冯少珍
- 作品数：9 被引量：20H指数：3
- 供职机构：华南农业大学兽医学院更多>>
- 发文基金：NSFC-广东联合基金广东省科技计划工业攻关项目广东省自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- LTR对J亚群禽白血病病毒感染的影响被引量：1
- 2012年
- 为探讨LTR基因在骨髓瘤病变型J亚群禽白血病病毒(ALV-J)NX0101致病中的作用,利用反向遗传将血管瘤病变型ALV-J HN06株中两端LTR元件替换至NX0101株的相应位置,拯救出重组病毒NX-HNLTR株。人工接种7日龄SPF雏鸡,分别检测NX0101株和NX-HNLTR株对鸡体的影响。感染鸡生长都较慢。感染NX0101株的鸡,胸腺指数和腔上囊指数明显比对照组低,脾脏指数与对照组相比波动较大,骨髓和脾脏在攻毒后3周可检测到病毒整合到基因组中,胸腺和腔上囊在攻毒后6周才检测到。感染NX-HNLTR株的鸡脾脏指数明显比对照组低,攻毒后2周可检测到病毒整合到脾脏基因组中,骨髓和胸腺分别在攻毒后3周和6周检测到。结果提示,LTR对NX0101株感染鸡的免疫器官有一定的影响。
- 冯少珍李娇吴晓婵曹伟胜廖明
- 关键词：J亚群禽白血病病毒
- A亚群ALV入侵细胞与PI3K/Akt信号通路途径的初步研究
- 前言目前J亚群禽白血病病毒(ALV-J)在我国华南地区鸡群中普遍流行,但也有由ALV-A引起禽白血病病例的存在。2009年,本研究组报道了广东本地黄羽肉种鸡A亚群禽白血病的病例,并从发病蛋鸡病料中分离鉴定出一株ALV-A...
- 冯少珍张小桃曹伟胜廖明
- 文献传递
- 血管瘤禽白血病病毒FJ0610株的分离与鉴定
- 2012年
- 为了解禽白血病病毒在商品蛋鸡中的流行情况,试验采用病理剖检、聚合酶链式反应(PCR)以及间接免疫荧光试验(IFA)等方法对送检的疑似禽白血病病毒感染的商品蛋鸡进行了病毒分离与鉴定,并对分离株的致瘤相关基因gp85基因进行测序,与国内外各亚群禽白血病病毒进行对比。结果表明:分离、鉴定到1株J亚群血管瘤禽白血病病毒,命名为FJ0610;分离株gp85基因核苷酸序列同源性在11.5%～94.5%之间,其中与血管瘤禽白血病毒株ZH-08株同源性最高,而与E亚群毒株同源性最低;基于gp85核苷酸序列的系统进化分析表明FJ0610株的gp85序列与ZH-08株的亲缘关系最近。
- 刘红波冯少珍史伟伟梁艺瑜王小芬李育豪廖明辛朝安曹伟胜
- 关键词：J亚群禽白血病病毒
- 不同亚群禽白血病病毒5′LTR序列及启动子活性分析被引量：3
- 2011年
- 对不同亚群禽白血病病毒(avian leukosis virus,ALV)5′LTR序列及其启动子活性进行了比较分析,以探讨LTR对ALV复制和致病力的影响。通过PCR分别扩增克隆了中国分离株GD08(ALV-A)、CD08(ALV-B)、HN06(血管瘤病变型ALV-J)和NX0101(骨髓瘤病变型ALV-J)毒株基因组5′LTR片段。与国内外不同亚群ALV分离株5′LTR核苷酸序列比较发现,NX0101株和HN06株与ALV-J国内外分离株的同源性最高,达90.8%～97.5%;GD08株与ALV-A国内分离株SDAU09C1的同源性最高,为94.6%;CD08株与GD08株和ALV-J各株的同源性高达90%以上。LTR中的R区具有较高的保守性,但CD08株U3区缺失11bp,GD08株U5区与其它毒株的U5区差异较大。将LTR片段插入到pCAT-Basic载体的CAT报告基因前,通过转染DF-1细胞和测定CAT表达量来评价LTR的启动子活性。HN06株和NX0101株之间,以及GD08株和CD08株之间LTR启动子活性有差异,但差异不显著;而ALV-J毒株与GD08株和CD08株之间的LTR启动子活性差异显著。
- 冯少珍李娇吴晓婵曹伟胜廖明
- 关键词：启动子活性
- 人工感染血管瘤病变型ALV-J对鸡免疫器官的影响被引量：8
- 2011年
- 为探讨血管瘤病变型J亚群禽白血病病毒(ALV-J)HN06克隆株的致病情况,通过人工接种7日龄SPF雏鸡ALV-J HN06株,检测HN06株对鸡体的影响。结果发现,感染鸡生长较慢,体重比对照组低。HN06株对胸腺抑制显著,对法氏囊影响不明显,外周免疫器官的脾指数比对照组大。PCR检测病毒在免疫器官中的分布结果显示,骨髓和脾在攻毒后第7天可检测到病毒整合到基因组中,法氏囊和胸腺则分别在攻毒后第14天和第21天才能检测到。通过ELISA和细胞培养技术检测病毒血症、抗体产生和排毒情况,发现HN06感染鸡血浆中第7天即出现病毒(7/21),第28天出现抗体(2/21),第21天泄殖腔出现排毒(2/21)。随着产生抗体鸡的比例升高,排毒鸡逐渐减少,42d后无排毒现象。由此可见,试验鸡后天感染HN06株出现病毒血症,HN06不但抑制机体生长,还影响免疫器官的发育;HN06首先感染免疫器官中的骨髓和脾,再感染法氏囊和胸腺;抗体的产生能抑制排毒,但病毒血症仍然存在。
