徐明
- 作品数：16 被引量：15H指数：3
- 供职机构：中国农业科学院农产品加工研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划公益性行业(农业)科研专项更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 鉴定大丽轮枝菌致病型的试剂盒和基因及其方法
- 本发明提供了一种高致病性大丽轮枝菌(Verticillium dahliae)基因，其中，该基因具有SEQ ID NO：1所示的核苷酸序列。本发明还提供了一种鉴定大丽轮枝菌致病型的方法，该方法包括以下步骤：（1）制备含有...
- 戴小枫陈捷胤徐明马雪峰李蕾孔志强包郁明肖红利桂月晶
- 文献传递
- 高毒力大丽轮枝菌VDG1特异分泌蛋白HSSP致病相关功能分析被引量：2
- 2015年
- 以棉花高毒力大丽轮枝菌(Verticillium dahliae Kleb.)菌株VDG1和低毒力大丽轮枝菌菌株VDG2基因组测序数据为基础,通过比较基因组学和分泌蛋白预测发现VDG1中1个特异分泌蛋白,将其命名为HSSP。通过PEG介导的原生质体转化方法获得了该基因的敲除突变株ΔHSSP,并以木糖、淀粉、纤维素、果胶、木聚糖和半乳糖为底物模拟分析了其降解细胞壁组分的能力,发现该突变体的果胶酶、木聚糖酶和半乳糖酶活力较野生型显著降低;通过测定菌丝产量和孢子产量,发现HSSP基因对菌丝和孢子的形成均有重要作用;通过定量蘸根接种法在感病棉种军棉1号上测定致病力,发现HSSP基因敲除突变体的致病力与野生型相比明显减弱。上述结果说明HSSP作为高毒力大丽轮枝菌菌株VDG1中1个特异的分泌蛋白在对寄主棉花的致病过程中发挥了重要作用。
- 徐明陈捷胤马雪峰王新艳郭维戴小枫
- 关键词：大丽轮枝菌分泌蛋白致病力
- 大丽轮枝菌分泌蛋白提取方法比较被引量：3
- 2014年
- 【目的】采用超滤法(UF)、三氯乙酸沉淀法(TCA)、离子交换富集法(IEX)分别从大丽轮枝菌(Verticillium dahliae)高致病性菌株VdG1培养上清液中提取分泌蛋白,对提取样品进行质谱鉴定。寻找适合大丽轮枝菌分泌蛋白的提取方法,为大丽轮枝菌分泌蛋白组深入研究奠定基础。挖掘大丽轮枝菌分泌蛋白中潜在的致病相关蛋白,为其深入功能验证及致病机理研究提供平台。【方法】3种方法提取大丽轮枝菌VdG1分泌蛋白,shot-gun方法进行质谱鉴定。利用生物信息学软件WoLFPSORT、SignalP、TMHMM、PHOBIUS对其中经典分泌蛋白进行预测。通过CAZy和PHI数据库进行经典分泌蛋白中碳水化合物水解酶(CAZy)和病原菌寄主互作因子(PHI)注释,BLASTp软件进行RxLx、LysM、Cys Pattern等模体蛋白比对分析。提取的蛋白样品接种感病棉种(军棉1号)进行样品生物学活性及致病性检测。【结果】TCA法、IEX法和UF法制备大丽轮枝菌分泌蛋白,其提取效率分别为1.18、0.96和0.56 mg·L-1。SDS-PAGE电泳检测显示UF法提取的蛋白样品条带少而模糊。而TCA法和IEX法提取的蛋白样品条带较多,样品的纯度也较高;经生物信息学软件预测分析,提取的蛋白样品中含有经典分泌蛋白分别为124、112和75个;质谱鉴定的分泌蛋白中含有潜在致病因子分别为98、85和57个;另外,IEX法制备大丽轮枝菌分泌蛋白效果较好,具有小分子偏好性,且能够保持样品的生物学活性,该蛋白样品接种棉花叶片能够引起萎蔫、坏死的症状。【结论】3种方法提取大丽轮枝菌分泌蛋白,UF法提取效率最低,纯度最差,蛋白数量最少,蛋白样品中含有潜在的毒素蛋白数量也最少,而且对于大体积处理相当耗时。TCA法和IEX法都适合大丽轮枝菌分泌蛋白的制备,但是TCA法制备过程中不能保持样品的生物学活性,后续适合于2-D电泳检测等试验。IEX法首次应用于病原菌分泌蛋白�
- 肖红利桂月晶祁伟彦陈捷胤李蕾徐明戴小枫
- 关键词：大丽轮枝菌分泌蛋白LC-MS/MS
- 一种多座式圆底烧瓶瓶托
- 本实用新型公开了一种多座式圆底烧瓶瓶托，为解决现有圆底烧瓶瓶托通用性差等问题而设计。该多座式圆底烧瓶瓶托包括瓶托本体，所述瓶托本体上开设有多个贯通的容置孔，所述容置孔为孔径自上而下逐渐减小的阶梯孔。所述阶梯孔由多个阶梯孔...
