杨华静
- 作品数：19 被引量：72H指数：5
- 供职机构：华中科技大学同济医学院附属同济医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划湖北省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 多光子激光扫描成像技术对活细胞内淀粉样前体蛋白裂解和β-淀粉样蛋白生成的观察(英文)
- 2007年
- 目的在活细胞内探究淀粉样前体蛋白(amyloid precursor protein,APP)的裂解和p一淀粉样蛋白(amyloid beta,Aβ)的生成机制。方法利用PCR扩增CFP(编码蓝色荧光蛋白),YFP(编码黄色荧光蛋白)和C99(编码APP最后99个氨基酸)三片段。含有54个碱基(编码APP中间18个氨基酸)的片段54bp由生物公司合成。CFP,YFP,54bp和C99四个片段连入载体质粒pcDNA3.0得到重组质粒pcDNA3.0-CFP-54bp-YFP和pcDNA3.0-CFP-54bp-YFP- C99。将这两个重组质粒分别瞬时转染SH-SY5Y细胞。利用多光子激光扫描显微镜观察融合基因的表达,荧光共振能量转移(fluorescence resonance energy transfer,FRET)检测APP的β裂解。免疫细胞化学和多光了激光扫描显微镜观察Aβ的生成。MTT检测转染细胞活性。结果(1)限制性内切酶双酶切消化和测序分析鉴定重组质粒序列完全正确。(2)转染细胞内可以观察剑蓝色平和黄色荧光。(3)在pcDNA3.0-CFP-54bp-YFP转染细胞中存在FRET现象;在pcDNA3.0-CFP-54bp-YFP-C99转染细胞中观察不到FRET现象。(4)免疫细胞化学和多光子激光扫描显微镜观察到在pcDNA3.0-CFP-54bp-YFP-C99转染的细胞中有Aβ的牛成。(5)Aβ的沉积广泛分布于细胞内。(6)随着Aβ在细胞内的产生和聚集,细胞的活性逐步下降。结论C99对于APP的β裂解非常重要。早期Aβ首先在细胞内生成并在细胞内形成广泛沉秋。细咆内聚集的Aβ会影响细胞活性,带来不利结果。
- 李晓晴张苏明杨华静张智红
- 关键词：淀粉样前体蛋白Β-淀粉样蛋白荧光共振能量转移
- 年龄相关性黄斑变性炎症相关机制的研究进展被引量：2
- 2022年
- 年龄相关性黄斑变性(age-related macular degeneration,AMD)是一种随着年龄增长发病率逐渐升高的视网膜退行性疾病,可造成不可逆性视力下降,也是一种多因素疾病,其发病机制目前尚未完全明确。炎症反应作为AMD最重要的发病机制之一,参与了AMD的发生和进展过程。其中,NLRP3炎症小体活化、补体级联途径介导、模式识别受体激活以及细胞因子与炎症细胞网络调控等机制与AMD的发病密切相关。针对炎症机制的研究可加深对AMD的认知,指导疾病的筛查和治疗,现将AMD中上述机制的研究进展作一综述。
- 马培茹刘羊钰李水杨华静陈建斌
- 关键词：年龄相关性黄斑变性炎症细胞因子补体
- 加味交泰丸对大鼠糖尿病视网膜病变的防治作用及其机制被引量：14
- 2013年
- 目的:探讨加味交泰丸对大鼠糖尿病视网膜病变的防治作用及其作用机制。方法:将大鼠随机分为正常组、造模组,造模组大鼠采用小剂量链脲佐菌素(streptozotocin,STZ,30 mg.kg-1)尾静脉注射加高脂饲料喂养的方法建立2型糖尿病模型,2周后筛选糖耐量异常者随机分为糖尿病模型组和治疗组,治疗组以加味交泰丸煎剂2.05 g.kg-1ig,干预100 d后分别进行口服葡萄糖耐量试验(OGTT),检测糖化血红蛋白(HbA1C)及氧化应激相关指标。观察视网膜超微结构和神经节细胞的凋亡情况。结果:与正常组比较,模型组大鼠OGTT异常(P<0.01),HbA1C(P<0.01)及氧化相关指标活性升高、抗氧化相关指标活性下降(P<0.01),视网膜毛细血管基底膜明显增厚、神经节细胞凋亡增多;与模型组比较,治疗组大鼠OGTT改善(P<0.01或P<0.05),HbA1C(P<0.01)及氧化相关指标活性下降、抗氧化相关指标活性升高(P<0.01),视网膜毛细血管基底膜未见明显增厚、神经节细胞凋亡减少。结论:加味交泰丸可防治大鼠早期糖尿病视网膜病变,可能与其抗氧化应激及减少视网膜神经节细胞凋亡有关。
