贺艳
- 作品数：12 被引量：34H指数：3
- 供职机构：第二军医大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划吉林省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学更多>>
- 膜联蛋白AnxB1的同源模建及降低免疫原性研究被引量：10
- 2004年
- 膜联蛋白AnxB1是我们发现的一个新的膜联蛋白亚家族成员,具较强的抗凝血活性和血栓亲和性.为更深入研究AnxB1的结构与功能,首先利用同源建模的方法预测AnxB1的三维结构,发现AnxB1具有四个内部同源结构域,其中1,2,4结构域的Cα主链叠合非常一致.以此为基础,构建四个序列缺失突变体M1,M2,M3,M4,并在大肠杆菌GST融合表达系统表达,其中的两个突变体GST-M3,GST-M4不仅保留了较强的抗凝血活性,而且免疫原性大大降低,分子量也分别减少到27和34kD.为进一步构建高效、低免疫原性的靶向性溶栓药物奠定了基础.
- 颜宏利宋云龙刘凡贺艳孙树汉
- 关键词：膜联蛋白同源建模免疫原性抗凝血
- 膜联蛋白AnxB1序列缺失突变体的结构模建及活性分析
- 2004年
- 为获得低分子量、低免疫原性的膜联蛋白AnxB1的序列缺失突变体 ,以AnxB1C端的 4个内部同源结构域为基础 ,模拟构建了 4个突变体群 .利用同源模建的方法对各突变体进行结构模建和分子优化 ,最后选择 4个结构最为合理的突变体在大肠杆菌GST融合表达系统中表达 .结果显示 :GST M3和GST M4均表达出较强的抗凝血活性 ,且免疫原性也降低为原来的 1 2 ,为进一步构建兼具抗凝、溶栓双重功能的靶向性溶栓药物奠定了基础 .
- 颜宏利贺艳刘凡杨湘越孙树汉
- 关键词：膜联蛋白同源建模抗凝血活性溶栓药物
- 基于Flp重组酶介导的盒式交换HPRT位点定点转基因研究
- 2001年
- 以电穿孔转染法将构建的交换质粒pF-HPRTF3和Flp表达载体pCMV-Flp共转染已在基因组HPRT位点整合有交换盒F-Neo-F3结构的ES细胞F18,经HAT筛选得到HAT抗性ES细胞克隆;G418敏感性试验和基因组Southern杂交表明,所分析的12个HAT抗性克隆中有3个克隆发生了预期的盒式交换重组,转基因定点整合的相对效率为25%。这一结果表明,Flp重组酶是可以在HPRT位点有效地介导盒式交换反应的,我们提出的利用Flp重组酶介导的盒式交换反应建立基于HPRT位点的转基因定点整合体系的策略是可行的。
- 郑敬民贺艳傅继梁
- 关键词：介导
- 地高辛标记的DNA探针检测核酸疫苗中宿主菌基因组DNA的含量
- 2003年
- 将合成的引物与宿主菌的染色体模板 DNA进行 PCR扩增的核糖体 DNA片段 ,以地高辛进行标记 ,与待测 DNA样品进行点杂交 ,确定制备的乙肝 DNA疫苗中其宿主菌基因组含量 <15 ng/μg质粒 DNA。这提示地高辛标记的探针用于检测基因组 DNA的方法灵敏。
- 贺艳施柯孙树汉
- 关键词：地高辛标记DNA探针核酸疫苗宿主菌DNA含量
- pMCLacⅠ/neo转基因小鼠靶基因突变检测的新策略被引量：1
- 2002年
- 由于pMCLacⅠ neo转基因小鼠含有两种不同状态的LacⅠ靶基因 ,有别于以往所建立的只含有一种靶基因的系统。因此 ,建立一种能快速、有效地分析这两种靶基因的检测方法 ,成为该转基因小鼠建立后的又一新课题。通过适当方法将pMCLacⅠ neo中两种LacⅠ靶基因分开后 ,采用了新近建立的M9 L正向选择系统进行检测 ,并用已知的LacⅠ基因突变子作为阳性对照 ,验证该策略的可行性。实验结果提示 ,M9 L正向选择系统可应用于pMCLacⅠ neo转基因小鼠中两种LacⅠ靶基因的检测 ;实验中所建立的突变检测方法快速。
- 姚真真黎怀星车文良贺艳傅继梁
- 关键词：突变检测
- 基于凝血因子IX基因剔除小鼠建立血友病乙转基因动物模型被引量：6
- 2002年
