高博
- 作品数：4 被引量：7H指数：2
- 供职机构：军事医学科学院军事兽医研究所更多>>
- 发文基金：广西青年科学基金广西壮族自治区自然科学基金广西壮族自治区科学研究与技术开发计划更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 猪繁殖与呼吸综合征病毒GP5和M基因重组腺病毒的构建及表达被引量：2
- 2012年
- 为构建猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)重组腺病毒活载体疫苗,本研究将PRRSV GP5和M基因串联表达盒定向克隆至穿梭质粒pacAd5CMVK-NpA多克隆位点处,获得重组穿梭质粒pacAd5CMVK-NpA-GP5-M,与骨架质粒pacAd5 9.2-100共转染293AD细胞,包装出含有GP5和M基因的重组腺病毒rAd5-GP5-M。应用PCR技术、间接免疫荧光、Western blot分析,结果表明,GP5和M基因已经被成功整合到了腺病毒基因组上,且GP5和M蛋白在293AD细胞上均得到了表达;滴度测定表明,该重组腺病毒rAd5v-GP5-M的TCID50为10-6.5/mL;连续传代试验表明该重组腺病毒可在细胞内稳定繁殖,有效地转录并表达GP5和M蛋白,具有较高的遗传稳定性。该研究为PRRSV重组腺病毒疫苗的研制打下了基础。
- 高博马玲张念毛燕陈凤莲张守峰刘烨张菲扈荣良吴健敏
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒GP5基因M基因重组腺病毒
- Tn5转座子介导表达猪瘟E2蛋白和EGFP重组伪狂犬病毒的构建被引量：2
- 2011年
- 为构建猪瘟重组伪狂犬疫苗,以Tn5转座子为介导,采用体外转座的方法将猪瘟病毒(Classical swine fever virus,CSFV)E2基因和增强绿色荧光蛋白(enhanced green fluoresce protein,EGFP)的表达盒随机插入伪狂犬病毒(Pseudorabies virus,PRV)基因组中,随后将转座产物转染BHK-21细胞,获得表达E2蛋白和EGFP的病毒库,并对E2蛋白和EGFP在细胞上的表达效果进行PCR鉴定和间接免疫荧光分析。试验结果表明,运用体外转座的方法可以将外源基因插入PRV基因组中,并且外源基因可以在细胞中表达。本研究为重组病毒的研究提供了新思路,并为新型重组猪瘟疫苗的研制进一步奠定了基础。
- 高博范志强韩乃君张念张锦霞王颖白安斌黄红梅扈荣良吴健敏
- 关键词：猪瘟病毒E2基因伪狂犬病毒
- 猪瘟病毒E2蛋白基因重组人5型腺病毒的构建及鉴定被引量：3
- 2012年
- 目的构建猪瘟病毒(Classical swine fever virus,CSFV)E2蛋白基因重组人5型腺病毒,并进行鉴定。方法通过巢式PCR从猪瘟活疫苗中扩增CSFV E2全基因序列,克隆至穿梭质粒pacAd5 CMVK-NpA的多克隆位点处,构建重组穿梭质粒pacAd5 CMVK-NpA-E2,将其线性化后与骨架质粒pacAd5 9.2-100共转染293AD细胞,进行重组腺病毒的包装。细胞完全病变后,采用RT-PCR法检测E2基因mRNA的转录;细胞病变法检测病毒滴度;连续传代后检测病毒的稳定性;Western blot法检测E2蛋白的表达;以105.82TCID50重组腺病毒经腹腔免疫小鼠,间接ELISA法检测小鼠血清猪瘟抗体效价。结果重组穿梭质粒pacAd5 CMVK-NpA-E2经双酶切及测序证明构建正确;重组腺病毒rAd5v-MxE2转染的293AD细胞可检测到E2基因的转录和蛋白的表达;重组腺病毒的滴度为105.82TCID50/ml;第5、30代重组腺病毒均可扩增出目的基因条带,病毒滴度无明显变化;重组腺病毒免疫小鼠后,可产生CSFV抗体。结论成功构建了CSFV E2基因重组人5型腺病毒,其免疫原性良好,为进一步研制猪瘟基因工程疫苗奠定了基础。
- 杨洋高博宫婷李业伟孙程龙张守峰刘晔扈荣良
- 关键词：猪瘟病毒E2蛋白腺病毒免疫原性
- 表达猪繁殖与呼吸综合征病毒GP5和M蛋白重组腺病毒的构建及生物学活性分析
- 猪繁殖与呼吸综合征(Porcinereproductiveandrespiratorysyndrome，PRRS)是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcinereproductiveandrespiratorysyndro...
- 高博
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征GP5蛋白M蛋白重组腺病毒生物学活性
