目的勘探河南神仙洞放线菌多样性,以期发现药用微生物资源,为新抗生素发现奠定基础。方法采用10种分离培养基,以稀释涂布法分离放线菌;采用16S r RNA基因序列比对分析开展初步鉴别;经液体发酵,发酵液乙酸乙酯萃取,菌丝体丙酮浸提,获得提取浓缩物样品,采用纸片扩散法对样品进行抗菌活性筛选,活性菌株进行次级代谢产物生物合成基因NRPS,PKS I和PKS II的筛选。结果从6份土壤样品中共纯化到179株放线菌;经16S r RNA基因序列比对分析,它们分布于11个科18个属,其中链霉菌属为优势菌属;菌株S6R2A4-9的16S r RNA基因序列与最近有效菌株Flindersiella endophytica EUM 378T的相似率为93.58%,为潜在新属;发酵74株放线菌,其中52株在至少一个抗菌活性筛选中为阳性,总阳性率为70.27%。52株有活性的放线菌中,48株菌存在至少一个次级代谢产物生物合成基因簇,阳性率为92.3%,其中17株同时具有3种生物合成基因簇。结论河南新密神仙洞土壤中存在较为丰富的药用放线菌资源,具有从中发现放线菌新物种及新抗生素的潜力。
【目的】勘探海南东寨港真红树植物内生放线菌多样性,为发现放线菌新物种和新抗生素奠定基础。【方法】样品经表面消毒后粉碎,用10种不同培养基分离放线菌;通过PCR扩增、测定并比对16S r RNA基因序列,开展放线菌多样性分析;通过发酵、萃取等处理方法得到四类样品,包括发酵原液、乙酸乙酯提取液及水层和菌体的丙酮浸泡提取液;采用纸片扩散法对样品进行抗菌活性筛选;基于PCR的基因筛选技术探测活性菌株可能存在的NRPS、PKS I、PKS II抗生素生物合成基因。【结果】经形态特征排重,从14种真红树植物样品中共得到放线菌146株,16S r RNA基因序列比对表明它们分布于13个科18个属,其中链霉菌属为优势菌属,菌株S3Cf-2和S3Af-1的16S r RNA基因序列分别与有效发表菌株Couchioplanes caeruleus DSM44103T(X93202)和Microlunatus terrae BS6T(JF806519)的相似率最高,分别为97.45%和97.43%,可能为新物种。对其中46株放线菌发酵样品的抗菌活性检测表明,40株具有抗菌活性,总阳性率为86.96%;活性菌株中,38株菌存在至少一种所探测的生物合成基因簇,阳性率为95%,其中14株同时具有所探测的3种抗生素生物合成基因簇。【结论】海南东寨港真红树植物中存在多样性丰富的药用放线菌资源,具有从中发现放线菌新物种及新抗生素的潜力。
目的勘探广东湛江红树林植物内生放线菌多样性,为发现放线菌新物种和新抗生素奠定基础。方法样品经表面消毒后粉碎,10种不同培养基分离放线菌;通过PCR扩增、测定并比对16S r RNA基因序列,开展放线菌多样性分析;经发酵,离心,乙酸乙酯萃取上清液,旋转蒸发获得浓缩物,甲醇溶解制成样品;采用纸片扩散法对样品进行抗菌活性筛选;采用96孔板法,以秀丽隐杆线虫为对象,对样品进行杀线虫活性筛选;基于PCR的基因筛选技术初步探测活性菌株NRPS、PKS I、PKS II抗生素生物合成基因簇。结果经形态特征排重,从11份植物样品中共得到放线菌159株,16S r RNA基因序列比对分析表明,它们分布于8个目12个科19个属,其中链霉菌属为优势菌属,菌株IP4SC6为海藻球菌属潜在新种;发酵88株放线菌,发酵液乙酸乙酯萃取浓缩物测活结果表明,至少对一株检定菌表现为阳性的菌株有46株,总阳性率为52.27%,其中36株菌可能存在抗生素生物合成基因簇,8株可能同时具有3种抗生素生物合成基因簇;对秀丽隐杆线虫有较强杀虫活性的放线菌有3株,LC50值分别为83.2,132.0和138.0mg/m L。结论广东湛江红树林植物中存在多样性丰富的药用放线菌资源,具有从中发现放线菌新物种及新抗生素的潜力。
目的筛选来自塔克拉玛干沙漠沙生植物对铜绿假单胞菌具有抑制活性的内生放线菌菌株,对拟诺卡菌属菌株38-7L-1发酵液中活性化合物进行分析预测、分离纯化和结构验证。方法采用琼脂平板法进行抗菌活性筛选;基于16S r RNA基因序列对菌株38-7L-1进行初步分类鉴定;基于菌株38-7L-1 PKS I基因的KS域序列分析结果 ,结合活性峰的液-质联用数据,比对微生物天然产物数据库,预测活性化合物201的结构;通过色谱方法纯化化合物201;结合光谱数据分析及文献比对,确定和验证化合物201的结构。结果从81株沙生植物内生放线菌中获得7株活性菌株,包括链霉菌属菌株4株、考克菌属菌株1株、多形孢菌属菌株1株和拟诺卡菌属菌株1株。其中菌株38-7L-1活性最强并具有I型聚酮合酶基因,16S r RNA基因序列分析表明该菌株与Nocardiopsis alba DSM 43377T(X97883)的相似率为100%。菌株3 8-7L-1抗铜绿假单胞菌活性次级代谢产物,化合物201为十六元大环内酯类化合物,蔷薇霉素。结论 首次从拟诺卡菌中分离到常见于小单孢菌的蔷薇霉素,多策略组合对次级代谢产物结构预测具有指导意义。