- 陈广陆付耳杨华静董慧徐丽君邹欣黄召谊王开富
- 关键词：糖尿病视网膜病变氧化应激视网膜神经节细胞
- 小鼠受精卵显微注射影响因素的体外研究被引量：6
- 2005年
- 目的:利用体外培养探讨受精卵显微注射的影响因素的作用。方法:获取小鼠受精卵,在其他条件固定的情况下,分别比较不同的注射基因浓度,在CZB(加HEPES)操作液中显微操作时间以及注射前受精卵的质量对显微注射后的胚胎体外培养结果的影响。结果:基因浓度越高,受精卵发育越差,操作时间不同的卵发育无明显差异,质量好的受精卵发育较好,质量差的几乎不发育。结论:选用较低的基因浓度,良好的操作介质CZB(加HEPES),使用质量好的受精卵,会提高显微注射的效率。
- 杨华静杨勇肖文伍陈红张苏明
- 关键词：小鼠显微注射转基因胚胎培养
- 小鼠卵母细胞电激活的实验研究
- 2005年
- 目的寻找用电激活方法作小鼠体细胞克隆的适宜卵龄的卵母细胞及电激活参数。方法在0.6kV/cm、80μs、2个电脉冲(2p)下,比较了注射人绒毛膜促性腺激素(HCG)后13、16、19、22h卵母细胞的激活率、碎裂+死亡率。在上述相同电脉冲下,统计了经体外培养(IVC)和新鲜的卵龄为16、19、22h的卵母细胞的激活率,碎裂+死亡率;比较了场强分别为0.6、0.9、1.2、1.5、1.8kV/cm,电压时程分别为10、20、40、80、100、150、200μs,2p对注射HCG后16h卵母细胞的电激活效果。结果注射HCG后16、19h卵母细胞电激活率较高,分别为63.6%和76.7%,经体外培养后激活率下降,碎裂+死亡率明显增加。在0.9kV/cm、80/100μs,2p时激活率达70%～80%。在1.2kV/cm、40/80/100μs、2p时,激活率达到了80%左右,碎裂+死亡率低于16%。结论注射HCG后16h的卵母细胞为适宜的小鼠核移植的受体细胞。0.9kV/cm、80/100μs,2p及1.2kV/cm、40/80/100μs、2p为适宜的电激活参数。
- 肖文伍杨勇卫国杨华静傅新巧张苏明
- 关键词：电激活卵母细胞小鼠核移植体细胞克隆
- 严重PDR玻璃体切割术后雷珠单抗注射的效果观察（英文）被引量：5
- 2016年
- 目的:对严重增殖性糖尿病视网膜病变的患者行玻璃体切割术后行雷珠单抗注射的效果观察。方法:回归性分析。12例严重增殖性糖尿病视网膜病变患者(12眼)接受睫状体平坦部玻璃体切割术,同时给予硅油、惰性气体或者平衡液的玻璃体腔填充。在手术结束的同时给予雷珠单抗的玻璃体腔注射。结果:随访时间平均为2.75mo。这12眼中分别包括玻璃体积血(1眼);玻璃体积血伴纤维血管化增生(1眼);玻璃体积血伴牵拉性视网膜脱离(3眼);纤维血管化增生伴牵拉性视网膜脱离(2眼);玻璃体积血伴新生血管性青光眼伴牵拉性视网膜脱离(1眼);玻璃体积血伴纤维血管化增生伴牵拉性视网膜脱离(2眼);玻璃体积血伴纤维血管化增生伴新生血管性青光眼伴牵拉性视网膜脱离(1眼);玻璃体积血伴牵拉性孔源性视网膜脱离(1眼)。12眼中,8眼行玻璃体腔硅油填充,2眼行惰性气体填充,2眼行平衡液填充。所有的患者之前均未接受任何治疗。视网膜脱离复位率为10/10(100%)。1眼术后出现前房积血。9眼术后最佳矫正视力较术前提高,2眼无明显变化,1眼较术前下降。OCT检查显示8眼术后未见黄斑水肿。结论:玻璃体切割术后雷珠单抗注射对严重增殖性糖尿病视网膜病变患者有明显的治疗效果:手术成功率明显提高;患者视力显著提高;糖尿病黄斑水肿的发生概率减少;术中及术后并发症的发生率降低。
- 陈博张宪杨华静陈志祺王帅帅尹铁梅孙旭芳
