葛琼 作品数:54 被引量:431 H指数:11 供职机构: 浙江省疾病预防控制中心 更多>> 发文基金: 浙江省自然科学基金 国家科技重大专项 浙江省科技厅资助项目 更多>> 相关领域: 医药卫生 农业科学 生物学 更多>>
SARS病毒核蛋白基因的克隆及其表达研究 被引量:3 2003年 从一例输入性传染性非典型性肺炎病人血清中提取病毒RNA,通过RT-PCR方法扩增出SARS病毒核蛋白基因片段,克隆入质粒载体pUCm-T后,进行核苷酸序列的测定及分析,与已公布的SARS病毒基因序列进行比较,证实为SARS冠状病毒核蛋白基因。为了解该病毒核蛋白的抗原特性,将核蛋白基因插入表达载体,构建重组质粒pET28a-SN,转导大肠杆菌BL21(DE3)后,加IPTG诱导表达。产物经SDS-PAGE电泳分析,表达出相对分子量约为50kDa的蛋白,占整个菌体的45%左右。Western-blot分析表明,表达产物仅与SARS阳性病人血清起反应,而与正常血清不起反应。间接ELISA免疫检测,抗原滴度达1:12500。表明表达的核蛋白为SARS特异性抗原,这为SARS病毒的诊断试剂的研制提供了方便而安全的抗原来源。 朱函坪 陆群英 卢亦愚 姚苹苹 徐芳 葛琼 翁景清 严菊英 龚黎明 施雯 赵芝雅 朱智勇关键词:SARS病毒 核蛋白基因 克隆 严重急性呼吸综合征 一种H5N1型禽流感病毒荧光扩增检测试剂盒及检测方法 本发明提供了一种H5N1型禽流感病毒荧光扩增检测试剂盒及及其利用试剂盒检测禽流感病毒的检测方法,试剂盒包括H5N1型禽流感病毒血凝素基因标准品、荧光扩增检测试剂以及DNA聚合酶与逆转录酶,荧光扩增检测试剂主要包括一步法R... 卢亦愚 严菊英 冯燕 茅海燕 徐昌平 葛琼文献传递 一种H5N1型禽流感病毒荧光扩增检测试剂盒及检测方法 本发明提供了一种H5N1型禽流感病毒荧光扩增检测试剂盒及及其利用试剂盒检测禽流感病毒的检测方法,试剂盒包括H5N1型禽流感病毒血凝素基因标准品、荧光扩增检测试剂以及DNA聚合酶与逆转录酶,荧光扩增检测试剂主要包括一步法R... 卢亦愚 严菊英 冯燕 茅海燕 徐昌平 葛琼文献传递 老鹳草素在制备抗新型冠状病毒药中的应用 本发明公开了一种老鹳草素在制备抗新型冠状病毒药中的应用。本发明首次将老鹳草素应用于治疗由新型冠状病毒引起的感染中,研究发现,老鹳草素能够有效抑制新型冠状病毒在细胞内的增殖,因此能够用于治疗由新型冠状病毒感染引起的肺炎疾病... 徐昌平 冯燕 高见 葛琼 卢亦愚 吴卓颖 张云怡文献传递 浙江省乙型流感病毒HA_1基因分析 被引量:11 2008年 目的:了解浙江省近几年乙型流感病毒的基因变异情况和WHO推荐流感疫苗株对浙江省人体的保护情况。方法:采集浙江省类流感样本进行流感病毒的分离和鉴定,并对分离到的乙型流感病毒进行核酸的提取,采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)扩增病毒基因后进行病毒血凝素HA1基因核苷酸序列测定,用DNAMAN和BioEdit生物软件对测序结果进行分析处理,并与WHO推荐疫苗株基因进行比对。结果:分离到Yamagata系和Victoria系两个进化系的乙型流感病毒,两系毒株均未发现核苷酸的丢失和插入,糖基化位点没有太大改变。毒株之间核苷酸的同源性为95.25%,氨基酸的同源性为95.28%。Yamagata系毒株HA1区域核苷酸序列长度为1038 bp,推导的氨基酸序列长度为346个,氨基酸变异替换数在6-8之间;Victoria系毒株HA1区域的核苷酸序列长度为1041 bp,推导的氨基酸序列长度为347个,氨基酸变异替换数在2-8之间,相比Yamagata系毒株在163位上都多1个天冬酰胺(N)。