- 戴小枫包郁明孔志强陈捷胤李蕾马雪峰肖红利徐明王新艳
- 文献传递
- 斜面培养基的配置辅助设备
- 本实用新型提供一种斜面培养基的配置辅助设备，包括加热装置（20）和试管架（10），所述加热装置（20）包括加热面板（21）和位于该加热面板一端的支腿（22），所述试管架（10）能够固定于所述加热面板（21）上。通过上述技...
- 戴小枫孔志强陈捷胤包郁明李蕾肖红利徐明桂月晶
- 文献传递
- 大丽轮枝菌致病性相关突变体快速筛选体系的建立被引量：3
- 2015年
- 【目的】建立适合于大丽轮枝菌(Verticillium dahliae)致病性相关突变体的快速筛选体系,为突变库中与致病性相关突变体的系统筛选和鉴定提供技术支撑。【方法】棉花幼苗接种于5.0×104、5.0×105、5.0×106、5.0×107和5.0×108孢子/m L的孢子悬浮液30 min,通过病情指数调查明确引起棉花黄萎病发生的病原菌浓度范围;对培养于培养瓶的大丽轮枝菌分别加入15、25、35和45 m L的灭菌水,利用血球计数板检测洗脱的孢子浓度,明确不同体积灭菌水对洗脱孢子悬浮液浓度的影响;以保存于96孔板的突变体为单位,在培养皿上进行单孢分离并挑取单个孢子于培养瓶中扩繁培养,培养后于培养瓶中直接加入适宜体积灭菌水洗脱孢子,并将棉花幼苗直接置于含有孢子悬浮液的培养瓶中处理30 min,接种后继续培养14 d并调查结果;致病性相关突变体的可靠性检验采用定量菌液蘸根接种法,每个突变体接种30株棉花幼苗,3个重复,孢子浓度为5.0×106孢子/m L,每株棉花幼苗按接种5 m L菌液计算,处理30 min,分别在第5、8、11和14天调查病情指数。【结果】明确了适合于大丽轮枝菌致病力快速鉴定的接种孢子浓度为>5.0×105孢子/m L;建立了大丽轮枝菌培养方法,单孢纯化培养5 d,培养瓶中扩大培养9 d,确定了快速定量制备孢子悬浮液的洗脱体积为25 m L,测试的20个突变体的洗脱孢子浓度范围在(2.55±0.58)×106—(1.72±0.25)×107孢子/m L;优化了单孢分离、扩大培养、孢子悬浮液制备、接种、继续培养和结果统计等环节,建立了大丽轮枝菌致病性快速鉴定流程,进一步统筹设计构建了大丽轮枝菌致病性相关突变体快速筛选体系;测试表明该体系1人1个循环共7个流程可完成1 344个突变体筛选,周期54 d,工作量为21人日;采用定量菌液蘸根法重复验证结果,突变体致病力同样显著下降,与快速筛选体系的鉴定结果一致,表明该体
- 王新艳张丹丹桂月晶李楠洋徐明陈捷胤戴小枫
- 关键词：大丽轮枝菌
- 防治棉花黄萎病的菌剂及其制备方法和它们的应用
- 本发明提供了一种防治棉花黄萎病菌剂，该菌剂包括培养基和菌体，其中，所述菌体包括枯草芽孢杆菌（Bacillus？subtilis）、短小芽孢杆菌（Bacillus？pumilus）、蜡样芽孢杆菌（Bacillus？cere...
- 戴小枫马雪峰陈捷胤李蕾孔志强包郁明肖红利徐明桂月晶祁伟彦王新艳
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- 防治棉花黄萎病的菌剂及其制备方法和它们的应用
- 本发明提供了一种防治棉花黄萎病菌剂，该菌剂包括培养基和菌体，其中，所述菌体包括枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）、短小芽孢杆菌（Bacillus pumilus）、蜡样芽孢杆菌（Bacillus cere...
- 戴小枫马雪峰陈捷胤李蕾孔志强包郁明肖红利徐明桂月晶祁伟彦王新艳
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- 鉴定大丽轮枝菌致病型的方法和试剂盒及含有的核酸和引物对
- 本发明提供了一种核酸，该核酸具有SEQ？ID？NO：1所示的序列。本发明还提供了扩增如上所述的核酸的引物对。本发明还提供了一种鉴定真菌菌株致病型的方法，所述真菌菌株为大丽轮枝菌，该方法包括以下步骤：（1）制备含有大丽轮枝...
- 戴小枫李蕾陈捷胤马雪峰孔志强包郁明肖红利桂月晶徐明
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- 利用特异基因鉴定高致病型大丽轮枝菌的方法及其应用
- 本发明提供了一种高致病型大丽轮枝菌(Verticillium dahliae)基因，其中，该基因具有SEQ ID NO：1所示的核苷酸序列。本发明还提供了一种鉴定大丽轮枝菌致病型的方法，该方法包括以下步骤：（1）制备含有...
- 戴小枫陈捷胤马雪峰徐明李蕾孔志强包郁明肖红利桂月晶
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