陈晓禹
- 作品数：12 被引量：10H指数：3
- 供职机构：江苏省人民医院更多>>
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- 18例小儿肝豆状核变性临床分析
- 2000年
- 陈晓禹陈吉庆
- 关键词：肝豆状核变性铜代谢障碍儿童
- 低氧对钾-氯协同转运子1启动子的调控作用被引量：3
- 2005年
- 目的通过观察低氧对钾-氯协同转运子1(KCC1)启动子的作用及对KCC1基因表达的影响,探索低氧诱导因子1α(HIF-1α)结合位点是否为真正的低氧诱导因子结合位点、在低氧环境中该位点的作用以及KCC与低氧间的关系。方法用KCC1野生型启动子和HIF-1α位点变异的KCC1启动子转染人胚胎肾上皮(HEK)293细胞。转染细胞分别在低氧条件下和正常培养条件下培养,用荧光素酶功能分析的方法观测低氧对KCC1启动子荧光素酶活性的影响:用RT-PCR方法比较两种培养条件下KCC1mRNA表达水平的差异。结果低氧条件下野生型KCC1启动子荧光素酶活性为正常培养条件下的KCC1启动子荧光素酶活性的1.8倍,而变异的HIF-1α位点的KCC1启动子荧光素酶活性则在两种条件下差异无统计学意义。低氧条件下HEK293细胞的KCC1mRNA表达水平是正常氧条件下表达量的2.65倍,差异有统计学意义。结论本研究发现了KCC1启动子中有HIF-1α结合位点,低氧可增强KCC1启动子的活性。该位点的变异与否决定了启动子活性是否受低氧的影响。该结果证实了KCC与低氧间的关系,为建立低氧-KCC1-肾小管间质损害之间的链接提供了实验依据。
- 周国平陈吉庆吴升华陈晓禹陈辉吴元俊
- 关键词：低氧启动子HIF-1Α荧光素酶结合位点
- 血管加压素对哮喘大鼠下丘脑-腺垂体-肾上腺皮质功能的影响
- 目的观察在哮喘急性发作过程中,大鼠血浆中血管加压素(AVP)、促肾上腺皮质激素(ACTH) 和皮质醇含量的变化以及下丘脑中AVP、促肾上腺皮质激素释放因子(CRF)含量的变化,进而探讨急性哮喘发作对机体应激水平的影响以及...
- 陈晓禹卢秋穗张银美陈吉庆
- 文献传递
- 贝伐单抗对实验大鼠机械通气引发急性肺损伤的预防效应被引量：1
- 2011年
- 目的研究贝伐单抗对机械通气引起的肺损伤的预防作用。方法 18只Wistar大鼠随机均分为三组:假手术(A)组、机械通气(B)组和贝伐单抗20mg/kg治疗(C)组。通气结束后,常规取肺泡灌洗液与肺组织,ELISA法检测灌洗液中的血管内皮生长因子(VEGF)浓度,Brodfard法测定蛋白含量,依文氏蓝含量和肺干/湿重比值评价肺毛细血管通透性,HE染色观察肺组织的病理改变并计算肺损伤指数。结果与A组相比,B组肺泡灌洗液中VEGF浓度、肺毛细血管通透性与肺损伤均显著增加(P<0.05),而C组上述指标均较B组明显降低(P<0.05)。结论贝伐单抗对机械通气引起的肺损伤有一定的预防效应。
- 陈晓禹苏兰娣邵小松胡毓华
- 关键词：贝伐单抗机械通气肺损伤血管内皮生长因子
- 流感病毒非结构蛋白对TBK-1的抑制作用
- 2005年
