朱秋菊
- 作品数：7 被引量：18H指数：3
- 供职机构：扬州大学兽医学院更多>>
- 发文基金：江苏省高校高新技术产业发展项目教育部高校骨干教师资助计划更多>>
- 相关领域：生物学农业科学医药卫生更多>>
- 鸡输卵管表达的重组人溶菌酶的鉴定被引量：2
- 2006年
- 用直接结晶法从重组载体注射鸡蛋清中提取重组人溶菌酶（rhLYZ），并对其理化及生物学特性进行了鉴定。结果显示，rhLYZ能被hLYZ特异抗体识别；纯化的rhLYZ和天然hLYZ的热稳定性无显著差异，二者在pH3．0～11．0范围内均具有活性，pH为7．0时活性最强。采用最小抑菌浓度法测定了含rhLYZ蛋清和纯化rhLYZ对12种常见细菌的溶菌活性，二者对除有鞭毛伤寒杆菌和鳖嗜水气单胞菌以外的参试茵均有不同程度的抑制作用。表明，表达在重组栽体注射鸡蛋清中的rhLYZ具有与天然hLYZ十分相似的分子质量、热稳定性、pH活性范围和溶菌谱。
- 朱秋菊孙怀昌赵敏苏王永娟李国才
- 鸡输卵管表达的重组人溶菌酶的鉴定
- 2007年
- 为了对鸡输卵管特异表达载体表达的重组人溶菌酶(rhLYZ)的理化及生物学特性进行鉴定,用直接结晶法从重组载体注射鸡蛋清中提取溶菌酶,以兔抗hLYZ血清为一抗,HRP-标记的羊抗免IgG为二抗,进行Western blotting检测,结果表明表达在鸡蛋清中的rhLYZ能被hLYZ特异抗体识别;将纯化的rhLYZ和天然hLYZ在不同温度的水浴中孵育30min,用RBB-R染料标记比色法检测溶菌酶活性的变化,结果显示二者的热稳定性无显著差异;将纯化的rhLYZ和天然hLYZ用不同PH的溶液稀释,40C孵育30min后进行酶的活性测定,结果显示两者在pH3.0～11.0范围内具有活性,最强活性pH为7.0;以12种常见细菌为试验对象,用最小抑菌浓度法测定含rhLYZ蛋清和纯化rhLYZ的溶菌活性,结果显示两者对鲫鱼嗜水气单胞菌、变形杆菌、枯草杆菌、无鞭毛伤寒杆菌、白色念珠菌和柠檬色葡萄球菌具有很强的抑制作用,对痢疾杆菌、白色葡萄球菌、金黄色葡萄球菌和大肠杆菌具有较强的抑制作用,对有鞭毛伤寒杆菌和鳖嗜水气单胞菌无明显的抑制作用.这些试验结果显示,表达在重组载体注射鸡蛋清中的rhLYZ具有与天然hLYZ十分相似的相对分子质量、热稳定性、pH活性范围和溶菌谱.
- 朱秋菊孙怀昌赵敏苏王永娟李国才
- 关键词：鸡蛋清
- 三种乳腺特异表达载体表达特性的比较被引量：3
- 2004年
- 为了比较不同来源乳腺特异表达载体的表达特性 ,将人溶菌酶 (hLYZ)cDNA分别克隆入自行构建的p2 0 5C3载体和国外引进的pBJ41和pBC1载体。重组载体p2 0 5C3LYZ、pBJLYZ和pBCLYZ分别用 2 5kDaPEI包裹后 ,通过尾静脉途径注射哺乳期小鼠。注射后 72h采集乳样 ,经微球菌溶解实验证明 ,3组小鼠乳汁中hLYZ的表达量分别为 87、69、60mg L ;从每组小鼠的 1 2种组织提取总RNA ,经Dotblotting检测证明 ,三种重组载体除在乳腺中表达外 ,p2 0 5C3LYZ还在小鼠的脾和肠、pBJLYZ在脾、pBCLYZ在脾和肾中具有一定的异位表达 ;在有hLYZmRNA转录的上述脏器中用微球菌溶解试验均可检测到hLYZ活性。这些实验结果表明 ,自行构建的乳腺特异表达载体的表达特性与从国外引进的表达载体无明显差别。
- 李国才孙怀昌朱秋菊张泉居杏珠陈刚薛方明于可响
- 关键词：乳腺注射体表静脉途径特异表达异位表达
- 人溶菌酶基因免疫抗体的制备及其初步应用被引量：1
- 2005年
