刘海燕
- 作品数：10 被引量：16H指数：3
- 供职机构：青岛大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金青岛市科技发展计划项目重大基础研究前期研究专项更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 人巨细胞病毒感染及其IE86蛋白对ARPE-19细胞周期的影响被引量：2
- 2010年
- 目的研究人巨细胞病毒(human cytomegalovirus,HCMV)感染ARPE-19细胞后对其细胞周期的影响,观察这种变化与HCMVIE2基因的关系,探讨HCMV感染的发病机制。方法用HCMV感染同步化的ARPE-19作为感染组,同时设模拟感染组为对照组。于感染后第1、2、3、4、5天收获细胞,RT-PCR方法检测HCMV IE mRNA的表达水平,用免疫荧光法检测细胞核内HCMV IE蛋白的表达,Western blot法检测HCMV早期蛋白IE和晚期蛋白pp65的表达。采用PCR方法从质粒pIEP86AD169扩增出IE2片段,构建真核表达质粒pEGFP-N3-IE2,脂质体介导瞬时转染ARPE-19细胞,RT-PCR、免疫荧光法分析IE2基因的表达。流式细胞术检测细胞周期的变化。结果 HCMV IE72、IE86和pp65可分别在病毒感染ARPE-19细胞后第2、3和5天时检测到表达,流式细胞术示感染组在感染第3、4、5天细胞周期的S期细胞比例显著增高,与对照组比较差异均有显著性统计学意义,P(0.05。瞬时转染质粒pEGFP-N3-IE2后细胞周期表现为S期细胞比例显著增高。结论 ARPE-19是HCMV的允许细胞,HCMV可引起ARPE-19细胞周期的改变,这种变化与IE2基因的表达有一定的关系。
- 刘海燕王斌李玲白志强姜光域王海涛钱冬萌赵巍闫志勇丁守怡宋旭霞
- 关键词：人巨细胞病毒ARPE-19细胞周期
- D2蛋白酶间接ELISA检测方法的建立
- 2010年
- 目的建立D2蛋白酶间接ELISA检测方法,为D2蛋白酶的进一步研究及应用奠定基础。方法以纯化的D2蛋白酶为抗原,免疫新西兰白兔,制备D2蛋白酶多克隆抗体,建立D2蛋白酶间接ELISA检测方法,并进行验证及初步应用。结果D2蛋白酶间接ELISA检测方法的最佳反应条件为:一抗稀释度为1∶64000,二抗稀释度为1∶80000,抗原稀释度为1∶100,饱和包被浓度为1160ng/ml,封闭剂为10%胎牛血清。标准曲线的线性检测范围为18～1160ng/ml。该方法准确性、重复性良好,特异性强、敏感性高,与琼脂扩散试验检测结果的符合率为95.5%。结论已建立了D2蛋白酶间接ELISA检测方法,可用于D2蛋白酶含量的检测。
- 苏洁王斌鲁晓晴赵巍闫志勇钱冬萌丁守怡宋旭霞杨丽刘海燕
- 关键词：间接ELISA多克隆抗体
- 人巨细胞病毒及其IE86蛋白对ARPE-19细胞周期影响的研究
- 目的：研究人巨细胞病毒/(human cytomegalovirus, HCMV/)感染人视网膜色素上皮细胞ARPE-19后对其细胞周期的影响,研究这种影响与HCMV IE86基因的相关性,探讨HCMV感染导致巨细胞病毒...
