吴明祥
- 作品数：4 被引量：20H指数：3
- 供职机构：福建医科大学附属第一医院更多>>
- 发文基金：福建省科技厅资助项目福建省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 人碱性成纤维细胞生长因子基因转染大鼠骨髓间充质干细胞的研究被引量：6
- 2010年
- 目的 观察人碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）基因体外转染对大鼠骨髓间充质干细胞（MSCs）bFGF表达的影响.方法 密度梯度离心、贴壁法培养分离SD雄性大鼠MSCs,体外扩增,流式细胞仪检测MSCs表面抗原表达.利用慢病毒载体系统介导将具有人源性bFGF基因转染至第2代MSCs,在倒置荧光显微镜下观察转染后细胞形态和生长的变化,应用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）、Western blot法鉴定bFGF在MSCs中的表达.结果 密度梯度离心、贴壁法培养分离可获得MSCs,P3代大鼠细胞利用流式细胞仪检测CD11b/c阳性细胞表达率为（13.2±0.6）%,CD34阳性细胞表达率为（1.2±0.5）%,CD44阳性细胞表达率（97.8±0.9）%,CD90阳性细胞表达率（96.8±1.4）%.MSCs转染48 h后,绿色荧光蛋白的表达明显增强.RT-PCR证实转基因MSCs表达bFGF mRNA明显增强,Western blot检测证实转基因MSCs在49 KDr出现特异性条带,而空白和空载组的MSCs则未见阳性条带.结论 采用慢病毒介导的基因转染技术可以将bFGF基因转染至MSCs中,并有外源性bFGFmRNA和蛋白的有效表达,MSCs可作为bFGF基因治疗的载体.
- 张金池吴明祥王玉龙郭平凡刘学强
- 关键词：成纤维细胞生长因子骨髓间充质干细胞转染
- 人碱性成纤维生长因子基因修饰大鼠骨髓间充质干细胞的研究被引量：3
- 2013年
- 目的观察人碱性成纤维生长因子（bFGF）基因修饰大鼠骨髓间充质干细胞（BMSCs）在体外向血管内皮样细胞分化的能力。方法利用密度梯度离心分离和贴壁培养相结合的方法从SD大鼠骨髓中提纯单个核细胞，体外扩增3代，倒置显微镜观察细胞生长及形态，流式细胞仪检测BMSCs表面抗原表达。取扩增第3代的BMSCs，分为3组：阴性对照组（普通的BMSCs组）、空白对照组（不含bFGF基因但含有GFP的慢病毒载体转染组）、实验组（含bFGF目的基因的慢病毒载体转染组），3组同法培养[培养基10％胎牛血清、50μg／L血管内皮生长因子（VEGF）的L-DMEM培养基]。1周后各组上清液ELSIA法测定bFGF含量，4周后各组行细胞形态学观察，免疫细胞化学法检测细胞表面标记分子CD31、CD34及Ⅷ因子的表达及Dil—AC—LDL吞噬实验等。结果流式细胞仪显示分离、培养的第3代BMSCs表面抗原阳性表达率：CD11b／c和CD34分别为（14．16±0．72）％和（1．29±0．46）％，而CD44和CD90分别为（97．87±0．84）％和（96．85±1．49）％。实验组bFGF分泌量（5．50±0．12）ng／L明显高于空白对照组（2．65±0．40）ng／L和阴性对照组（2．76±0．25）ng／L，实验组与空白对照组以及阴性对照组比较差异有统计学意义（P〈0．01）；3组大部分细胞形态变化不明显，呈长梭形、杆状、多角形。实验组CD31、CD34及Ⅷ因子阳性表达率分别为（22．73±5．42）％、（26．32±3．95）％和（30．34±6．62）％，而空白对照组和阴性对照组则为[（7．85±1．83）％、（8．93±1．37）％、（10．23±1．21）％]和[（7．57±1．21）％、（8．41±0．97）％、（9．97±0．52）％]，实验组与空白对照组以及阴性对照组比较差异有统计学意义（P〈0．01）；诱导后实验组细胞能有效地吞噬Dil-AC-LDL，表达荧光的平均吸光度值，实验组（0．52±0．23）明
