杨晓玉
- 作品数：10 被引量：17H指数：3
- 供职机构：南华大学医学院病原生物学研究所更多>>
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- 相关领域：医药卫生更多>>
- 沙眼衣原体感染与相关细胞因子的研究进展被引量：5
- 2014年
- 沙眼衣原体(Chlamydia trachomatis,Ct)感染可诱导宿主细胞产生大量的细胞因子,细胞因子在炎症反应过程中发挥重要作用,虽然炎症反应可以保护机体,但持续的炎症反应可导致病理变化和组织损伤。细胞因子产生是否平衡直接影响炎症的发展和结局,本文就Ct感染与相关细胞因子作一综述。
- 杨晓玉李忠玉
- 关键词：沙眼衣原体细胞因子
- 沙眼衣原体pORF5蛋白激活NALP3炎性复合体和p38MAPK通路诱导THP-1细胞分泌IL-1β和IL-18
- 目的探讨沙眼衣原体pORF5蛋白对IL-1β和IL-1 8等促炎性细胞因子的诱生作用,并初步分析其分子机制。方法采用分子生物学方法制备、纯化沙眼衣原体pORF5蛋白,用36μg/mL不同浓度刺激THP-1细胞,并于0h、...
- 曹文娟杨晓玉戴文婷粟盛梅陆春雪周洲唐双阳刘良专李忠玉
- 文献传递
- 沙眼衣原体pORF5质粒蛋白对HeLa细胞自噬的影响被引量：5
- 2017年
- 目的探讨沙眼衣原体(Chlamydia trachomatis,Ct)质粒蛋白pORF5对HeLa细胞自噬的影响,为进一步阐明Ct致病机制提供实验依据。方法 PCR扩增Ct pORF5质粒蛋白基因,克隆入PLenO-DCE慢病毒质粒,构建慢病毒重组表达载体。慢病毒重组表达载体经双酶切及测序鉴定后与辅助质粒共转染293T细胞,制备慢病毒。收集慢病毒,再感染HeLa细胞,流式细胞仪分选获得pORF5基因稳定转染细胞株(PLenO-DCE/pORF5-HeLa)。实验同时建立对照细胞株(PLenO-DCE-HeLa)。血清饥饿处理两组细胞24h,Real-time PCR和Western blot检测微管相关蛋白1轻链3(LC3)、Becin1的蛋白和mRNA表达水平,计算LC3-II/LC3I比率;采用间接免疫荧光检测自噬荧光斑点。结果 PLenO-DCE/pORF5-HeLa和PLenO-DCE-HeLa细胞饥饿处理后均出现LC3红色荧光斑点,斑点数分别为(97.6±12.1)个/细胞和(34.0±2.6)个/细胞,差异有统计学意义(t=45.36;P<0.05);饥饿处理后PLenO-DCE-HeLa和PLenO-DCE/pORF5-HeLa细胞中LC3、Beclin1的mRNA表达水平均显著高于未处理组,其中PLenO-DCE/pORF5-HeLa细胞中LC3、Beclin1mRNA的表达水平较未处理组增加3.10倍(t=95.25;P<0.01)和0.85倍(t=16.56;P<0.05),较PLenO-DCE-HeLa细胞分别增加1.95倍(t=79.12;P<0.01)和1.57倍(t=23.95;P<0.05);PLenO-DCE/pORF5-HeLa经饥饿处理24h后LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比率和Beclin1蛋白较未处理组分别增加52.17%和76.00%(t值分别是15.13,57.24;P均<0.05),较PLenO-DCE-HeLa细胞组分别增加1.05倍(t=35.21;P<0.05)和4.34倍(t=112.23;P<0.01)。结论 pORF5质粒蛋白可诱导HeLa细胞自噬,可能在Ct致病过程中发挥重要作用。
- 杨晓玉雷文波粟盛梅陈超群李忠玉
- 关键词：沙眼衣原体细胞自噬BECLIN1
- 沙眼衣原体pORF5蛋白激活NALP3炎性复合体和p38MAPK通路诱导THP-1细胞分泌IL-1β和IL-18
- 目的探讨沙眼衣原体pORF5蛋白对IL-1β和IL-18等促炎性细胞因子的诱生作用,并初步分析其分子机制。方法采用分子生物学方法制备、纯化沙眼衣原体pORF5蛋白,用3~361μg/mL不同浓度刺激THP-1细胞,并于0...
