目的研制肠侵袭性大肠埃希氏菌核酸标准样品,并对其均匀性和稳定性进行评价。方法本文研究了肠侵袭性大肠埃希氏菌核酸标准样品的关键制备技术和保存技术,定值技术和定值方式,开展均匀性和稳定性试验,并对食品中肠侵袭性大肠埃希氏菌核酸标准样品的不确定度进行确定;标准样品采用Pico Green DNA分子荧光定量方法进行定值。多家单位合作定值,确定标准样品的标准值及其不确定度。结果标准样品均匀性标准不确定度为0.016%,不稳定标准差为0.0100,均匀性和稳定性试验结果表明,本文研制的标准样品均匀且稳定。结论研制出具有溯源性的肠侵袭性大肠埃希氏菌核酸标准样品并获得国家标准样品证书,可适用于肠侵袭性大肠埃希氏菌的检测和质量控制。
从泰安地区送检的疑是细小病毒感染的蓝狐粪便中分离到一株病毒。经理化特性鉴定、血凝谱鉴定、人工感染蓝狐等鉴定,表明所分离病毒为细小病毒。并且根据GenBank上发表的犬细小病毒(Canine parvovirus,CPV)、猫细小病毒(Feline parvovirus,FPV)核酸序列,设计扩增VP1基因的引物,采用PCR技术扩增所分离细小病毒的VP1全基因,将PCR产物克隆入pMD18-T载体,进行测序分析。结果,所分离细小病毒的VP1基因全长2256bp,编码727个氨基酸,与CPV和FPV参照株的VP1基因同源性在98.7%～99.5%。VP1基因的系统发生分析表明所分离病毒与FPV的亲源关系最为密切。所分离病毒VP1蛋白375位氨基酸残基与CPV的VP1蛋白氨基酸残基一致,但其223位、236位、246位、466位、707位、711位氨基酸残基与FPVVP1蛋白的氨基酸残基一致,该病毒VP1蛋白序列表现出了过渡型序列特征,介于FPV与CPV间的过渡类型,这说明所分离病毒为蓝狐细小病毒(Blue fox parvovirus,BFPV),命名为BFPV-TA,蓝狐可能在CPV的起源过程起到重要的作用。