- 目的 流感病毒非结构蛋白1(nonstructuralprotein 1,NS1)抑制干扰素调节因子(inter feronregulatoryfactors,IRF) 3的机制未明,TANK结合激酶1(TANK bindingkinase 1,TBK- 1)能使IRF 3活化,研究NS1是否对TBK -1有抑制作用。方法 亚克隆IRF 3、NS1和TBK- 1至pcDNA3.1 flag构建flag IRF 3、flag NS1和flag TBK- 1质粒;用TBK- 1对TBK- 1+NS1以及IRF 3+TBK- 1对IRF 3+TBK- 1+NS1两组实验,分别共转染人胚胎肾上皮2 93细胞,用抗flag抗体作Westernblot分析,鉴定IRF 3、NS1和TBK- 1的表达,观测NS1对TBK 1活化IRF 3的抑制作用;荧光素酶功能分析方法观测NS1对TBK 1诱导的干扰素β(IFN β)启动子pGL- 2B荧光素酶活性的影响。结果 IRF- 3、NS1和TBK- 1均有高表达。TBK 1能使IRF 3活化,Westernblot分析显示:TBK -1转染的细胞出现迁移较慢的IRF 3Ⅲ和Ⅳ型,NS1共转染可使IRF- 3Ⅲ和Ⅳ型几乎消失;荧光素酶功能分析显示,NS1能抑制TBK- 1活化内源性IRF 3所诱导的IFN -β启动子活性,约为对照组的1 4 ,TBK 1+IRF- 3共转染可使IFN- β启动子活性增高近10 0 0倍,NS1可使TBK -1活化外源性IRF 3所诱导的IFN- β启动子的活性降至对照组的约1 2至1 3。结论 流感病毒NS1可抑制TBK 1所致的IRF 3活化。
- 周国平陈吉庆吴升华陈晓禹陈辉
- 关键词：流感病毒非结构蛋白干扰素调节因子3
- 变异的非结构蛋白对干扰素调节因子3的作用被引量：1
- 2006年
- 目的研究一种变异的流感病毒非结构蛋白(NS1)对干扰素调节因子3(IRF-3)抑制作用的影响。方法用A/FM/1/47、A/HK/1/68、A/HK/1/68-MA20、A/HK/1/68-MA20C和阳性对照Sendai病毒(SV)感染HEK293细胞,Western blot比较这些病毒感染后磷酸化的迁移较慢的IRF-3Ⅲ和Ⅳ型是否出现。亚克隆A/HK/1/68的野生型NS1和A/HK/1/68-MA20的变异型NS1至pcDNA3.1-flag构建flag-NS1野生型,flag-NS1变异型质粒,分别用两种质粒转染HEK293细胞,转染后16h,感染SV8h,然后收集细胞,作Western印迹分析,用抗flag抗体鉴定野生型和变异型NS1的表达,用抗IRF-3抗体观测NS1对SV活化IRF-3的抑制作用,用荧光素酶功能分析的方法观测两种NS1对SV诱导的干扰素β启动子-pGL-2B荧光素酶活性的影响。结果感染的5种病毒中仅毒性较低的A/HK/1/68-MA20和阳性对照SV能使IRF-3磷酸化,感染MA20后9h开始有IRF-3磷酸化,23h和26h最强,比较A/HK/1/68和A/HK/1/68-MA20的NS1序列,发现从cDNA起始的第94位核苷酸由T变成C,蛋白质的第23位由缬氨酸变成丙氨酸。NS1野生型和变异型均有高表达。结论A/HK/1/68-MA20的NS1的点变异可导致失去野生型NS1的抑制干扰素β启动子活性的作用。
- 周国平陈吉庆吴升华陈晓禹陈辉
- 关键词：干扰素调节因子3病毒非结构蛋白质类正粘病毒科
- 流感病毒非结构蛋白对TBK-1的抑制作用
- 目的流感病毒非结构蛋白1(Nonstructural protein 1,NS1)抑制干扰素调节因子(interferon regulatory factors,IRF)3的机制未明,TANK结合激酶1(TANK-bin...
