张金吨
- 作品数：10 被引量：14H指数：2
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- 相关领域：农业科学医药卫生生物学更多>>
- 利用携带Xist Tale抑制性转录因子R6的R6-MEF制备饲养层细胞的方法
- 本发明公开了一种利用转染了R6的MEF制备新型饲养层细胞的方法，首先利用结合于Xist第一内含子区的基于类转录激活效应物样Tale的抑制性转录因子R6转染MEF获得永生型MEF细胞系R6‑MEF，经过对多种R6‑MEF细...
- 张金吨李喜和
- 文献传递
- 利用piggyBac载体建立小鼠诱导性多能干细胞
- 本文利用piggyBac载体携带鼠源的Oct4、Sox2、Klf4和c-Myc成功的建立了小鼠胚胎多功能干细胞。通过对所制备的小鼠诱导性多能干细胞(miPS)的检测，认定其具有与小鼠胚胎干细胞CmES)相似的多能性。
- 张金吨赵丽霞吴宝江戴雁峰郭继彤李喜和
- 关键词：小鼠多能干细胞PIGGYBAC
- 利用piggyBac载体制备小鼠诱导性多能干细胞被引量：5
- 2012年
- 小鼠体细胞可通过转入干细胞转录因子而诱导生成多能干细胞,这种干细胞称为诱导性多能干细胞(iPSC).利用逆转录病毒、慢病毒、腺病毒、质粒载体、多蛋白表达系统、合成性mRNA及microRNA已成功将小鼠和人的体细胞诱导成多能干细胞.piggyBac是转座频率较高的转座子载体,也已作为载体成功诱导出多能干细胞.为了研究以piggyBac载体诱导出的多能干细胞的体内外分化能力,利用携带Oct4,Sox2,Klf4和c-Myc转录因子的piggyBac转座载体进行了小鼠体细胞的转染诱导,结果诱导获得的iPS细胞碱性磷酸酶染色呈阳性;免疫组化染色OCT4,NANOG,SSEA-1为阳性;RT-PCR检测Oct4,Sox2,c-Myc和Klf4呈阳性.同时诱导获得的iPS细胞系在体外自发分化后,免疫组化染色AFP,BRACHYURY和NCAM1呈阳性,表明分化形成了3个胚层的细胞;该细胞系皮下注射免疫缺陷小鼠iPS细胞形成了畸胎瘤.实验发现,获得的干细胞系可与小鼠8-细胞聚合,进入到嵌合胚胎的内细胞团.这些结果表明,由piggyBac载体诱导的小鼠多能干细胞iPS具有干细胞的主要特性,包括体内外的分化能力.
- 张金吨赵丽霞吴宝江李云霞张静南苏杰孙伟戴雁峰郭继彤胡树香李瑶汪玮刘鹏涛李喜和
- 关键词：小鼠PIGGYBAC诱导性多能干细胞拟胚体
- 梅花鹿体细胞航天诱变后的生物学特性变化分析被引量：1
- 2018年
- 本研究以自主研发的聚偏二氟乙烯膜(PVDF)细胞培养技术进行了梅花鹿(Cervus nippon)体细胞的航天培养及生物诱变,并分析了其细胞在航天诱变后的生长曲线和核型特性。采用耳缘皮肤组织块贴壁培养的方法进行体细胞的原代培养;胰蛋白酶消化的方法完成细胞的传代培养;依照程序降温的方法完成细胞的冷冻保存;每天计数24孔板每孔的活细胞数并利用Excel 97-2003绘制出细胞的生长曲线,采用IBM SPSS Statistics 23统计软件回归分析程序中的非线性回归分析子程序Logistic曲线模型分析细胞生长曲线的拟合度;以常规染色体标本制备技术,利用细胞遗传工作站(AI)软件对梅花鹿体细胞的染色体核型进行分析。实验结果表明,新开发的PVDF膜细胞培养技术可有效保持梅花鹿体细胞在太空飞行过程中的存活并成功回收、传代建系。通过细胞传代培养观察发现,该体细胞经航天诱变后保持正常的成纤维细胞特征,生长曲线呈"S"型,航天诱变组体细胞在培养4 d进入对数生长期,与对照组体细胞在培养2 d进入对数生长期相比其细胞增殖速度减慢。拟合生长曲线分析表明,航天诱变组细胞生长拟合度值与对照组相似,但细胞增殖拐点时间、拐点细胞量分析结果证明,航天诱变后的体细胞增殖速度减慢。核型分析显示,航天诱变梅花鹿体细胞染色体数保持2n=66,染色体形态正常,核型为66(XX),其中32对常染色体,1对性染色体。本研究建立了哺乳动物在航天运行条件下的细胞培养PVDF新技术,并分析了航天诱变对于梅花鹿细胞生物学特性变化的影响,为以后进行相关研究提供了基础信息和技术支持。
- 郭晶营韩红梅梁延峰范丽红王子馨赵丽霞张金吨张金吨李喜和
- 关键词：航天诱变
- Xist基因抑制对牛SCNT早期胚胎发育的影响
- 2015年