- 关键词：糖尿病视网膜病变玻璃体切割术
- 小鼠MSCs分离体外扩增及向神经样细胞诱导分化的研究被引量：4
- 2005年
- 目的:研究小鼠骨髓间充质干细胞(mMSCs)的分离、体外扩增及向神经样细胞分化的潜能。方法:取 8-9周小鼠骨髓悬浮至全培养基中,接种于纤连蛋白覆盖的培养器皿中,纯化并扩增mMSCs;检测第9-10代细 胞的生长状态、细胞周期、表型,并进行光镜形态学观察;用二甲基亚砜和丁羟茴醚诱导细胞分化,免疫荧光法检测 其诱导分化前后神经细胞和神经干细胞的特异性标记蛋白的表达。结果:mMSCs为贴壁细胞,表现为成纤维细胞 样,具有梭形、多角形等形态,传至15代仍可维持其形态特征;83%的细胞处于G0/G1期;mMSCs不表达CD45而 表达CD44、CD13,与人MSCs表型一致;诱导分化后,大部分细胞变成双极、多极和锥形,并相互交织成网状结构, 呈现神经细胞和神经干细胞表型。结论:mMSCs可被成功分离及体外扩增培养,并具有同人类MSCs相同的形 态、表型、生长特征和向神经样细胞分化的潜力,是研究细胞及基因治疗小鼠病理模型的良好工具细胞。
- 徐光锦付新巧杨华静朱遂强张苏明
- 关键词：骨髓小鼠体外扩增分化神经样细胞
- 对比研究经颈动脉和立体定位注射骨髓间充质干细胞治疗缺血性脑卒中被引量：23
- 2005年
- 目的 探讨安全高效移植骨髓间充质干细胞(mensenchymal stem cells,MSCs)治疗脑缺血的方法。方法 采用连续传代培养的方法纯化MSCs,Brdu标记后分别经颈动脉(1×104/μl,200μl)和立体定位(1×105/μl,10μl)注射至大鼠脑缺血2 h再灌注1 d模型,各自设立对照组,观察术后神经功能评分以及脑部Brdu阳性细胞的分布。结果 经颈动脉注射组较立体定位注射组爬杆实验评分低(P<0.05),Brdu阳性细胞存活多,迁移范围更广。结论 MSCs具有卒中后脑保护作用,而经颈动脉的给药方式优于立体定位注射。
- 杨华静徐光锦褚倩张苏明
- 关键词：骨髓间充质干细胞缺血性脑卒中
- 转突变型淀粉样蛋白前体双荧光融合基因阿尔茨海默病小鼠模型的建立及初步鉴定
- 2010年
- 目的探索建立转突变型淀粉样蛋白前体（APP）双荧光融合基因（CFP-54bp-YFP-C99）转基因小鼠模型的可行性和基因整合效率。方法采用显微注射法，将构建的突变型APP双荧光融合基因注入昆明小白鼠的受精卵，获取子代鼠，通过聚合酶链反应（PCR）方法初步鉴定基因的整合情况，以获得阳性鼠。结果注射昆明小白鼠受精卵共2202枚，移植1806枚。受体鼠56只，怀孕鼠13只，共生产52只子代鼠，其中存活32只。PCR初步检查整合有突变型APP双荧光融合基因的阳性鼠2只，均为活鼠。移植鼠的总怀孕率为23．2％（13／56），突变型APP双荧光融合基因的整合效率为3．9％（2／52）。结论显微注射法建立转突变型APP双荧光融合基因的阿尔茨海默病小鼠模型是可行的，但转基因效率较低。
- 殷小平柴竞艳石元洪张苏明许杰李晓晴杨华静
- 关键词：阿尔茨海默病淀粉样Β蛋白前体基因融合绿色荧光蛋白质类发光蛋白质类
- 聚乙二醇和胰蛋白酶用于猪动脉管道去细胞效果比较被引量：5
- 2007年
- 目的比较0.05%胰蛋白酶-EDTA脱细胞方法与聚乙二醇(poly ethylene glycol,PEG)脱细胞方法对组织物理特性的影响和脱细胞程度。方法用聚乙二醇和胰酶-EDTA处理猪大动脉动脉管道。结果PEG组去细胞百分率为95.32%,胰酶-EDTA组去细胞百分率为90.35%,两组比较P<0.05,PEG组细胞外基质(ECM)结构保存完整;与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论PEG法处理动脉管道较传统的组织工程去细胞更为有效,优越性明显,细胞外基质保存完整,生物力学特性稳定。
- 韩啸蒋雄刚徐鹏张凯伦杨华静
- 关键词：聚乙二醇去细胞