基因进化树上可见明显的Yamagata系和Victoria系两个分支。结论:浙江省人群交替流行着Yamagata系和Victoria系两个抗原性不同的进化系的乙型流感病毒,病毒的基因发生了变异,抗原已发生漂移。2001、2006两年WHO推荐乙型流感疫苗株与我省当年流行株为不同谱系毒株,预防保护效果不够理想,其余年份为同一谱系毒株,预防保护效果较好。 李敏红 周敏 茅海燕 卢亦愚 严菊英 龚黎明 葛琼关键词:乙型流感病毒 血凝素基因 核苷酸序列 槲皮素在制备抗新型冠状病毒药中的应用 本发明公开了一种槲皮素在制备抗新型冠状病毒药中的应用。本发明首次将槲皮素用于治疗由新型冠状病毒引起的感染中,研究发现,槲皮素能够有效抑制新型冠状病毒在细胞内的增殖,因此能够用于治疗由新型冠状病毒感染引起的肺炎疾病。既扩展... 冯燕 徐昌平 高见 葛琼 卢亦愚 吴卓颖 张云怡文献传递 SARS荧光免疫诊断技术研究 被引量:1 2004年 目的 应用基因工程技术 ,在昆虫细胞中表达SARS核蛋白基因 ,产生无感染性的核蛋白抗原 ,利用此蛋白制备抗原片 ,用于检测血清中SARS特异性抗体。方法 从非典型性肺炎病人血清中提取病毒RNA ,通过RT PCR方法扩增出SARS核蛋白基因片段 ,将核蛋白基因插入杆状病毒 ,构建重组昆虫杆状病毒 ,转染昆虫细胞 ,收获细胞 ,经丙酮固定 ,制成SARS抗原片 ,建立了SARS荧光免疫方法 (IFA)。结果 用此抗原片检测多份血清 ,仅与SARS病人血清起反应 ,而与正常人及其它发热病人血清不起反应。结论 利用该方法制备抗原片 ,不需要P3实验室 ,操作简便 ,为诊断与研究SARS提供了方便而安全的方法。 朱函坪 卢亦愚 陆群英 姚苹苹 严菊英 徐芳 翁景清 李敏红 葛琼 龚黎明 施雯 赵芝雅 朱智勇关键词:SARS 荧光免疫法 基因工程 核蛋白基因 抗原 肠道病毒EV71荧光定量RT-PCR法快速检测 被引量:9 2009年 严菊英 卢亦愚 徐昌平 龚黎明 葛琼 李榛 陈寅 张严峻关键词:手足口病 肠道病毒 荧光定量RT-PCR TaqMan荧光定量RT-PCR法快速检测肠道病毒EV71 被引量:8 2008年 严菊英 卢亦愚 徐昌平 龚黎明 葛琼 李榛 陈寅 冯燕 张严峻关键词:肠道病毒属 EV71 TAQMAN 荧光定量 肠道病毒71型 浙江省2008-2009年三起诺如病毒胃肠炎暴发的病原分子特征分析 被引量:21 2011年 目的分析浙汀省3起病毒性胃肠炎暴发疫情的诺如病毒分子特征。方法收集监测期间病毒性胃肠炎暴发疫情患者的粪便标本,采用荧光定量RT-PCR方法检测诺如病毒,并选择部分阳性标本扩增部分多聚酶区(RdRp)和衣壳蛋白区,同时采用3’RACE(rapid amplification of cDNA 3’ends)扩增诺如病毒基因组3’末端,获得完整的开放读码框架(ORF)2和ORF3序列。结果3起暴发疫情共检测标本62份,诺如病毒阳性41份,其中诺如病毒Ⅰ(GⅠ)基因组阳性27例,Ⅱ基因组(GⅡ)阳性9例,GⅠ+GⅡ阳性5例。结果显示,引起浙江省2008—2009年3起病毒性胃肠炎暴发疫情的诺如病毒具有病毒基因型的多样性,包括GⅠ.8、GⅡ.b、GⅠ.2与GⅠ.6重组株、GⅠ.8和GⅡ.b混合感染。结论诺如病毒是浙江省病毒性腹泻暴发疫情的重要病原体,呈现出病毒基冈型的多样性,并在省内首次检测到诺如病毒的重组和混合感染毒株。 龚黎明 葛琼 陈寅 卢亦愚 张严峻 严菊英 周敏 史雯关键词:诺如病毒 分子特征