刘凡 作品数:5 被引量:21 H指数:2 供职机构: 第二军医大学 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 国家高技术研究发展计划 更多>> 相关领域: 医药卫生 生物学 更多>>
膜联蛋白AnxB1的同源模建及降低免疫原性研究 被引量:10 2004年 膜联蛋白AnxB1是我们发现的一个新的膜联蛋白亚家族成员,具较强的抗凝血活性和血栓亲和性.为更深入研究AnxB1的结构与功能,首先利用同源建模的方法预测AnxB1的三维结构,发现AnxB1具有四个内部同源结构域,其中1,2,4结构域的Cα主链叠合非常一致.以此为基础,构建四个序列缺失突变体M1,M2,M3,M4,并在大肠杆菌GST融合表达系统表达,其中的两个突变体GST-M3,GST-M4不仅保留了较强的抗凝血活性,而且免疫原性大大降低,分子量也分别减少到27和34kD.为进一步构建高效、低免疫原性的靶向性溶栓药物奠定了基础. 颜宏利 宋云龙 刘凡 贺艳 孙树汉关键词:膜联蛋白 同源建模 免疫原性 抗凝血 膜联蛋白AnxB1序列缺失突变体的结构模建及活性分析 2004年 为获得低分子量、低免疫原性的膜联蛋白AnxB1的序列缺失突变体 ,以AnxB1C端的 4个内部同源结构域为基础 ,模拟构建了 4个突变体群 .利用同源模建的方法对各突变体进行结构模建和分子优化 ,最后选择 4个结构最为合理的突变体在大肠杆菌GST融合表达系统中表达 .结果显示 :GST M3和GST M4均表达出较强的抗凝血活性 ,且免疫原性也降低为原来的 1 2 ,为进一步构建兼具抗凝、溶栓双重功能的靶向性溶栓药物奠定了基础 . 颜宏利 贺艳 刘凡 杨湘越 孙树汉关键词:膜联蛋白 同源建模 抗凝血 活性 溶栓药物 无hMLH1/hMSH2生殖系突变的遗传性非息肉病性结直肠癌3家系报道 被引量:2 2004年 目的 :考察遗传性非息肉病性结直肠癌 (HNPCC)家系 h ML H1 /h MSH2生殖系突变的情况。 方法 :选择 1 3个符合Amsterdam标准的 HNPCC家系中的先证者 ,利用 DNA测序检测 h ML H1 /h MSH2基因突变情况。对其中不携带 h ML H1 /h MSH2生殖系突变的 HNPCC家系 ,利用免疫组化检测 h ML H1 /h MSH2基因表达、PCR- SSCP检测先证者肿瘤组织的微卫星不稳定性 (MSI)。 结果 :1 3个 HNPCC家系的先证者中有 3例检测不到 h ML H1 /h MSH2的生殖系突变。 3例无 h ML H1 /h MSH2突变的先证者中 ,肿瘤组织的微卫星不稳定检测均为 MSI- H,免疫组化检测 h ML H1 /h MSH2基因表达正常。结论 :3个严格符合 Amsterdam标准的 HNPCC家系中未发现 h ML H1 /h MSH2基因系突变 ,提示可能存在其他基因突变导致该 3个家系 颜宏利 金黑鹰 陆一鸣 刘凡 刘飞 孟荣贵 孙树汉 崔龙关键词:基因突变 遗传性非息肉病性结直肠癌 家系 膜联蛋白A5 cDNA的克隆及其在大肠杆菌中的表达 被引量:2 2004年 目的 :克隆人膜联蛋白 A5 c DNA并在大肠杆菌系统内作表达。 方法 :利用 RT- PCR技术从人胎盘组织的总 RNA扩增膜联蛋白 A5的 c DNA序列 ,将该基因插入 GST融合表达载体 p GEX- 5 T,在 tac启动子控制下 ,IPTG诱导表达 GST融合蛋白。以亲合层析法纯化表达的融合蛋白 ,用 KPTT法验证抗凝血活性。结果 :凝胶电泳显示 PCR扩增产物的长度为 978bp,重组质粒测序结果表明 ,插入片段与人膜联蛋白 A5的序列完全一致。在 IPTG诱导下 ,K80 2重组菌高效表达出相对分子质量为 5 80 0 0的融合蛋白 ,表达量占菌体总蛋白的 2 6 %。纯化蛋白具有很强的抗凝血活性。 结论 :成功克隆人膜联蛋白 颜宏利 贺燕 刘凡 杨湘越 孙树汉关键词:膜联蛋白A5 CDNA 克隆 大肠杆菌 基因表达 Annexin B1与磷脂酰丝氨酸的结合活性 被引量:8 2004年 目的 :研究 annexin B1与磷脂酰丝氨酸的结合活性。方法 :在大肠杆菌中表达 annexin B1蛋白 ,经离子交换层析得纯品 ;选用 U937细胞 ,以过氧化氢诱导凋亡 ,制备小鼠洗涤血小板 ,凝血酶激活 ;以异硫氰酸荧光黄 (FITC)标记的 annexin B1检测凋亡细胞和活化血小板。结果 :FITC标记的 annexin B1既能与凋亡细胞特异性结合 ,又能与活化血小板特异性结合 ,结合活性接近 annexin 。结论 :研究表明 annexin B1可结合于凋亡细胞和活化血小板膜上的磷脂酰丝氨酸 (PS) ,而非其他膜成分 ,也进一步阐明 annexin 王芳 张毅 颜宏利 高远舰 刘凡 贺艳 孙树汉关键词:ANNEXIN B1 磷脂酰丝氨酸 结合活性 血小板活化 细胞凋亡