- 曹文娟杨晓玉戴文婷粟盛梅陆春雪周洲唐双阳刘良专李忠玉
- 沙眼衣原体pORF5质粒蛋白对HeLa细胞自噬的影响
- 目的探讨沙眼衣原体质粒蛋白pORF5对HeLa细胞自噬和凋亡的影响,为进一步阐明沙眼衣原体的致病机制提供实验依据。方法 PCR扩增沙眼衣原体pORF5质粒蛋白基因,克隆入DCE慢病毒质粒构建慢病组重组表达载体,慢病毒重组...
- 杨晓玉粟盛梅龚思璐邹燕雷文波周洲李忠玉
- 文献传递
- 沙眼衣原体pORF5蛋白激活NALP3炎性复合体和p38MAPK通路诱导THP-1细胞分泌IL-1β和IL-18
- 曹文娟杨晓玉戴文婷粟盛梅陆春雪周洲唐双阳刘良专李忠玉
- 沙眼衣原体pORF5质粒蛋白激活NALP3炎性复合体诱导THP-细胞产生IL-1β和IL-18被引量：3
- 2015年
- 目的:探讨沙眼衣原体(Chlamydia trachomatis,Ct)pORF5质粒蛋白对IL-1β和IL-18等促炎性细胞因子的诱生作用,并初步分析其分子机制。方法:用0、3、6、12、24、36μg/ml不同浓度的pORF5蛋白刺激THP-1细胞,并于0、8、16、24、36 h收集上清及细胞,ELISA检测IL-1β和IL-18的含量;Realtime-PCR检测NALP3炎性复合体mRNA表达水平,Western blot鉴定Caspase-1活化状态;分别用NALP3 siRNA、ASC siRNA转染THP-1细胞24 h或用Caspase-1特异性抑制剂(Z-YVADFMK)预处理THP-1细胞30 min后,再用24μg/ml的pORF5质粒蛋白刺激THP-1细胞24 h,ELISA分析各处理因素对IL-1β和IL-18产生的影响。结果:pORF5质粒蛋白以浓度依赖的方式刺激THP-1细胞产生IL-1β和IL-18。当pORF5质粒蛋白浓度为24μg/ml时,IL-1β和IL-18的表达水平最高,分别为491 pg/ml、186 pg/ml;同时pORF5质粒蛋白以时间依赖的方式刺激THP-1细胞产生IL-1β和IL-18,两者分别在24 h和16 h达到峰值。pORF5质粒蛋白可增强THP-1细胞NALP3、ASC和Caspase-1 mRNA的表达,促进Caspase-1的活化;NALP3-siRNA、ASC-siRNA及Caspase-1抑制剂处理组IL-1β和IL-18的产生水平均显著低于对照组(P<0.05)。结论:pORF5质粒蛋白通过激活NALP3炎性复合体诱导THP-1细胞分泌IL-1β和IL-18。
- 曹文娟戴文婷杨晓玉粟盛梅龚思露贺红梅周洲唐双阳李忠玉
- 关键词：沙眼衣原体IL-1ΒIL-18
- 沙眼衣原体pORF5质粒蛋白抑制肿瘤坏死因子α诱导HeLa细胞凋亡被引量：1
- 2017年
- 目的 探讨沙眼衣原体质粒蛋白pORF5对肿瘤坏死因子α（TNF？α）诱导HeLa细胞凋亡的影响。方法 将含pORF5基因的慢病毒重组表达载体与辅助质粒共转染293T细胞制备慢病毒，慢病毒收集浓缩后再感染HeLa细胞，流式细胞仪分选获得pORF5基因稳定转染细胞株（pORF5？HeLa），同时建立空载体转染对照细胞株（对照HeLa）。将两种细胞株分别分为两组，一组用20 μg/L TNF？α处理（处理组），一组仅用新鲜培养基培养（未处理组），作用6 h，Hoechst33258染色观察凋亡细胞形态，流式细胞仪检测细胞凋亡率，实时 PCR检测凋亡相关蛋白Caspase3、Bcl？