- Xist是与X染色体失活相关的非编码基因,它在合子期基因组开始表达,是胚胎发育早期表达的第一个印记基因。探讨了特异性抑制Xist的TALER-REPRESSOR(TALER)载体转染到胎牛成纤维细胞对Xist基因的抑制作用,并以抑制Xist基因表达的细胞作为核供体制作克隆胚胎,研究Xist基因抑制对牛克隆胚早期发育的影响。结果显示,与对照组细胞相比,TALER载体将Xist相对表达量下调了93.85%,说明本试验设计的载体转染系统能够有效抑制Xist基因的表达。选取Xist抑制表达阳性的转染细胞用于体细胞核移植试验,克隆胚胎发育结果显示,试验组和对照组的卵裂率、8细胞发育率、桑葚胚发育率和囊胚发育率分别为78.8%vs 75.1%(P>0.05,无显著差异)、54.4%vs 50.6%(P>0.05,无显著差异)、12.3%vs 27.8%(P<0.01,差异极显著)、0 vs 26.6%(P<0.01,差异极显著)。综上所述,试实验设计的特异性抑制Xist表达的TALER载体可有效抑制雌性胎牛成纤维细胞中Xist的表达。供体细胞Xist这种基因下调可使克隆胚胎2-8细胞率略有提升,但囊胚期和桑葚胚率明显降低。因此,其机制尚待于进一步探讨。
- 刘黎明孙伟张金吨赵丽霞李树裕王标陈杨林胡树香吴宝江李喜和
- 阿拉伯马染色体G带核型分析被引量：7
- 2011年
- 为了比较阿拉伯马与普通马的差异,利用培养的阿拉伯母马体细胞,制备和分析了其染色体组型。试验采用体外培养的阿拉伯马成纤维细胞,用常规染色体标本制作技术,制备了阿拉伯马染色体G带,并完成了染色体组型配对分析。结果显示阿拉伯马染色体数目为2n=64,包括31对常染色体和1对XX性染色体。其中1~13号染色体为中或亚中着丝粒染色体,14~31号染色体为端着丝粒染色体,X染色体则为第2对大亚中着丝粒染色体。G带核型显示阿拉伯马染色体G带明暗相间,每对染色体都有独特的带纹特征。本研究是首次在国内报道阿拉伯母马染色体G带特征。这将为阿拉伯马细胞遗传学研究和疾病诊断提供资料,也将为认识阿拉伯马与普通马的不同提供细胞水平的依据。
- 张静南刘永斌张金吨苏杰李云霞孙伟赵丽霞郭继彤李喜和
- 关键词：成纤维细胞染色体核型G带
- 利用piggyBac转座子制备牛成体多能干细胞诱导技术研究被引量：1
- 2013年
- 通过逆转录病毒等媒介表达核转录因子Oct4、Sox2、Klf4、c-Myc可将体细胞重编程为诱导多能干细胞(induced pluripotent stem cells,iPSc)。时至今日,已经报道了小鼠、人、大鼠、猪、羊、马、牛的iPS细胞,但大动物iPS的多能性特别是嵌合体形成和生殖细胞传代还没有得到确认。与逆转录病毒等不同的是,piggyBac转座子转染效率高且无病毒源性、操作简单,可以在转座酶的存在下被安全切除。首次尝试了采用piggyBac转座子携带鼠源Oct4、Sox2、Klf4、c-Myc、Rarg和Lrh1 6个核转录因子诱导胎牛成纤维细胞,成功获得牛类iPS细胞,其形态与小鼠胚胎干细胞相似,克隆边界清晰、呈丘状、克隆内细胞致密、核大。RT-PCR与免疫组织化学染色分析均显示牛类iPS细胞表达多能性基因。该类细胞体外诱导分化可形成类胚体EB,且表达3个胚层的基因;体内诱导分化可形成畸胎瘤,苏木精、伊红染色显示瘤体有三胚层的分化。上述结果显示利用piggyBac转座子制备牛多潜能干细胞诱导技术可行,产生的牛类iPS细胞具有潜在多能性。
- 赵丽霞张金吨张健李云霞苏杰孙伟赵高平戴雁峰郭继彤胡树香WANG WeiLIU Pen-tao李喜和
- 关键词：PIGGYBAC诱导多能干细胞
- 过表达cdc20基因对绒山羊卵母细胞体外成熟的影响被引量：1
- 2015年
- 为研究过表达cdc20基因对绒山羊卵母细胞体外成熟的影响,构建了Myc-cdc20载体,在体外转录成cRNA后显微注射到绒山羊卵母细胞中,观察其对绒山羊卵母细胞体外成熟过程的影响。结果表明,在对照组卵母细胞体外培养的过程中,卵母细胞培养到8 h后发生GVBD,18 h后进入MⅠ期,直到24 h后,约75%的绒山羊卵母细胞排出第一极体。卵母细胞在GV期时显微注射g Myc-cdc20 cRNA,培养10 h后,通过Western Blotting的方法检测到了MYC-CDC20融合蛋白的表达。但统计结果显示,试验组卵母细胞各阶段发育时间和成熟率与对照并无显著差异。因此,单独过表达cdc20基因不影响绒山羊卵母细胞体外成熟过程。
- 张金吨王标李云霞陈杨林刘黎明戴雁峰李喜和
- 关键词：过表达体外成熟
- 单一体外转录因子诱导小鼠多能性干细胞
- 张金吨
- 家畜航天生物育种体细胞培养体系的建立
- 引言/目的航天生物育种技术已成为快速培育农作物优良品种的重要途径之一,目前已在水稻、小麦、棉花、番茄、青椒和芝麻等作物上诱变培育出一系列高产、优质、多抗的农作物新品种。而航天生物育种在家畜种业的研究报道甚少,这是因为与植...
- 张金吨韩红梅翁雷梁延峰范丽红刘黎明曹贵方李喜和
