李娇
- 作品数：7 被引量：14H指数：2
- 供职机构：华南农业大学兽医学院农业部兽用疫苗创制重点实验室更多>>
- 发文基金：NSFC-广东联合基金广东省自然科学基金中国博士后科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 不同亚群禽白血病病毒5′LTR序列及启动子活性分析被引量：3
- 2011年
- 对不同亚群禽白血病病毒(avian leukosis virus,ALV)5′LTR序列及其启动子活性进行了比较分析,以探讨LTR对ALV复制和致病力的影响。通过PCR分别扩增克隆了中国分离株GD08(ALV-A)、CD08(ALV-B)、HN06(血管瘤病变型ALV-J)和NX0101(骨髓瘤病变型ALV-J)毒株基因组5′LTR片段。与国内外不同亚群ALV分离株5′LTR核苷酸序列比较发现,NX0101株和HN06株与ALV-J国内外分离株的同源性最高,达90.8%～97.5%;GD08株与ALV-A国内分离株SDAU09C1的同源性最高,为94.6%;CD08株与GD08株和ALV-J各株的同源性高达90%以上。LTR中的R区具有较高的保守性,但CD08株U3区缺失11bp,GD08株U5区与其它毒株的U5区差异较大。将LTR片段插入到pCAT-Basic载体的CAT报告基因前,通过转染DF-1细胞和测定CAT表达量来评价LTR的启动子活性。HN06株和NX0101株之间,以及GD08株和CD08株之间LTR启动子活性有差异,但差异不显著;而ALV-J毒株与GD08株和CD08株之间的LTR启动子活性差异显著。
- 冯少珍李娇吴晓婵曹伟胜廖明
- 关键词：启动子活性
- LTR对J亚群禽白血病病毒感染的影响被引量：1
- 2012年
- 为探讨LTR基因在骨髓瘤病变型J亚群禽白血病病毒(ALV-J)NX0101致病中的作用,利用反向遗传将血管瘤病变型ALV-J HN06株中两端LTR元件替换至NX0101株的相应位置,拯救出重组病毒NX-HNLTR株。人工接种7日龄SPF雏鸡,分别检测NX0101株和NX-HNLTR株对鸡体的影响。感染鸡生长都较慢。感染NX0101株的鸡,胸腺指数和腔上囊指数明显比对照组低,脾脏指数与对照组相比波动较大,骨髓和脾脏在攻毒后3周可检测到病毒整合到基因组中,胸腺和腔上囊在攻毒后6周才检测到。感染NX-HNLTR株的鸡脾脏指数明显比对照组低,攻毒后2周可检测到病毒整合到脾脏基因组中,骨髓和胸腺分别在攻毒后3周和6周检测到。结果提示,LTR对NX0101株感染鸡的免疫器官有一定的影响。
- 冯少珍李娇吴晓婵曹伟胜廖明
- 关键词：J亚群禽白血病病毒
- 人工感染血管瘤病变型ALV-J对鸡免疫器官的影响被引量：8
- 2011年
- 为探讨血管瘤病变型J亚群禽白血病病毒(ALV-J)HN06克隆株的致病情况,通过人工接种7日龄SPF雏鸡ALV-J HN06株,检测HN06株对鸡体的影响。结果发现,感染鸡生长较慢,体重比对照组低。HN06株对胸腺抑制显著,对法氏囊影响不明显,外周免疫器官的脾指数比对照组大。PCR检测病毒在免疫器官中的分布结果显示,骨髓和脾在攻毒后第7天可检测到病毒整合到基因组中,法氏囊和胸腺则分别在攻毒后第14天和第21天才能检测到。通过ELISA和细胞培养技术检测病毒血症、抗体产生和排毒情况,发现HN06感染鸡血浆中第7天即出现病毒(7/21),第28天出现抗体(2/21),第21天泄殖腔出现排毒(2/21)。随着产生抗体鸡的比例升高,排毒鸡逐渐减少,42d后无排毒现象。由此可见,试验鸡后天感染HN06株出现病毒血症,HN06不但抑制机体生长,还影响免疫器官的发育;HN06首先感染免疫器官中的骨髓和脾,再感染法氏囊和胸腺;抗体的产生能抑制排毒,但病毒血症仍然存在。
- 冯少珍李娇吴晓婵曹伟胜廖明
