曹庆华
- 作品数：13 被引量：1H指数：1
- 供职机构：四川大学生命科学学院四川省分子生物学及生物技术重点实验室更多>>
- 发文基金：国家科技支撑计划国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学轻工技术与工程化学工程更多>>
- 荧光假单胞菌高效广谱载体的构建及分析
- 2012年
- 为促进高GC含量基因在荧光假单胞菌(Pseudomonas fluorescens)中表达效果更加理想、操作更加简便,本研究首先采用不依赖基因序列和连接反应的克隆(Sequence and ligation independent cloning,SLIC)方法将载体pCIBhis上与复制相关的序列和标记基因片段构建成克隆载体pCIBS1.然后优化荧光假单胞菌转化方法,用电转化法将pCIBS1导入荧光假单胞菌BL915中,随后又将T7和tac基因启动子分别插入pCIBS1中,成功构建了表达载体pCIBS3和pCIBS2.研究发现载体pCIBS1在大肠杆菌和荧光假单胞菌中均较为稳定,并且将绿色荧光蛋白基因插入表达载体中,在大肠杆菌BL21(DE3)中获得表达,验证了表达载体功能.本研究构建的表达载体和建立的荧光假单胞菌BL915电转化方法,为高GC含量基因在荧光假单胞菌中的表达奠定了基础.
- 曹庆华邵欢欢张义正
- 关键词：荧光假单胞菌SLICGC含量电转化质粒稳定性
- 运动发酵单胞菌-大肠杆菌穿梭载体pSUZM系列及其构建方法
- 本发明公开了一类运动发酵单胞菌-大肠杆菌穿梭载体pSUZM1、pSUZM2和pSUZM3及其构建方法。所述的运动发酵单胞菌-大肠杆菌穿梭载体是一类环状载体，pSUZM1包含来自于运动发酵单胞菌染色体上复制起点oriC、来...
- 谭雪梅曹庆华张义正王海燕冯红
- 文献传递
- 运动发酵单胞菌基因组重组系统RED和CRISPR-Cas9的构建及其应用
- 运动发酵单胞菌(Zymomonas mobilis)是一种高效的乙醇产生菌,基因组仅为2Mb,利用基因组编辑技术对运动发酵单胞菌基因进行敲出和敲入,不仅具有要的科学意义,而且也有很高的应用价值,因此,构建高效和操作简单的...
- 曹庆华李涛吴燕王海燕张义正谭雪梅
- 运动发酵单胞菌基因组序列测定和比较基因组分析
- 运动发酵单胞菌(Zymomonas mobilis)具有特殊的Entner-Doudoroff代谢途径、乙醇产率高、生物量生成少和乙醇耐受力强等特点,但其底物利用范围窄和副产物较多的缺点限制了其生产应用。基因组序列的测定...
- 陈诚曹庆华古英洪张义正
- 关键词：运动发酵单胞菌基因组比较基因组
- 文献传递
- 粗毛栓菌转录组全序列测定和分析
- 粗毛栓菌(Trametes gallica)是一种具有较强的降解木质纤维素能力的真菌,在不同培养条件下可以产生多种漆酶。该菌的基因组序列至今仍未测定。本研究通过粗毛栓菌转录组全序列测定和分析,可以获得很多有用的基因编码序...
- 陈月红曹庆华陶向张义正
- 关键词：粗毛栓菌转录组基因注释
- 文献传递
- 运动发酵单胞菌CRISPR-Cas9系统的构建与应用
- 构建CRISPR-Cas系统表达质粒pSUZM1a-Cas9，pSUZM2a-Cas9，pSUZM3a-Cas9，包含运动发酵单胞菌内源性基因启动子、筛选标记基因和CRISPR系统的Cas9基因。构建表达质粒pUC-T7...
- 谭雪梅曹庆华张义正王海燕冯红
- 文献传递
- 运动发酵单胞菌RecET重组系统的构建及应用被引量：1
- 2016年
- 为了提高外源基因整合到染色体的效率,在已构建的运动发酵单胞菌-大肠杆菌穿梭载体基础上,构建了RecET表达质粒pSUZM3a-RecET.选取乙醇脱氢酶Ⅰ(adhA)基因作为靶基因,四环素抗性基因(Tcr)作为筛选标记基因,检测RecET重组系统在Z.mobilis中进行基因重组的可行性.将两端带有60bp adhA基因同源臂的四环素抗性基因片段电击转化含有RecET重组系统表达质粒的运动发酵单胞菌ZM4,获得adhA基因缺失突变菌株.对突变菌株adhA基因的PCR产物进行测序发现,adhA基因已被置换为四环素抗性基因.上述结果表明:RecET重组系统在运动发酵单胞菌中具有高效、便捷和可操作性,只需60bp同源臂即可完成同源重组.
- 李涛曹庆华吴燕谭雪梅张义正
- 关键词：运动发酵单胞菌基因敲除基因敲入
- 运动发酵单胞菌RecET重组系统表达质粒及其构建方法与应用
- 本发明公开了6个用于运动发酵单胞菌的RecET重组系统表达质粒pSUZM1a-RecET(RecE588T)、pSUZM2a-RecET(RecE588T)、pSUZM3a-RecET(RecE588T)及其构建方法与应...
- 谭雪梅李涛曹庆华张义正王海燕冯红
- 文献传递
- 粗毛栓菌漆酶基因的克隆、序列分析及荧光定量PCR分析
- 2014年
- 本研究通过提取不同培养条件下的粗毛栓菌总RNA,利用RT-PCR的方法克隆到1个新的漆酶基因,命名为Tglac3,编码区长1,560bp,预测编码519个氨基酸残基,其分子量为56.6kDa,理论等电点为5.77.用荧光定量RT-PCR法分析了该漆酶基因在不同培养条件下的表达水平,结果显示,高浓度的碳源和氮源均能诱导Tglac3基因的表达.
- 陈月红曹庆华邵欢欢张昆谭雪梅张义正
- 关键词：粗毛栓菌漆酶基因克隆荧光定量PCR
- 运动发酵单胞菌RED重组系统表达质粒及其构建方法与应用
- 本发明公开了一类能在运动发酵单胞菌中应用RED重组系统的质粒pSUZM1a-RED、pSUZM2a-RED和pSUZM3a-RED及其构建方法与应用。质粒pSUZM1a-RED、pSUZM2a-RED和pSUZM3a-R...
- 谭雪梅曹庆华张义正王海燕冯红
- 文献传递