- 目的制备人溶菌酶(hLYZ)基因免疫抗体。方法用多聚乙酰亚胺包裹重组质粒pcDNA3LYZ,经肌肉注射途径免疫BALB/c小鼠,以间接ELISA检测免疫血清中hLYZ抗体的效价,所得抗体用Western-blotting法检测转基因小鼠乳汁中重组hLYZ的表达情况。结果2次免疫后,小鼠体内产生了hLYZ特异性抗体,效价达1∶800,用此抗体为第一抗体在转基因小鼠乳汁中检测到分子量与正常hLYZ相同的重组hLYZ。结论用基因免疫方法在小鼠体内制备了可用于检测的hLYZ抗体。
- 李国才居杏珠黄永生孙怀昌张泉朱秋菊颜新敏
- 关键词：人溶菌酶基因免疫抗体
- 鸡输卵管暂态表达人溶菌酶的研究被引量：5
- 2006年
- 目的:建立暂态表达人溶菌酶(hLYZ)的鸡输卵管生物反应器,以寻求一种生产药用hLYZ的有效方法。方法:将hLYZcDNA克隆入鸡输卵管特异表达载体pOV1和pOV2,将获得的重组表达载体pOV1LYZ和pOV2LYZ与一定比例的聚乙烯亚胺混合,经翅静脉注射产蛋鸡,用微球菌平板溶菌试验检测蛋清中的溶菌酶活性。结果:2个重组载体注射鸡的蛋清中均有rhLYZ的表达,pOV2LYZ的表达水平及维持时间优于pOV1LYZ。设立4个试验组,分别以不同剂量或注射次数的pOV2LYZ注射产蛋鸡,蛋清中重组酶的定量测定结果表明,1mg/2次注射组的表达效果较好,最高表达量达750μg/mL蛋清,有效表达维持7d左右,载体注射对鸡的产蛋等生理指标无明显影响。当初次载体注射鸡蛋清中的rhLYZ含量下降到注射前水平时,用同样的方法和剂量进行再次注射。结论:蛋清中的rhLYZ表达水平较初次载体注射有所提高,表达维持时间有所延长。用hLYZ特异抗体进行的Western印迹结果显示,表达在蛋清中的rhLYZ相对分子质量与天然hLYZ相同。
- 朱秋菊孙怀昌王劲松高波王志跃
- 人溶菌酶活性两种检测方法的比较研究被引量：6
- 2005年
- 为了比较琼脂平板扩散法和RBB-R染料标记比色法测定溶菌酶活性的灵敏度和可重复性,分别以人溶菌酶标准品建立标准曲线,用两种方法对不同稀释倍数的人溶菌酶进行5次重复测定,并分析测定结果的标准差、变异系数和误差率。结果表明:两种方法测定溶菌酶的灵敏度分别为1.5和0.5μg·mL-1,RBB-R染料法标准差、变异系数、误差率均小于琼脂平板扩散法。用RBB-R染料标记比色法测定的正常鸡蛋清中溶菌酶含量为2.84-4.19mg·mL-1,与报道的相符,说明RBB-R染料标记比色法具有操作简便、定量准确和重复性好等优点,适合大批样品及微量样品的检测。
- 朱秋菊孙怀昌李国才张泉陈瑾
- 关键词：人溶菌酶
- 重组人溶菌酶理化及生物学特性的鉴定被引量：4
- 2005年
- 为了研究转基因小鼠乳腺表达的重组人溶菌酶(rhLYZ)的理化特性及抑菌活性,将适当稀释的含rhLYZ的母鼠乳汁置于60,72,85,100℃的水浴中,每隔0,1,3,5,10,15,20,30min取样,用微球菌溶解法测定rhLYZ的热稳定性;将稀释乳样的pH值调节为2.0,4.0,5.0,7.4,9.0和10.0,37℃作用30min后检测乳样中rhLYZ的活性;将不同的金属离子加入乳样中,使其终浓度为10mmol/L,然后测定金属离子对rhLYZ活性的影响;用培养的革兰氏阳性菌、革兰氏阴性菌及真菌涂布琼脂平板,以平板扩散法检测乳样中rhLYZ抑菌谱,在此基础上挑选敏感菌株进行定量抑菌试验。结果表明,转基因小鼠乳腺表达的rhLYZ与人乳中天然hLYZ都具有很强的热稳定性、相似的pH值活性范围和金属离子敏感性,对多种革兰阳性及阴性细菌具有不同程度的抑菌作用。
- 李国才孙怀昌钱科居杏珠陈瑾张泉朱秋菊
- 关键词：转基因小鼠稳定性抑菌活性