- 关键词：禽白血病病毒J亚群免疫抑制
- 靶向env及LTR基因的siRNA抑制ALV-J复制的研究被引量：1
- 2012年
- 试验针对J亚群禽白血病病毒的env及LTR基因,根据它们的保守序列,分别设计合成了4～5对siRNA,并将其克隆至pSilencer 4.1,构建siRNA重组表达质粒。将该质粒转染DF-1细胞6 h后以103TCID50接种ALV-J,利用Real-time RT-PCR在mRNA表达水平检测各重组质粒对病毒复制的影响。结果表明,与阴性对照相比,pSi4.1-env各重组质粒对env基因的抑制效果达到18.15%～63.43%,pSi4.1-LTR各重组质粒的抑制效果则达到19.37%～45.41%。
- 李娇冯少珍黄武吴晓婵李育豪曹伟胜廖明
- 关键词：J亚群禽白血病病毒ENV基因SIRNA
- 靶向env及LTR基因的siRNA抑制ALV-J复制的研究
- 2013年
- 试验针对J亚群禽白血病病毒的env及LTR基因，根据它们的保守序列，分别设计合成了4～5对SiRNA，并将其克隆至pSilencer4．1，构建siRNA重组表达质粒。将该质粒转染DF-1细胞6h后以103TCID50接种ALV—J，利用Real—timeRT—PCR在mRNA表达水平检测各重组质粒对病毒复制的影响。
- 李娇
- 关键词：ALV-JSIRNAJ亚群禽白血病病毒重组表达质粒SIRNA
- PI3K/Akt信号转导通路在ALV-J感染中作用的初步研究被引量：2
- 2011年
- 【目的】探讨ALV-J在宿主细胞中复制与PI3K/Akt信号转导通路的关系。【方法】将血管瘤病变型ALV-J毒株HN06和骨髓瘤病变型ALV-J毒株NX0101分别感染DF-1细胞,通过Western blot、Real-time PCR、IFA和ELISA等方法,观察细胞Akt蛋白磷酸化水平、病毒RNA表达水平和病毒蛋白表达水平等指标。【结果】HN06株和NX0101株在体外细胞中复制水平有差异。HN06株的早期感染可引起Akt转导通路的活化,病毒引起的Akt磷酸化具有病毒滴度依赖性,而且能被PI3K特异性抑制剂LY294002所抑制,表明HN06株诱导的Akt活化是PI3K途径依赖的。LY294002可在病毒感染早期呈剂量依赖性地显著降低受染细胞中HN06 RNA水平、囊膜蛋白水平和细胞培养物上清中的病毒粒子含量。【结论】PI3K/Akt信号转导通路活化对HN06株在细胞感染早期具有重要的作用,该结果与已报道的有关细胞PI3K/Akt信号转导通路参与NX0101株的早期感染的结论一致。本研究为进一步阐明ALV-J入侵宿主细胞和复制的精确机制等研究奠定了基础。
- 冯少珍李娇吴晓婵曹伟胜廖明
- 关键词：J亚群禽白血病病毒血管瘤PI3K/AKT
- YXXM基序对J亚群禽白血病病毒复制的影响
- 2011年
- 【目的】毒株NX0101是骨髓瘤病变型J亚群禽白血病病毒,其早期感染细胞能诱导PI3K/Akt信号转导通路的激活,本文针对NX0101毒株是否存在YXXM基序及其作用进行了探讨。【方法】利用TMpred软件对NX0101毒株囊膜蛋白(Env)的氨基酸序列进行生物信息学分析,通过搭桥PCR方法将YXXM基序相应的核苷酸序列突变后,构建突变质粒并转染DF-1细胞,拯救出YXXM突变体毒株NX0101mt(Y/F,M/A),利用real-time PCR和ELISA方法检测并比较YXXM突变前后毒株在RNA水平和蛋白水平的复制情况。【结果】NX0101毒株Env胞浆区554-557位氨基酸存在典型的PI3K结合基序YXXM。YXXM基序突变后,病毒RNA转录水平和病毒蛋白合成水平都显著下降。【结论】YXXM基序对NX0101毒株在体外宿主细胞中复制发挥重要的作用。
- 冯少珍李娇曹伟胜廖明
- 关键词：J亚群禽白血病病毒病毒复制