- 周国平陈吉庆吴升华陈晓禹陈辉
- 文献传递
- 钾-氯协同转运子1新的同分异构体的发现及其转录调控意义被引量：2
- 2005年
- 目的寻找钾-氯协同转运子(KCC)1新的同分异构体及分析其意义。方法抽提正常人肾组织RNA,用已发表KCCl序列设计引物,进行cDNA末端快速放大(RACE)及RT-PCR,以Northern印迹分析证实新的同分异构体的存在,并用生物信息学方法比较新序列。结果RACE和Northern印迹分析结果证实在人肾组织中有3种KCCl的新的同分异构体,与野生型KCCl不同的是,新的KCCl同分异构体2含部分内含子1的序列(外显子1b),作为其外显子1.蛋白翻译起始密码子也位于该外显子中。新的KCCl同分异构体3含外显子1b、外显子2、内含子2及以后与野生型KCCl相同的序列,蛋白翻译起始密码子位于外显子4,导致-长的5'端非翻译区,内含子2靠外显子3的位置有-翻译终止密码子。新的KCCl同分异构体4含部分内含子3作为其5'端非翻译区。结论新的异构体的发现为KCC家族增添了新的成员,并为KCCl这一重要分子的转录和功能调节提供了新的线索,其特异性序列可用于分析它们在人类疾病中的病理意义。由于启动子类型的不同对同分异构体基因转录的选择起主动的调节作用,多个同分异构体及多个启动子的存在对理解KCCl复杂的生理功能、调节过程和致病机制具有重要意义。
- 周国平陈吉庆吴升华陈晓禹陈辉吴元俊
- 关键词：同分异构体转录基因调节
- 干扰素调节因子剪切的剪接异构体IRF-3c的结构及功能被引量：3
- 2005年
- 目的干扰素调节因子(IRF)3是病毒感染后调节干扰素基因转录重要的转录因子,寻找IRF-3新的剪接异构体,研究其结构及功能.方法抽提人类细胞RNA,用IRF-3已发表序列设计引物,作cDNA末端快速放大(RACE)及逆转录聚合酶链反应,生物信息学方法比较新序列,亚克隆IRF-3c至pcDNA3.1-flag,转染人胚胎肾上皮293细胞,用抗flag抗体作Western blot分析,用萤虫素酶功能分析的方法观测IRF-3c对病毒诱导的干扰素β启动子萤虫素酶活性的影响.结果发现了一种新的IRF3剪接异构体IRF-3c,IRF-3c用了紧接第六外显子后的180个第六内含子的碱基,新引入的最初第2、3、4个新碱基为一终止密码子,导致IRF-3c蛋白多肽终止于第327位.Western blot出现预期的相对分子质量为44 000的IRF-3c的蛋白强阳性条带.新的引用外显子序列可在小鼠的ETS表达库中找到同源序列,提示这种新的剪接体在生物演进中有其保守功能,IRF-3c萤虫素酶功能分析显示,该剪接体能抑制病毒诱导的干扰素β启动子活性至对照组的40%～50%.结论新的剪接体的发现为IRF-3这一重要分子的功能调节提供了新的线索,它是病毒感染通路中干扰素的显负性抑制剂,提示其功能为干扰素产生的精细调节成分,可防止干扰素的过度产生,其特异性序列可用于分析它们在人类疾病中的病理意义.
- 周国平陈吉庆吴升华陈晓禹陈辉
- 关键词：干扰素调节因子剪接体转录
- 一种新的干扰素调节因子拼接异构体IRF-3b的结构及功能被引量：3
- 2005年
- 目的 干扰素调节因子 (interferonregulatoryfactors ,IRF) 3是病毒感染后调节干扰素基因转录重要的转录因子 ,寻找IRF 3新的基因拼接异构体 ,研究其结构及功能。方法 抽提人类细胞RNA ,用IRF 3已发表序列设计引物 ,作cDNA末端快速放大 (RACE)及RT PCR ,生物信息学方法比较新序列 ,亚克隆IRF 3b至 pcDNA3.1 flag ,转染人胚胎肾上皮 2 93细胞 ,用抗flag抗体作Westernblot分析 ,用荧光素酶功能分析的方法观测IRF 3b对病毒诱导的干扰素 β启动子荧光素酶活性的影响。结果 发现了一种新的IRF 3拼接异构体IRF 3b ,IRF 3b用了紧接第七外显子前的 1 6个第六内含子的碱基 ,导致阅读框架移位 ,相应蛋白质的C端第 32 8～ 4 52位为不同于IRF 3的新C末端。Westernblot出现预期的相对分子质量 (Mr)为 57.75× 1 0 3的IRF 3b蛋白强阳性条带。新的外显子序列可在小鼠的表达序列标签 (EST)表达库中找到同源序列 ,提示这种新的异构体在生物演进中有其保守功能 ,IRF 3b荧光素酶功能分析显示 ,该同分异构体能抑制病毒诱导的干扰素 β启动子活性至对照组的 4 0 %～ 50 %。结论 新的异构体的发现为IRF 3这一重要分子的功能调节提供了新的线索 ,它可能是病毒感染通路中干扰素的显性负性抑制剂 ,提示其功能为干扰素产生的?
- 周国平陈吉庆吴升华陈晓禹陈辉
- 关键词：干扰素调节因子异构体PCDNA3细胞RNA293细胞基因拼接
