彭倩
- 作品数：3 被引量：7H指数：2
- 供职机构：新疆大学生命科学与技术学院生物资源基因工程重点实验室更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金科技基础性工作专项新疆生物资源基因工程重点实验室开放基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 新疆出血热病毒截短糖蛋白的原核表达及抗体制备被引量：4
- 2015年
- 目的：原核表达纯化新疆出血热病毒79121毒株糖蛋白截短片段（ Gn、Gc1和Gc2）并分别制备其多克隆抗体。方法采用反转录PCR的方法克隆79121毒株Gn、Gc1及Gc2基因片段，并将其构建到原核表达载体pET-28a（＋）中，转化到E．coli BL21（DE3）中进行诱导表达，经镍柱亲和层析法纯化Gn-His、Gc1-His及Gc2-His融合蛋白，SDS-PAGE分析蛋白相对分子质量（ Mr ）。用纯化蛋白免疫新西兰白兔制备抗血清，ELISA和Western blot法检测血清效价和特异性。结果双酶切鉴定和测序证实构建的pET-28a-Gn、pET-28a-Gc1和pET-28a-Gc2重组表达载体正确，表达的融合蛋白Gn-His、Gc1-His和Gc2-His其Mr 分别约为25×103、33×103和34×103。 ELISA法检测抗体效价分别为1∶25600、1∶6400及1∶25600。 Western blot结果表明兔多克隆抗体均能特异性识别相应的重组蛋白。结论新疆出血热病毒截短糖蛋白的表达纯化和效价高、特异性好的兔抗血清的制备，为新疆出血热病毒的检测和糖蛋白生物学功能的深入研究提供资料。
- 俞欢汪梅芳张渝疆彭倩寇春达尔肯·托肯李阳李轶杰孙素荣
- 关键词：新疆出血热病毒糖蛋白原核表达多克隆抗体
- 新疆出血热病毒重组核蛋白及糖蛋白片段能诱导小鼠免疫应答被引量：1
- 2015年
- 目的研究重组表达的新疆出血热病毒(XHFV)核蛋白和糖蛋白截短片段在刺激机体免疫应答中的作用。方法采用基因重组技术和亲和层析技术对XHFV截短的核蛋白(NP2)、糖蛋白片段(Gc和Gn)进行表达和纯化,并通过蛋白免疫及核酸初次免疫、蛋白加强免疫的方式免疫BALB/c小鼠,通过ELISA检测鼠血清抗体效价,采用T淋巴细胞增殖试验检测细胞免疫应答的效果,对上述表达产物刺激小鼠免疫应答的作用进行初步评价。结果利用原核表达系统成功表达纯化出XHFV核蛋白和糖蛋白截短片段。重组蛋白免疫BALB/c小鼠后能刺激机体产生Ig G(效价为1∶12 800以上),并能与相应的抗XHFV核蛋白及糖蛋白的多克隆抗体发生特异性反应。各组均能有效地激发较强的细胞免疫应答,其中p VAX1-Gc联合r Gc实验组小鼠脾脏淋巴细胞增殖明显,与对照组相比,差异具有统计学意义(P<0.01)。结论获得的重组XHFV核蛋白、糖蛋白片段能有效刺激小鼠的体液和细胞免疫应答。
- 汪梅芳周昭瑞李阳寇春达尔肯.托肯彭倩张渝疆王曼丽孙素荣
- 关键词：新疆出血热病毒糖蛋白核蛋白重组蛋白免疫原性
- 重组新疆出血热病毒S和M基因疫苗诱导小鼠免疫应答的评价被引量：5
- 2014年
- 目的选取新疆出血热病毒M基因（编码糖蛋白Gn,Gc）和S基因（编码核蛋白NP）部分基因片段,并进行部分片段的嵌合,分别插入至真核表达载体PVAX1中构建重组质粒,并将重组质粒分别免疫小鼠,评价其诱导的体液和细胞免疫应答的效果。方法将NP（aa1~482）、NP2（aa170~305）和糖蛋白Gn（aa529~820）、Gc（aa1050~1697）片段,及Gc-NP2片段分别构建到真核表达载体PVAX1上构建重组质粒,用重组质粒免疫小鼠,通过T细胞增殖试验,细胞因子含量测定和ELISA对免疫效果进行评价。结果经双酶切鉴定和DNA测序证实重组质粒构建正确。pVAX1-NP2实验组小鼠的血清抗体效价可以达到1∶6 400,pVAX1-NP2及pVAX1-Gc-NP2实验组小鼠脾脏T淋巴细胞增殖明显,两组的IFN-γ的表达水平也高达（865.15±6.29）pg/mL及（1727.21±33.93）pg/mL,与对照组相比,差异具有统计学意义（P〈0.01）。pVAX1-NP2及pVAX1-Gn实验组IL-4的表达水平为（19.11±1.20）pg/mL和（20.07±1.67）pg/mL,都显著高于对照组的（9.35±1.82）pg/mL（P〈0.05）。结论成功构建了多个重组真核表达载体,免疫小鼠后获得了效价高,特异性好的抗体。各重组质粒都激起了较强的体液免疫及细胞免疫,pVAX1-NP2及pVAX1-Gc-NP2实验组效果最好,可将其作为新疆出血热病毒的候选疫苗。
- 李阳刘东亮汪梅芳武勇凯王咏星李轶杰彭倩马洁杨建华孙素荣
- 关键词：新疆出血热病毒基因免疫基因疫苗