- 刘海燕
- 关键词：人巨细胞病毒ARPE-19细胞周期
- 文献传递
- 人巨细胞病毒感染对人神经干细胞定向星形胶质细胞分化过程中Notch相关信号分子表达的影响被引量：6
- 2010年
- 目的人巨细胞病毒（human cytomegalovirus,HCMV）感染可抑制神经干细胞（neural stem cell,NSC）的增殖和分化,Notch信号对NSC的增殖和分化具有重要的调控功能。文中研究HCMV感染对人NSC向星形胶质细胞分化过程中Notch信号相关分子Notch1~3、Jagged（JAG）1、delta-like（DLL）1及早老素（presenilin,PS）1表达的影响。方法体外分离培养海马NSC,并诱导其向星形胶质细胞分化。同时以感染复数（multiplicity of infection,MOI）为5的HCMV AD169株感染NSC,分别在感染后0、1、3、5、7 d收获细胞,用实时RT-PCR法检测细胞内Notch1-3及其受体JAG1、DLL1的转录水平,Westernblot法检测Notch1细胞内段（Notch 1 intracellular domain,NICD）含量的变化。结果未分化状态的NSC含有大量Notch1NICD,Notch1-3、JAG1、DLL1mRNA呈高表达。诱导分化1d后,Notch各受体、配体mRNA表达均显著下降,3 d后表达回升,至第7天显著升高且可检出大量激活的NICD。HCMV感染组细胞在诱导分化1 d后Notch相关受体、配体mRNA水平亦明显下降,与对照组相比Notch1、Notch2和DLL1的表达更少。在以后各个时间点Notch相关受体、配体mRNA水平均低于对照组。PS1的表达仅在1 d时低于对照组。病毒感染7 d后,细胞内NICD含量明显低于对照组。结论HCMV感染可抑制Notch相关受体、配体的表达与活化,Notch信号异常表达参与HCMV感染所致NSC分化和增殖异常。
- 李玲白志强李鹏刘志军王海涛刘海燕姜光域宋旭霞钱冬萌闫志勇丁守怡王斌
- 关键词：神经干细胞人巨细胞病毒
- HCMV感染诱导定向分化的海马NSCs分泌神经生长因子前体蛋白及其受体p75NTR
- 目的研究HCMV感染对神经干细胞向星形胶质细胞分化过程中神经营养因子(NGF)及其受体p75~(NTR)、trkA表达的影响,为阐明HCMV感染致NSCs损伤的分子机制提供理论依据。材料和方法体外分离并用含hEGF和hb...
- 李玲丁守怡王斌白志强李鹏王海涛刘海燕姜光域宋旭霞钱冬萌闰志勇
- Bcl-2结合抗凋亡基因沉默对缺氧状态下人神经母细胞瘤细胞凋亡及热休克蛋白70表达的影响被引量：5
- 2017年
- 目的探讨Bcl-2结合抗凋亡基因（BAG-1）对缺氧／再复氧损伤后人神经母细胞瘤细胞（SH—SY5Y）的保护作用，以及对热休克蛋白70（HSP70）表达的影响。方法取对数生长期的SH—SY5Y细胞，采用慢病毒介导的RNA干扰（RNAi）技术抑制BAG-1表达。将筛选好的细胞分为细胞对照组、慢病毒对照组（仅含荧光蛋白的慢病毒感染组）、BAG-1小干扰RNA（siRNA）组（即BAG-1基因沉默组，感染含BAG-1基因干扰序列及荧光蛋白的慢病毒），根据沉默序列不同分为BAG-1 siRNA—α组、BAG-1 siRNA-β组。感染重组慢病毒后72h采用蛋白质免疫印迹试验（Western Blot）检测SH—SY5Y细胞中BAG-1和HSP70蛋白表达；缺氧处理后采用CCK-8测定各组细胞活性；用流式细胞仪检测细胞凋亡情况；用实时荧光定量反转录-聚合酶链反应（RT—qPCR）检测各组细胞HSP70转录水平。结果慢病毒感染后72h，Western Blot检测结果表明BAG-1 siRNA—β组干扰效果优于BAG-1 siRNA-α组。各组细胞活性均随缺氧时间延长而呈先增强后减弱的趋势，且于8h时达峰值。经缺氧处理8h后，BAG—1 siRNA—β组细胞活性[吸光度（A）值]明显低于细胞对照组、慢病毒对照组及BAG-1 siRNA-α组（0．59±0．09比0．94±0．12、0．90±0．11、0．91±0．14，均P〈0．01）；BAG—1 siRNA-β组凋亡细胞率明显高于细胞对照组、慢病毒对照组及BAG-1 siRNA-α组[（34．63±3．46）％比（14．83±3．75）％、（19．93±6．49）％、（16．40±1．18）％，均P〈0．01]。BAG-1 siRNA—β组HSP70蛋白及mRNA转录水平与细胞对照组、慢病毒对照组及BAG-1 siRNA-α组比较差异均无统计学意义（均P〉0．05）。结论BAG-1基因在缺氧神经细胞中能够发挥保护作用，减少细胞凋亡，其保护作用可以独立于HSP70基因。
- 宋砚坤李智王奉涛刘海燕曲彦王芸谢春雨胡丹
- 关键词：热休克蛋白70细胞凋亡
- HCMV IE86对ARPE-19细胞周期的影响
- 目的构建HCMV IE2基因的真核表达载体,瞬时转染ARPE-19细胞,观察对其细胞周期的影响。方法采用RT-PCR方法自感染HCMV的人胚肺成纤维细胞扩增HCMV IE2基因,构建pEGFP-N3-IE2重组质粒,脂质...