- 张金池蔡森林吴佳文吴明祥郑国富欧阳亮远
- 关键词：碱性成纤维生长因子骨髓间充质干细胞基因转染分化
- 异甘草酸镁对大鼠肢体缺血再灌注肝损伤时磷脂酶A2的影响被引量：8
- 2012年
- 目的探讨异甘草酸镁（MI）对大鼠肢体缺血再灌注肝损伤时磷脂酶如（PLA2）的影响。方法选取健康、雄性、清洁级SD大鼠24只，体质量（230±30）g，随机分成3组（每组8只）：对照组（C组）、缺血再灌注组（I／R组）、异甘草酸镁治疗组（MI组）。C组仅麻醉，肢体没有缺血操作；I／R组于再灌注前颈外静脉注入生理盐水1ml；MI组于再灌注前同法给异甘草酸镁30mg／kg，计1ml。以橡皮带环绕结扎大鼠左后肢根部至趾掌无血流信号达4h后放开橡皮带，再灌注6h建立大鼠后肢缺血再灌注肝损伤模型。再灌注6h后各组处死动物采集标本，分别取大鼠的血清测定ALT、AST、乳酸脱氢酶（LDH）、肌酸激酶（CK），取肝组织做10％的匀浆，采用硫代巴比妥酸法测匀浆及血清的丙二醛（MDA）、髓过氧化物酶（MPO）值，采用酶联免疫法测匀浆及血清PLA2、肿瘤坏死因子α（TNFα），电镜观察肝组织的超微结构改变。结果（1）C组肝匀浆PLA2、TNFα、MDA、MPO分别为（74．1±3．1）Hg／g、（152．4±7．9）ng／g、（2．02±0．16）nmol／g、（0．20±0．03）活力单位／g；血清PLA2、TNFα、MDA、MPO分别为（80．3±3．9）μg／L、（121．7±6．6）ng／L、（4．89±0．64）nmol／ml、（65．62±8．33）活力单位／ml；I／R组肝匀浆PLA2、TNFα、MDA、MPO分别为（94．83±21．99）μg／g、（361．3±46．6）ng／g、（3．038±0．391）nmol／g、（0．422±0．062）活力单位／g；血清PLA2、TNFα、MDA、MPO分别为（118．4±9．3）μg／L、（152．7±15．7）ng／L、（7．30±0．73）nmol／ml、（94．83±21．99）活力单位／ml；MI组肝匀浆PLA2、TNFα、MDA、MPO分别为（84．3±5．8）μg／g、（314．4±13．9）ng／g、（2．49±0．07）nmol／g、（0．31±0．05）活力单位／g；血清PLA2、TNFα、MDA、MPO分别为（96．0±4．4）μg／L、（137．0±5．5）ng／L、（5．61±0．3
- 张金池郑国富吴明祥吴佳文欧阳亮远刘学强
- 关键词：缺血再灌注损伤异甘草酸镁
- 人碱性成纤维生长因子基因重组慢病毒载体的构建被引量：5
- 2010年
- 目的构建携带人碱性成纤维生长因子（bFGF）基因的重组慢病毒表达载体。方法采用聚合酶链反应（PCR）方法钓取人源性的bFGF和FGF4两个目的基因片段，将该基因克隆到慢病毒载体表达质粒pGC-FU[含绿色荧光蛋白（GFP）]中，得到pGCFU-FGF4-bFGF，通过PCR、酶切、测序和对比验证bFGF后，通过Lipofectamine2000的介导把pGCFU-FGF4-bFGF质粒和包装质粒pHelper1．0、pHelper2．0共转染至包装细胞293T，经同源重组产生重组慢病毒pGCFU-FGF4-bFGF，pGCFU-FGF4-bFGF在293T细胞内大量扩增，应用实时定量PCR法鉴定和测定滴度。结果克隆得到500bp目的bFGF全长基因，经过PCR扩增、酶切鉴定、序列测定证实，bFGF基因成功克隆到慢病毒载体中，可实现bFGF基因的表达，且病毒滴度为2．0×10^9TU／ml。结论成功构建表达人bFGF基因的慢病毒载体并能在293T细胞中扩增获得足够高的病毒滴度，可作为后续基因治疗研究工作的基因转染工具。
- 张金池王玉龙吴明祥郭平凡
- 关键词：碱性成纤维生长因子慢病毒载体基因转染