- 冯少珍李娇吴晓婵曹伟胜廖明
- 关键词：禽白血病病毒J亚群免疫抑制
- 靶向env及LTR基因的siRNA抑制ALV-J复制的研究被引量：1
- 2012年
- 试验针对J亚群禽白血病病毒的env及LTR基因,根据它们的保守序列,分别设计合成了4～5对siRNA,并将其克隆至pSilencer 4.1,构建siRNA重组表达质粒。将该质粒转染DF-1细胞6 h后以103TCID50接种ALV-J,利用Real-time RT-PCR在mRNA表达水平检测各重组质粒对病毒复制的影响。结果表明,与阴性对照相比,pSi4.1-env各重组质粒对env基因的抑制效果达到18.15%～63.43%,pSi4.1-LTR各重组质粒的抑制效果则达到19.37%～45.41%。
- 李娇冯少珍黄武吴晓婵李育豪曹伟胜廖明
- 关键词：J亚群禽白血病病毒ENV基因SIRNA
- J亚群禽白血病病毒gp85单因子血清的制备被引量：6
- 2011年
- J亚群禽白血病病毒(ALV-J)在中国普遍存在,严重危害养禽业,暂时尚无有效预防、治疗禽白血病的措施,只能通过净化控制。因此,研究一种低成本、易推广的检测方法对防控此病非常重要。用DF-1细胞接种病毒,以细胞基因组为模板,通过巢式PCR方法扩增出941bp的含酶切位点的ALV-J特异性基因gp85基因序列,连接于pET32a(+)载体上,实现gp85蛋白在宿主菌BL21的表达,以切胶回收方式纯化蛋白,成功获得约52ku的重组融合蛋白,免疫新西兰兔,制备gp85单因子抗血清,Dot-ELISA检测抗体效价。结果显示,纯化所得蛋白质具有良好抗原性,制备的抗血清效价高于1.024×105。本试验通过较简便、低耗的方法获得高效单因子血清,为抗血清的制备提供参考,为ALV-J gp85蛋白的研究、ALV-J特异性检测方法的研制打下基础,对ALV-J的净化有重要意义。
- 梁艺瑜冯少珍史伟伟刘红波王小芬李育豪廖明曹伟胜
- 关键词：J亚群禽白血病病毒GP85基因蛋白表达
- PI3K/Akt信号转导通路在ALV-J感染中作用的初步研究被引量：2
- 2011年
- 【目的】探讨ALV-J在宿主细胞中复制与PI3K/Akt信号转导通路的关系。【方法】将血管瘤病变型ALV-J毒株HN06和骨髓瘤病变型ALV-J毒株NX0101分别感染DF-1细胞,通过Western blot、Real-time PCR、IFA和ELISA等方法,观察细胞Akt蛋白磷酸化水平、病毒RNA表达水平和病毒蛋白表达水平等指标。【结果】HN06株和NX0101株在体外细胞中复制水平有差异。HN06株的早期感染可引起Akt转导通路的活化,病毒引起的Akt磷酸化具有病毒滴度依赖性,而且能被PI3K特异性抑制剂LY294002所抑制,表明HN06株诱导的Akt活化是PI3K途径依赖的。LY294002可在病毒感染早期呈剂量依赖性地显著降低受染细胞中HN06 RNA水平、囊膜蛋白水平和细胞培养物上清中的病毒粒子含量。【结论】PI3K/Akt信号转导通路活化对HN06株在细胞感染早期具有重要的作用,该结果与已报道的有关细胞PI3K/Akt信号转导通路参与NX0101株的早期感染的结论一致。本研究为进一步阐明ALV-J入侵宿主细胞和复制的精确机制等研究奠定了基础。
- 冯少珍李娇吴晓婵曹伟胜廖明
- 关键词：J亚群禽白血病病毒血管瘤PI3K/AKT
- YXXM基序对J亚群禽白血病病毒复制的影响
- 2011年
- 【目的】毒株NX0101是骨髓瘤病变型J亚群禽白血病病毒,其早期感染细胞能诱导PI3K/Akt信号转导通路的激活,本文针对NX0101毒株是否存在YXXM基序及其作用进行了探讨。【方法】利用TMpred软件对NX0101毒株囊膜蛋白(Env)的氨基酸序列进行生物信息学分析,通过搭桥PCR方法将YXXM基序相应的核苷酸序列突变后,构建突变质粒并转染DF-1细胞,拯救出YXXM突变体毒株NX0101mt(Y/F,M/A),利用real-time PCR和ELISA方法检测并比较YXXM突变前后毒株在RNA水平和蛋白水平的复制情况。【结果】NX0101毒株Env胞浆区554-557位氨基酸存在典型的PI3K结合基序YXXM。YXXM基序突变后,病毒RNA转录水平和病毒蛋白合成水平都显著下降。【结论】YXXM基序对NX0101毒株在体外宿主细胞中复制发挥重要的作用。
- 冯少珍李娇曹伟胜廖明
- 关键词：J亚群禽白血病病毒病毒复制