2和Bax mRNA表达水平，Western印迹检测Bax、Bcl？2蛋白表达水平。结果 TNF？α处理细胞6 h后，Hoechst33258染色发现pORF5？HeLa和对照HeLa细胞中均可见不同程度的核固缩、碎裂，高亮蓝色凋亡小体；pORF5？HeLa细胞的凋亡率为（35.5 ± 4.5）%，对照HeLa细胞凋亡率为（63.6 ± 5.8）%，均显著高于相应未处理组［（9.5 ± 1.5）%和（7.9 ± 0.9）%，t值分别为13.53、32.36，均P 〈 0.01］。处理组pORF5？HeLa细胞中Bax和Caspase3 mRNA表达水平较处理组对照HeLa细胞分别降低72.8%和84.5%（t值分别为35.29，42.25，均P 〈 0.01），但Bcl？2 mRNA的表达水平显著高于处理组对照HeLa细胞（t = 87.12，P 〈 0.01）。处理组pORF5？HeLa细胞中Bax蛋白表达水平亦显著低于处理组对照HeLa细胞（t = 17.58，P 〈 0.01），而Bcl？2蛋白表达水平较对照HeLa细胞增加6.8倍，差异有统计学意义（t = 18.93，P 〈 0.01）。结论 pORF5可能通过增强抗凋亡蛋白Bcl？2降低促凋亡蛋白Caspase3和Bax的表达，抑制TNF？α诱导的HeLa细胞凋亡。
- 杨晓玉邹燕龚思露卜继常周洲刘良专李忠玉
- 关键词：沙眼衣原体细胞凋亡肿瘤坏死因子Α半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3BCL-2相关X蛋白质
- 沙眼衣原体pORF5质粒蛋白拮抗LL37抗菌肽活性初步研究
- 目的探讨pORF5质粒蛋白能否拮抗LL37抗菌肽活性,增强沙眼衣原体(Chlamydia trachomatis,Ct)感染,并初步探讨其分子机制。方法构建pORF5原核表达重组体pGEX-6p/pORF5,表达并纯化G...
- 马康康李忠玉戴文婷杨晓玉贺红梅
- 文献传递
- pORF5质粒蛋白拮抗LL37抗菌肽增强沙眼衣原体感染的初步研究被引量：5
- 2014年
- 目的 探讨pORF5质粒蛋白能否通过抑制LL37抗菌肽增强沙眼衣原体（Chlamydia trachomatis,Ct）感染,并初步探讨其分子机制.方法 表达并纯化GST-pORF5融合蛋白,融合蛋白经蛋白酶酶切制备不含GST标签的pORF5蛋白;pORF5蛋白和LL37单独或共孵育衣原体后再感染HeLa细胞,间接免疫荧光技术计数衣原体包涵体形成数量;荧光定量PCR检测TNF-α、LL37基因表达水平.结果 单独Ct感染组衣原体包涵体形成单位（IFU）为3.8×105/ml,LL37处理组IFU为2.0 × 105/ml,pORF5蛋白处理组IFU为3.0×105/ml,pORF5蛋白和LL37共处理组IFU为3.1×10/ml.pORF5蛋白处理组、LL37与pORF5蛋白共处理组和单独Ct感染组之间比较,差异无统计学意义（P＞0.05）,但明显高于LL37单独处理组（P＜0.05）.pORF5蛋白和LL37共同处理组TNF-α表达水平明显高于LL37单独处理组（P＜ 0.01）;pORF5蛋白处理组较Ct处理组LL37基因转录水平下降了19％.结论 pORF5质粒蛋白能拮抗LL37抗菌肽增强Ct感染,其机制可能与上调肿瘤坏死因子α、下调LL37表达相关.
- 马康康李忠玉粟盛梅曹文娟戴文婷杨晓玉贺红梅钟光明
- 关键词：沙眼衣原体
