刘永刚
- 作品数：30 被引量：129H指数：6
- 供职机构：重庆医科大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金教育部科学技术研究重点项目重庆市教委科研基金更多>>
- 相关领域：医药卫生农业科学自动化与计算机技术更多>>
- 氟西汀对阿尔茨海默病神经细胞模型保护作用分子机制的研究分析被引量：1
- 2016年
- 本研究初步探讨氟西汀(fluoxetine)对阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD)神经细胞模型小鼠神经纤维瘤细胞,野生型N2A/WT细胞和β-淀粉样蛋白(amyloidβ-protein,Aβ)过表达型N2A/APP695swe细胞的保护作用及可能机制。CCK-8法进行氟西汀对APP695细胞抑制率的测定,以半数抑制率(IC50)的氟西汀浓度作为后续实验的药物浓度。后分为WT组、APP695+氟西汀组、APP695组,三组细胞分别培养48 h后,进行细胞原位凋亡染色。最后以Western测定Aβ和BDNF的表达量。实验结果测得半数抑制率(IC50)的氟西汀浓度10-7mol/L。细胞凋亡染色结果显示APP695组凋亡的细胞明显多于其他两组(p<0.01),与APP695+氟西汀组相比凋亡细胞增加(p<0.05),而WT组与APP695+氟西汀组凋亡细胞无显著性差异(p>0.05)。Western结果显示APP695组Aβ表达多于其他两组(p<0.05)而BDNF表达明显少于其他两组(p<0.01),与APP695+氟西汀组相比Aβ表达增加(p<0.05)但BDNF表达减少(p<0.05),而WT组与氟西汀组相比Aβ和BDNF的表达量均无显著性差异(p>0.05)。本研究结果提示氟西汀可以通过抑制APP695过表达Aβ,从而减少有毒Aβ对BDNF的影响,增加BDNF的表达量,对神经细胞起保护作用,为氟西汀治疗AD提供新的思路。
- 李曌况超李刚叶柳熊伟陈雄斌李晓朋戴颂扬朱殷青张蕾孟赞唐勇刘永刚
- 关键词：阿尔茨海默病氟西汀Β-淀粉样蛋白BDNF
- 人和小鼠胚胎成纤维细胞对人类胚胎干细胞生长的影响
- ＜正＞ 目的胚胎干细胞在体外适当条件下可以定向诱导分化为所有体细胞,从而为细胞替代治疗提供理想的细胞来源,为发育生物学提供理想的研究工具。胚胎干细胞在体外增殖和抑制其分化的必要条件是要有饲养层细胞和促进胚胎干细胞增殖和抑...
- 刘永刚韩兵王亚平王莎莉
- 文献传递
- 胚龄及分离方法对小鼠胚胎生殖细胞扩增效率的影响
- 2008年
- 目的：应用原始生殖细胞进行全能干细胞的研究具有与胚胎干细胞同样广阔的前景,尤其适合于难以从囊胚内细胞团中分离培养胚胎干细胞的动物。但胚胎生殖细胞体外培养条件一直是制约这方面发展的瓶颈。实验设计了体外有效扩增小鼠原始生殖细胞的方法,拟搭建稳定高效的原始生殖细胞培养平台。方法：实验于2006-10/2007-08在重庆医科大学组织胚胎学教研室重庆市生物化学分子药理学重点实验室完成。①实验材料：清洁级昆明孕鼠由重庆医科大学动物实验中心提供,见阴栓计为0.5d胚龄,实验过程中对动物处置符合动物伦理学标准。②实验方法：取胚龄8．5d胎鼠尾端尿囊及周围组织，取胚龄9．5～10．5d胎鼠后肠及周围组织，取胚龄11．5d，12．5d胎鼠生殖嵴及周围组织，分别经0．25％胰酶一0．02％EDTA消化并接种于0．1％明胶包被的培养皿中。比较不同妊娠时间点取材对原代、F1代胚胎生殖细胞克隆形成的影响。采用SSEA-1免疫组织化学法计数细胞阳性率，计数胚胎生殖细胞克隆联合MTT法比较胚龄11．5d，12．5d两个时间点原始生殖细胞的增殖能力。比较上述两种取材培养方法对胚龄11．5d，12．5d原始生殖细胞扩增的影响。采用碱性磷酸酶染色、免疫组化检测SSEA一1、免疫荧光检测Nanog，体外分化实验鉴定分化能力。结果：①胚龄11．5d，12．5d胎鼠原代和F1代集落形成率较胚龄8．5～10．5d高，扩增效率显著提高（P〈0．01）。②免疫组织化学法检测分离的胚龄11．5d，12．5d原始生殖细胞SSEA-1阳性率差异不显著（P〉0．05）。原代第3天克隆计数显示，胚龄11．5d胎鼠高于12．5胚龄胎鼠（P〈0．01），MTT数据显示11．5胚龄组稍高于12．5胚龄组。③两种方法对胚龄11．5d，12．5d胎鼠胚胎生殖细胞集落形成无显著性差异（P〉O．05），但生长方式有所不同。�
- 王璐刘永刚李芳菲姜蓉王亚平
- 关键词：原始生殖细胞胚胎生殖细胞扩增
- 人胚胎神经干细胞分离、培养、纯化及增殖潜能的特点被引量：5
- 2006年
- 目的:探讨获取和培养人胚胎神经干细胞的方法。方法:实验于2003-09/2004-12在重庆医科大学基础研究所完成。人胚胎来源为7～12周人工药物流产胎儿,由重庆医科大学附属第二医院及重庆市妇幼保健院提供,征得产妇本人同意。①从人胚胎大脑皮质中分离、培养、纯化原代神经干细胞,经体外反复传代培养以获得能在体外长期生存的神经干细胞。②免疫细胞化学鉴定神经干细胞特异性表达抗原。③观察不同种植细胞密度对神经干细胞增殖的影响,分析其生长特点并绘制生长曲线。④采用悬浮细胞培养法扩增细胞,冷冻复苏后观察细胞的生物学特性。结果:①人胚胎神经干细胞体外生长特点:从7～12周流产胎儿大脑皮质中获得了能在体外长期生存的神经干细胞。经体外传至15代,神经干细胞细胞数量扩增至200倍。②神经干细胞接种密度对增生的影响:当种植细胞的密度为1×105L-1,1×107L-1时,体外培养30d后仍呈单细胞贴壁状态。以1×109L-1细胞密度接种时,12h后即见多个单细胞聚成的小球,悬浮生长。③神经干细胞自我更新能力的检测结果:多数单个细胞在培养后24～48h分裂为2～4个细胞的小克隆,7～10d均发展为上百个细胞的较大的克隆。④nestin抗原的表达:培养的神经干细胞神经球nestin免疫细胞染色均呈阳性。⑤神经干细胞多向分化能力检测:NSE和GFAP免疫细胞化学染色显示,被测细胞胞浆有棕黄色颗粒沉着,呈阳性表达。⑥神经干细胞复苏后的存活率:冻存1,4,8,12周的神经干细胞存活率基本相似[(80.2±1.8)%,(80.1±1.2)%,(79.9±0.8)%,(80.1±2.1)%,P>0.05]。结论:成功地从人胚胎大脑皮质中分离得到了神经干细胞。经体外培养证明:人胚胎神经干细胞具有自我更新增殖能力和向神经元样细胞、星形胶质样细胞分化的潜能。
- 李英博王莎莉刘永刚李芳菲王亚平
- 关键词：干细胞胚胎大脑皮质细胞分化
- 氟西汀对阿尔茨海默病模型小鼠的神经元保护作用被引量：3
- 2015年
- 目的:研究氟西汀对老年APP/PS1双重转基因阿尔茨海默病模型小鼠学习记忆能力的影响及对神经元的保护作用。方法:实验分为动物实验和细胞实验。动物实验中取APP/PS1双重转基因小鼠随机分为氟西汀组(n=8)和生理盐水组(n=8),另取C57同窝生同月龄正常小鼠10只为对照组。氟西汀组小鼠给予氟西汀(10 mg/kg)腹腔注射,生理盐水组及对照组注射等量生理盐水1次/d,持续8周。Morris水迷宫实验进行行为学检测。Tunel染色检测海马区神经元凋亡。细胞实验中将人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y)培养48 h后分为正常组、Aβ组、氟西汀组和氟西汀+Aβ组,后3组分别在含10μmol/Lβ-淀粉样蛋白、100 nmol/L氟西汀和100 nmol/L氟西汀+10μmol/Lβ-淀粉样蛋白的DMEM中继续培养48 h。行原位细胞凋亡染色检测各组细胞凋亡。结果:水迷宫定位航行实验中,氟西汀组小鼠较生理盐水组相比平均潜伏期明显缩短(P<0.01);空间探索实验中跨越平台次数增加(P<0.01);海马区凋亡神经元数量减少(P<0.01)。细胞实验中,氟西汀组和氟西汀+Aβ组与Aβ组相比,凋亡细胞数量明显减少(P<0.01)。结论:氟西汀对神经元细胞有保护作用,能减少神经元的凋亡,长期服用氟西汀能显著改善APP/PS1阿尔茨海默病模型小鼠学习记忆力能力。
- 李刚况超孟赞周良马晶罗艳敏李曌刘品月何洁唐勇刘永刚
- 关键词：阿尔茨海默病氟西汀神经元
- 当归多糖对人血细胞发生的影响及调控机理研究
- 王亚平王莎莉郑敏姜蓉吴宏戴勤王勇李静王璐刘永刚张淑慎
- 该研究系统探讨APS对正常和异常早期造血的药理学作用及其机制，全面地阐述APS对人早期造血调控的影响，为从祖国医学宝库中寻找出既能促进造血，又能抑制白血病细胞恶性增殖并诱导其向成熟方向分化的中药诱导分化剂提供理论与实验依...