- 刘海燕李玲白志强钱冬萌丁守怡宋旭霞王斌
- 关键词：HCMVARPE-19人胚肺成纤维细胞
- 文献传递
- 人巨细胞病毒诱导分化中的神经干细胞分泌神经生长因子前体被引量：4
- 2010年
- 目的研究人巨细胞病毒(human cytomegalovirus,HCMV)感染对人神经干细胞(neural stem cells,NSC)向星形胶质细胞分化过程中神经生长因子(nerve growth factor,NGF)及其受体p75NTR、trkA表达的影响,为阐明HCMV感染致NSC损伤的分子机制提供理论依据。方法体外培养人海马NSC,感染组以感染复数(multiplicity of infectin,MOI)为5的HCMVAD169株感染NSC,对照组只加入与病毒悬液等体积的培养液,在感染病毒的同时,诱导感染组和对照组NSC向星形胶质细胞分化,分别在感染后0、1、3、5、7、9 d收获细胞,用RT-PCR、免疫荧光和Western blot方法检测细胞内NGF及其受体p75NTR、trkA的转录水平和蛋白表达水平。结果对照组NSC不表达NGF及其受体P75NTR和trkA。感染组细胞在第3天开始出现NGFmRNA的表达,第5天出现P75NTRmRNA的表达,且其表达强度随时间增强;第5天出现相对分子质量为40000和100000NGF前体蛋白(ProNGF)和P75NTR蛋白,随时间延长,表达强度升高。免疫荧光检测显示,NGF前体蛋白位于细胞的细胞质;整个感染过程中未检测到trkA的表达。结论 HCMV感染可诱导向星形胶质细胞分化的海马NSC分泌NGF前体蛋白及其受体p75NTR。
- 李玲王斌白志强李鹏王海涛刘海燕姜光域宋旭霞钱冬萌闫志勇丁守怡
- 关键词：人巨细胞病毒神经生长因子P75NTR
- HCMV IE86对ARPE-19细胞周期的影响
- 2009年
- 目的:构建真核表达质粒pEGFP-N3-IE2,瞬时转染ARPE-19细胞,探讨其对视网膜色素上皮细胞周期的影响。方法:采用PCR方法从质粒pIEP86AD169扩增出IE2片段,将其定向克隆于pEGFP-N3,构建真核表达质粒pEGFP-N3-IE2,酶切、测序鉴定,脂质体介导瞬时转染ARPE-19细胞,RT-PCR、免疫荧光法分析IE2基因在mRNA和蛋白水平的表达,流式细胞仪检测转染前后细胞周期的变化。结果:成功构建重组质粒pEGFP-N3-IE2,并在被转染细胞中检测到IE2基因的表达;瞬时转染后细胞周期表现为S期细胞比例显著增高。结论:成功构建pEGFP-N3-IE2真核表达质粒,重组质粒能在ARPE-19细胞中顺利表达IE2,IE2基因可以引起ARPE-19细胞的细胞周期S期阻滞。
- 刘海燕李玲白志强王斌钱冬萌丁守怡宋旭霞赵巍闫志勇苏洁杨丽
- 关键词：HCMVARPE-19细胞周期
- ICU专科术前访视对老年择期手术病人术后影响被引量：2
- 2016年
- 目的了解ICU专科术前访视对降低老年择期手术病人术后谵妄发生率、增加病人配合度、提高护理满意度的效果。方法选取行择期手术并术后入住ICU的老年病人92例,随机分为两组,对照组43例,访视组49例。对照组病人术前由手术室和病房护士进行常规术前护理和健康教育,术后在ICU采用常规措施予以护理;访视组病人在此基础上,由ICU专职护士进行ICU专科术前访视。比较两组病人术后谵妄发生率、机械通气时间、对护理工作的配合程度及满意度的差异。结果访视组术后谵妄发生率低于对照组,差异有显著性（χ^2=6.02,P〈0.05）;机械通气时间和入住ICU的时间短于对照组,差异有显著性（t=2.20、2.19,P〈0.05）。两组护理工作配合程度指标中非计划性拔管率及要求进食水率比较差异无显著性（P〉0.05）,其他配合程度指标及对护理工作满意度差异均有显著性（χ^2=5.84~11.48,uc=3.016,P〈0.05）。结论 ICU专科术前访视能降低老年择期手术病人术后谵妄发生率,提高病人对术后ICU护理配合度及护理工作的满意度。
- 宋砚坤胡丹满孝云王奉涛刘海燕
- 关键词：重症监护病房手术前护理谵妄