- 为在凝血因子IX基因剔除小鼠基础上建立基因组中整合有含特定点突变的人凝血因子IX基因表达载体的转基因小鼠家系 ,为血友病乙的研究提供更接近临床实际的动物模型。利用体外定点突变技术 ,构建含有特定点突变的人凝血因子IX基因表达载体 ,该载体包括由人凝血因子IX编码区及第一内含子构成的人凝血因子IX基因(hFIXml)、4个拷贝的MCK增强子 (MCKe)、鸡 β -肌动蛋白启动子 (bA)及PolyA ,命名为pMe4bAIXml质粒。将其线性化后 ,用显微注射法注射入 817只凝血因子IX基因剔除小鼠受精卵雄原核 ,再将它们分别回输 4 5只假孕受体母鼠的输卵管中 ,共产仔 6 9只 ,存活 6 3只。采用PCR与基因组Southern杂交筛选法鉴定小鼠 ,证实 6只小鼠基因组中整合有含特定点突变的pMe4bAIXml质粒 ,并对 1只小鼠的PCR产物进行测序 。
- 车文良贺艳姚真真李坚傅继梁
- 关键词：血友病乙转基因小鼠模型点突变
- 融合蛋白AnxB1ScuPA表达质粒的构建及诱导条件优化被引量：1
- 2004年
- 目的 :在大肠杆菌中高效表达融合基因 Anx B1Scu PA。方法 :利用 PCR技术扩增 Anx B1Scu PA的融合基因 ,克隆至原核表达载体 p ET- 2 8a;转化几种不同的宿主菌 (感受态细菌 BL2 1、Rosetta、BL2 1- RIL) ,利用 IPTG(终浓度为 0 .5 mmol/ L)诱导蛋白表达 ,并对表达条件进行优化 ,根据凝胶扫描定量结果确定合适的宿主菌和诱导表达条件。结果 :Anx B1Scu PA在具有稀有密码子 t RNA的宿主菌 BL2 1- RIL 表达量较其他宿主菌为高。在菌液生长至 D6 0 0 =0 .8时 ,加入诱导剂 IPTG至终浓度0 .4 m mol/ L ,诱导 0 .5 h后加入利福平至终浓度 15 0μg/ ml,可使蛋白 Anx B1Scu PA的表达量提高至菌体总蛋白的 36 %。 结论 :通过选择具有稀有密码子 t RNA的宿主菌 BL 2 1- RIL和优化诱导条件 ,使 Anx B1Scu PA在大肠杆菌中得到高效表达。
- 贺艳颜宏利陆一鸣张毅杨湘越孙树汉
- 关键词：稀有密码子利福平
- 肿瘤基因治疗研究若干新进展被引量：1
- 2002年
- 肿瘤是严重危害人类健康的重大疾病,在其发病的分子机制逐渐被人们认识以及基因治疗的措施日趋可行的同时, 肿瘤基因治疗吸引了越来越多的注意。本文就肿瘤免疫基因治疗、抑癌基因治疗、诱导凋亡基因治疗及载体靶向性研究等方 面的研究进展作一综述。
- 贺艳王水良孙树汉
- 关键词：肿瘤基因治疗病毒载体
- Annexin B1与磷脂酰丝氨酸的结合活性被引量：8
- 2004年
- 目的 :研究 annexin B1与磷脂酰丝氨酸的结合活性。方法 :在大肠杆菌中表达 annexin B1蛋白 ,经离子交换层析得纯品 ;选用 U937细胞 ,以过氧化氢诱导凋亡 ,制备小鼠洗涤血小板 ,凝血酶激活 ;以异硫氰酸荧光黄 (FITC)标记的 annexin B1检测凋亡细胞和活化血小板。结果 :FITC标记的 annexin B1既能与凋亡细胞特异性结合 ,又能与活化血小板特异性结合 ,结合活性接近 annexin 。结论 :研究表明 annexin B1可结合于凋亡细胞和活化血小板膜上的磷脂酰丝氨酸 (PS) ,而非其他膜成分 ,也进一步阐明 annexin
- 王芳张毅颜宏利高远舰刘凡贺艳孙树汉
- 关键词：ANNEXINB1磷脂酰丝氨酸结合活性血小板活化细胞凋亡
- 利用荧光mRNA差异显示技术克隆短芒大麦盐胁迫相关基因的ESTs被引量：3
- 2004年
- 目的 :获取短芒大麦盐胁迫相关基因的 ESTs。 方法 :应用荧光 m RNA差异显示技术进行筛选 ,并利用反向 North-ern杂交方法对差异片段进行快速鉴定以排除假阳性。结果 :共获得 32个与盐胁迫相关的 c DNA序列 ,并获得 Gen Bank注册号。BL AST同源性分析结果表明 ,1 3个与已知基因序列有同源性 ,1 9个为未知 ESTs。其类型分别为 :诱导表达型 ,2 2个 ;增强表达型 ,7个 ;抑制表达型 ,3个。 结论 :通过荧光 m RNA差异显示技术获得了短芒大麦盐胁迫相关基因的 ESTs。
- 陆一鸣李彦舫白杰英颜宏利贺艳孙树汉
- 关键词：克隆ESTS基因表达
