郭乾
- 作品数：5 被引量：11H指数：2
- 供职机构：石河子大学动物科技学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国际科技合作与交流专项项目更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 牛种布鲁菌virB4基因酵母表达载体的构建被引量：1
- 2010年
- 根据GenBank中的牛种布鲁菌RB51株virB4基因保守序列设计引物，扩增virB4基因，将其克隆到pMD18-T载体上，鉴定正确后与酵母表达载体pGBKT7进行连接，转化酿酒酵母菌Y187后进行PCR、酶切鉴定，阳性克隆测序分析后转化酿酒酵母菌Y187感受态细胞进行自激活和毒性检测。结果表明：克隆的基因包含了virB4完整编码区的2496bp核苷酸序列，成功地构建了包含pGBKT7-virB4诱饵质粒的酿酒酵母菌Y187表达菌。
- 郭乾陈创夫张辉王勇任艳
- 布鲁氏菌omp25基因真核表达载体的构建与分析被引量：5
- 2010年
- 构建表达流产布鲁氏菌外膜蛋白基因omp25的酿酒酵母表达菌并进行验证。对流产布鲁氏菌疫苗株S19外膜蛋白基因omp25设计特异引物进行PCR扩增,连接到pGM-T载体上,获得pGM-T-omp25,进行PCR扩增、酶切、测序鉴定。将质粒pGM-T-omp25与pGBKT7载体进行EcoRⅠ/SalⅠ双酶切,回收DNA片段,并进行连接,构建pGBKT7-omp25后,转化酿酒酵母菌Y187,并进行PCR鉴定、自激活实验和毒性检测。克隆了流产布鲁氏菌外膜蛋白基因omp25,PCR、酶切、测序表明成功构建了pGBKT7-omp25真核表达载体,获得的转化子酵母Y187菌株无自激活活性,无毒性。成功构建了表达流产布鲁氏菌外膜蛋白基因omp25的酿酒酵母表达菌,为揭示流产布鲁氏菌感染与母畜流产间的分子机制奠定基础。
- 王勇陈创夫张辉郭乾任艳蒋松
- 关键词：流产布鲁氏菌真核表达
- 布鲁氏菌VirB4蛋白与宿主胚胎滋养细胞相互作用的研究
- 布鲁氏菌病在世界上的多个国家和地区都是一个无法彻底解决的难题,每年人病发案例超过50万,不仅对人民的身体健康构成威胁,也给畜牧业的发展造成了不可估量的损失。研究表明布鲁氏菌Ⅳ型分泌系统家族蛋白与布鲁氏菌的侵染、胞内生存、...
- 郭乾
- 关键词：布鲁氏菌试管凝集酵母双杂交
- 文献传递
- 牛胚胎滋养层巨细胞的体外分离培养
- 2009年
- 建立牛胚胎滋养层细胞的体外分离、培养方法。取怀孕牛45～60天的完整子宫,无菌条件下收集胚胎子叶,采用胶原酶消化方法分离细胞。将细胞随机分为两组,一组用差异贴壁法纯化滋养层细胞,另一组未纯化则用含15%胎牛血清和滋养层细胞生长添加剂(trophoblast growth supplement,TGS)的DMEM培养基培养细胞。采用台盼蓝和Hoechst33342细胞染色液对细胞活力及形态学进行分析,采用免疫细胞化学法进行细胞纯度鉴定。结果显示,本实验分离的细胞经台盼蓝染色后记录细胞存活率大于90%,核染可见典型双核特征。纯化组细胞经差异贴壁法纯化后双核滋养层巨细胞(binucleate trophoblast giant cells,TGC)纯度可达95%,未纯化组细胞中TGC只占45%～50%左右。抗细胞角蛋白抗体检测呈阳性,抗波形蛋白抗体检测呈阴性。细胞经过4次传代后,可以存活60天。本试验成功建立了一种快速、简便、能够培养高纯度牛胚胎滋养层细胞的方法,为进一步研究滋养层细胞与相关病原侵入机制打下了基础。
- 任艳陈创夫乔军王勇郭乾张辉王鹏雁
- 关键词：细胞培养
- 布鲁氏菌外膜蛋白VirB4在感染胚胎滋养层细胞中的作用分析被引量：5
- 2014年
- 目的筛选布鲁氏菌侵染牛胚胎滋养层细胞过程中与Ⅳ型分泌系统VirB4蛋白结合的潜在靶蛋白。方法设计引物并PCR扩增布鲁氏菌的virB4基因,构建表达载体pGBKT7-VirB4,酶切鉴定,测序分析正确后,转化酿酒酵母菌感受态细胞Y187,进行自激活和毒性检测;建立布鲁氏菌侵染牛胚胎滋养层细胞模型,构建布鲁氏菌侵染牛胚胎滋养层细胞cDNA文库;采用酵母双杂交技术筛选与VirB4相互作用的滋养层细胞蛋白,实时定量PCR检测靶蛋白表达量的变化。结果成功构建了pGBKT7-virB4诱饵质粒,转入Y187后无毒性,不能自激活;获得了布鲁氏菌侵染牛胚胎滋养层细胞cDNA文库;筛选到了13个阳性质粒,其中蛋白辅酶Q10和SLC3A2在布鲁氏菌侵染后mRNA表达量均增加。结论本试验对VirB4蛋白与宿主细胞的互作研究为进一步阐明布鲁氏菌感染宿主细胞的发病机制奠定了基础。
- 孙志华刘良波张豫刘娟韩玉霞刘来珍郭乾陈创夫张辉
- 关键词：布鲁氏菌CDNA文库酵母双杂交MRNA
