳性,两种方法的阳性符合率为85%。结论建立了NDV一步法RT-PCR检测方法,该方法特异性良好,敏感度较高,用时较短,可从分子水平上对NDV进行早期快速诊断和流行病学调查。
- 梁瑾程福亮陈甜甜宿志瑞范群平
- 关键词：新城疫病毒逆转录聚合酶链反应
- 猪瘟和猪蓝耳病病毒多重RT-PCR检测方法的建立及初步应用被引量：18
- 2013年
- 目的建立猪瘟病毒（Classical swine fever virus,CSFV）和猪蓝耳病病毒（Porcine respiratory and reproductivesyndrome virus,PRRSV）多重RT-PCR检测方法,并进行验证及初步应用。方法根据GenBank中登录的CSFV和PRRSV疫苗株基因组序列,分别设计针对CSFV和PRRSV的两对引物,建立多重RT-PCR检测方法,并进行敏感性及特异性验证。用建立的多重RT-PCR法检测20份疑似猪瘟、猪蓝耳病或混合感染病料,并与市售RT-PCR试剂盒的检测结果进行比较;检测病料的部分PCR产物测序后,与9株具有代表性的CSFV毒株和10株具有代表性的PRRSV毒株进行核苷酸序列同源性比对。结果以CSFV和PRRSV混合引物扩增,分别可扩增出286和664 bp的特异性条带。建立的多重RT-PCR检测方法可检出100倍稀释的病毒RNA;该方法可检出CSFV、PRRSV及CSFV与PRRSV混合病毒,而猪流行性腹泻病毒（Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV）、猪传染性胃肠炎病毒（Trans-missible gastro-enteritis virus,TGEV）、猪圆环病毒（Porcine circovirus,PCV）、猪细小病毒（Porcine parvovirus,PPV）和猪伪狂犬病病毒（Porcine pseudorabies virus,PRV）的检测结果均为阴性;该方法检测20份疑似猪瘟、猪蓝耳病或混合感染病料的结果与市售RT-PCR试剂盒比较,灵敏度达100%;选取的两份CSFV扩增片段与9株具有代表性的CSFV毒株的核苷酸序列同源性在92.3%~98.2%之间,扩增的PRRSV与10株具有代表性的PRRSV毒株的核苷酸序列同源性在94.1%~97.9%之间。结论成功建立了CSFV和PRRSV多重RT-PCR检测方法,为猪瘟和猪蓝耳病的早期诊断及流行病学调查奠定了基础。
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- 关键词：猪瘟病毒猪蓝耳病病毒多重逆转录聚合酶链反应
- 鸡抗猪产肠毒素大肠埃希菌-沙门菌二联五价卵黄抗体的变化规律及喷干工艺的研究被引量：1
- 2013年
- 为获得具有一定保护力的外源性抗体制剂,用于防治仔猪腹泻,利用产肠毒素大肠埃希菌(ETEC)标准菌株K88、K99、987P和导致仔猪副伤寒的2株沙门菌,制备产毒素大肠埃希菌-沙门菌二联五价的灭活苗,免疫接种待开产母鸡400羽,聚乙二醇沉淀法分离纯化卵黄抗体,然后采用直接试管凝集法检测不同时间的卵黄抗体(IgY)效价。将试验结束后无菌收集的全蛋液稀释过滤后,按照喷干设备进口温度165℃,出口温度85℃进行喷雾干燥,制备卵黄抗体粉,并对其进行表观性状及相关指标的测定。结果表明,免疫接种蛋鸡后,卵黄液中抗体IgY的效价呈现规律性变化,喷雾干燥获得的卵黄抗体粉表观性状较好,粗蛋白含量为12.6%,体外消化率高达95%,IgY的效价为1∶29。通过3次免疫接种获得了高免卵黄抗体,并进行了全蛋喷雾干燥工艺的摸索,制备出了效价较高的抗体制剂,为预防和治疗仔猪腹泻提供了一条途径。
- 程福亮梁瑾陈甜甜宿志瑞范群平聂兆晶谷巍
- 关键词：沙门菌卵黄抗体生产工艺
- 禽流感通用型RT-PCR快速检测试剂盒被引量：1
- 2012年
- 为建立一种简单、快速、灵敏、准确的禽流感检测方法,根据禽流感病毒高度保守的M1基因序列,设计一套通用型引物,建立了快速检测禽流感的PCR一步法,并对反应条件进行优化,组装成快速检测试剂盒,并对临床收集的15份疑似禽流感病料进行了检测。结果显示,疑似禽流感病料检出率在100%以上。检测灵敏度达10^(1.5)ELD_(50),稳定性良好,冷冻至少能保存12个月。通过对临床样品的检测,证实该试剂盒具有操作简便、快速、灵敏度高、特异性强、重复性好、稳定性高等优点,值得推广应用。
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- 关键词：禽流感试剂盒
- 产朊假丝酵母菌发酵降解棉酚的效果被引量：2
- 2012年
- 棉粕经高温高压处理后,利用产阮假丝酵母对棉粕进行固体发酵脱毒,通过对生物量的测定,获得最适发酵脱毒条件,然后进行发酵降解棉酚实验,通过测定发酵终点和起始点棉酚的含量,获得产朊假丝酵母对棉酚的降解率。结果显示最适发酵条件为:发酵底物含水量为37%,发酵时间48h,发酵温度30℃,接种量为5%。对发酵前和发酵48h后的样品按照国家标准测定方法进行棉酚含量的测定,结果显示棉粕在发酵前后,棉酚去除率在85.7%左右。
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- 关键词：产朊假丝酵母降解棉粕
- 禽流感H9亚型一步法RT-PCR快速检测试剂盒的研制及应用被引量：2
- 2013年
- 为建立一种简单、快速、灵敏、准确的禽流感H9检测方法,本研究根据GenBank中收录的禽流感H9病毒高度保守的基因序列,设计1对H9的特异性引物,建立了一步法快速检测禽流感的PCR,对反应条件进行优化后,组装成快速检测试剂盒,并对临床收集的疑似禽流感病料进行检测。结果显示,试验成功建立了禽流感H9病毒一步法RT-PCR检测方法,在此基础上完成了试剂盒的组装,对30份疑似禽流感病料的检出率高达98%以上,检测灵敏度达101.5 ELD50,稳定性良好,冷冻保存期达12个月。经证实该试剂盒具有操作简便、经济、快速、灵敏度高、特异性强、重复性好、稳定性高等优点,值得推广应用。
- 程福亮梁瑾范群平陈甜甜宿志瑞聂兆晶谷巍
- 关键词：禽流感H9RT-PCR试剂盒