- 关键词：
- 关键词：当归血细胞
- 以STO细胞和hELF作为胚胎生殖细胞培养饲养层的比较被引量：7
- 2006年
- 目的：比较以STO细胞和人胚胎肺成纤维细胞（hELF）作为饲养层对人胚胎生殖嵴细胞（EG）生长的影响以及经丝裂酶素C处理后的两种饲养层的变化．方法：分离、培养3—4mohELF，观察经丝裂酶素C处理STO细胞和hELF后形态学变化，以STO细胞和hELF作为饲养层培养人EG细胞，计数EG细胞集落的形成率以及免疫组化检测EG细胞表面标志物抗阶段特异性胚胎抗原-1（SSEA-1）和抗阶段特异性胚胎抗原-4（SSEA-4）．结果：经丝裂霉素c处理后hELF较STO细胞生存时间明显长，形态维持更好；以hELF和STO细胞作为饲养层培养人EG细胞，集落形成率没有明显差异；两种饲养层上形成的集落免疫学特征无明显差异．结论：在培养人EG细胞时，hELF饲养层较STO细胞饲养层更有优势．
- 刘永刚李芳菲陈地龙王莎莉王亚平
- 关键词：胚胎生殖细胞
- 人胚胎生殖细胞定向造血细胞诱导分化的初探
- ＜正＞目的本研究自行分离、培养的胚胎生殖细胞,联合应用多种细胞因子,在体外通过二步法诱导人EG细胞定向诱导分化为造血细胞,旨在为胚胎干细胞的基础研究和临床应用研究奠定基础。方法从流产胚胎中分离、培养人胚胎生殖细胞（EG细...
- 李芳菲刘永刚王亚平
- 文献传递
- 纳米羟基磷灰石/聚酰胺66与人胚胎成纤维细胞的生物相容性研究被引量：20
- 2005年
- 目的:研究新型骨修复重建复合材料纳米羟基磷灰石/聚酰胺6 6 (n -HA/PA6 6 )对人胚胎成纤维细胞可能存在的细胞毒性,为该材料应用于临床提供实验依据。方法:采用人胚胎成纤维细胞,经材料及材料浸提液分别与细胞共培养等方式对n -HA/PA6 6进行细胞毒性测试,细胞形态观察法观察各组细胞在2 4h、4 8h、72h、5天各时相点的细胞形态学变化,细胞生长抑制法(MTT比色法) ,测定各组1,2 ,4 ,7天细胞的相对增殖率。结果:材料表面的细胞黏附生长良好,各浸提液组和直接接触组分别与阴性对照组进行两两比较,各组对细胞的增殖均无显著影响(P >0 .0 5 ) ,各浸提液组和直接接触组分别与阳性对照组进行两两比较显示有显著差异(P <0 .0 5 ) ,材料的细胞毒性为0～1级。结论:体外试验结果显示,n -HA/PA6 6与人胚胎成纤维细胞相容性好,符合GB/T16 886 .5 - 1997-ISO 10 993- 5 :1992规定的医用材料相应标准[1] 。
- 孟纯阳安洪蒋电明刘永刚
- 关键词：纳米羟基磷灰石聚酰胺细胞相容性
- 人钙结合蛋白S100A9基因克隆表达纯化及其对SH-SY5Y细胞作用的研究被引量：3
- 2016年
- 钙结合蛋白S100A9在许多慢性疾病中聚集并可能在一些自身免疫性如老年痴呆中发挥了重要的作用。大量的报道也表明S100A9日益获得人们的注意。通过获取足量重组人S100A9蛋白,探索其对神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y的作用及机制。运用全基因合成法合成人S100A9基因,构建人S100A9原核表达重组质粒p ET28a-S100A9,经单酶切法及PCR法鉴定重组质粒已构建成功。利用异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)在18℃、25℃、37℃分别诱导表达,经聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和Western blotting鉴定,结果显示18℃时蛋白大量表达于上清中,在37℃时大量表达于包涵体。采用镍亲和层析法分别纯化两种来源重组蛋白,透析后低温冻干获得蛋白粉。使用CCK-8法检测上清来源和包涵体来源的S100A9蛋白对神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y的增殖抑制作用。结果显示两种来源重组蛋白对SH-SY5Y细胞具有生长抑制作用,在浓度为0.05 mg/m L时即有明显抑制作用(p<0.01),且二者作用无明显差异(p<0.01)。采用AO/EB双重染色和流式细胞术初步检测S100A9对SH-SY5Y细胞的增殖抑制机理,结果显示该蛋白可促进SH-SY5Y细胞的凋亡。两种来源蛋白之间的比较也显示二者对于SH-SY5Y细胞作用无明显差异(p<0.05)。本研究成功获得足量S100A9重组蛋白,且两种来源S100A9蛋白作用于SH-SY5Y细胞的生物学效应一致。
- 叶柳李曌陈振银刘笃强廖键梅陈雄斌熊伟刘兆雨熊丽荣李晶黄琴李伟彭彦唐勇刘永刚
- 关键词：S100A9重组质粒蛋白表达SH-SY5Y
