马志峰
- 作品数：2 被引量：2H指数：1
- 供职机构：南京大学生命科学学院分子医学研究所更多>>
- 发文基金：教育部“新世纪优秀人才支持计划”国家教育部博士点基金更多>>
- 相关领域：生物学更多>>
- 重组刺桐胰蛋白酶抑制剂的制备及活性鉴定(英文)
- 2005年
- 刺桐胰蛋白酶抑制剂(ETI)是一种Kunitz型胰蛋白酶抑制剂,能够抑制胰蛋白酶及组织型纤溶酶原激活剂的活性,因此ETI可以作为配体与固定相偶联用于亲和层析.利用化学合成及聚合酶链式反应(PCR)的方法获得ETI的编码基因,然后用NdeI/SacI酶切并插入载体pET25b ( +)中构建重组表达质粒pET25b ( +)/ETI .重组表达质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)后,用IPTG诱导使重组ETI(rETI)过量表达形成包涵体.包涵体经过洗涤、复性及CM离子交换柱纯化,每升培养液可获得14 mgrETI ,其纯度超过92 %.活性测定表明,rETI对凝血酶及尿激酶的活性没有抑制作用,但能显著抑制胰蛋白酶、瑞替普酶及纤溶酶的活性,抑制常数Ki分别为5 .14×10-9,9 .4×10-8和2 .08×10-8mol/L.
- 马志峰孙自勇陈均勇刘建宁
- 关键词：胰蛋白酶瑞替普酶纤溶酶
- 重组抑肽酶的表达纯化和活性测定被引量：2
- 2007年
- 抑肽酶是一种用途广泛的丝氨酸蛋白酶抑制剂.用基因重组技术将化学合成的抑肽酶基因插入表达载体pET28a,并转化至大肠杆菌Rosetta(DE3)中,经IPTG诱导后,表达产物以包涵体形式存在于菌体内包涵体纯化后经复性及CM-阳离子交换层析后,从每升培养液可获得2.4 mg抑肽酶,纯度可达90%.活性测定结果显示,重组抑肽酶可竞争性抑制纤溶酶对小分子底物S2251的水解活性.抑制常数(Ki)为(0.6±0.3)nmol/L,与天然抑肽酶的抑制活性相似.
- 陆嵬马志峰陈均勇汤逢源孙自勇刘建宁
- 关键词：抑肽酶纤溶酶纯化
