胡志浩
- 作品数：16 被引量：60H指数：4
- 供职机构：华中农业大学生命科学技术学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金The Royal Society美国洛克菲勒基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学化学工程医药卫生更多>>
- 一个巨大的多烯抗生素基因簇中聚酮合酶(PKS)基因单元在大肠杆菌中的双重诱导超量表达被引量：2
- 1999年
- 根据序列分析信息，将链霉菌FR－008中与多烯大环内酯抗生素生物合成直接有关的PKS基因簇内长2671bp的一个PKS单元以正确框架克隆于表达载体pET－15b中P（T7）启动子下游的BamHI位点上，经IPTG诱导只得到微量PKS表达。同样地克隆于pBV220中PRPL启动子下游的PKS基因在42℃诱导后也不能超量表达出PKS蛋白。然而克隆于串联启动子PRP（T7）或PRPLP（T7）下游的PKS基因却得到了超量表达。在PRPLP（T7）下游PKS基因的超量表达依赖于IPTG及42℃两个条件的双重诱导，而42℃及IPTG单独诱导只得到常量表达。而在PRP（T7）启动子下游时PKS基因在42℃、IPTG单独诱导或42℃＋IPTG双重诱导时均可获得超量表达。据此构建了启动子PR、P（T7）串联排列的表达载体pH2330。外源基因克隆于该载体起始密码子下游的多克隆位点时，表达的外源蛋白可用Ni（＋＋）"柱亲和纯化。此外，用在大肠杆菌中表达的PKS蛋白作为抗原免疫大白兔制备了特异性的抗体，Westernblotting实验证明该抗体是PKS特异性的，可用于PKS基因簇及PKS异源表达的深入研究。
- 陶美凤胡志浩周秀芬周启邓子新Tobias KIESERDavid A HOPWOOD
- 关键词：PKS大肠杆菌
- 大肠杆菌-链霉菌穿梭载体的构建及应用被引量：12
- 1998年
- ＩＪ６０２１和ｐＩＪ４１２３是链霉菌的高拷贝表达载体，它们携带有受硫链丝菌素诱导的强启动子ＰｔｉｐＡ。分别在它们的合适位点插入大肠杆菌质粒的复制子和在大肠杆菌中选择用的抗性标记基因（ｂｌａ），得到了两个能在大肠杆菌和链霉菌中穿梭复制、并保持结构稳定的链霉菌表达载体：ｐＨＺ１２７１和ｐＨＺ１２７２。将透明颤菌（Ｖｉｔｒｅｏｓｃｉｌｉａｓｐ．）血红蛋白基因（ｖｈｂ）克隆到ｐＨＺ１２７２中，用它转化变铅青链霉菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓｌｉｖｉｄａｎｓ），经Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔｉｎｇ分析和ＣＯ结合实验表明，在变铅青链霉菌中表达出了有生物活性的透明颤菌血红蛋白，从而证明所构建的ｐＨＺ１２７２载体具有在链霉菌中表达外源基因的功能。
- 杨闰英胡志浩邓子新李季伦
- 关键词：链霉菌大肠杆菌穿梭载体血红蛋白基因表达
- 一个巨大的抗真菌抗生素基因簇及其与植物生物技术的潜在关系被引量：2
- 1996年
- 从链霉菌ＦＲ－００８中克隆出一个七烯大环内酯抗生素的生物合成基因簇，基因置换试验证实克隆的基因片段与抗生素生物合成直接相关。ＦＲ－００８抗生素含有一个３８员由聚酮所衍生的内酯大环，由编码红霉素聚酮合酶的活性域基因片段为探针所进行的Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交试验证明，链霉菌ＦＲ－００８的聚酮合酶（ＰＫＳ）的基因簇占据１０５ｋｂ连续和具有重复功能单元（模块）的序列；假设每个ＰＫＳ模块为５ｋｂ，这与ＦＲ－００８碳链形成需要２１个缩合过程的预期数值极其吻合。链霉菌ＦＲ－００８的基因克隆系统（包括转化、转座、从大肠杆菌向链霉菌的属间接合转移、基因置换和基因中断体系和限制性缺陷菌株）均已得到发展，使我们能够充分利用基因工程技术来操纵七烯大环内酯的生物合成并产生新的抗生素衍生物。同时利用该基因簇中的部分ＰＫＳ基因序列构建了一个可用于转化植物的质粒ｐＨＺ３２１，为尝试在水稻等植物中表达链霉菌Ⅰ型ＰＫＳ基因以探索高Ｇ十Ｃ（７６％）含量的链霉菌ＰＫＳ基因能否在植物中表达提供了材料和工具。用此质粒来转化植物的研究，将为进一步利用这个巨大的抗真菌抗生素基因簇进行植物抗真菌的基因工程育种提供理论依据。
- 胡志浩陶美凤鲍锴周秀芬周启邓子新
- 关键词：链霉菌基因簇
- 多烯抗生素 FR-008 生物合成的分子生物学
- 胡志浩
- 关键词：DNA序列分析基因表达
- 多烯类抗生素FR-008生物合成的分子生物学
- 克隆和鉴定负责多烯类抗生素FR-008的生物合成基因簇,并对该基因簇的特征进行初步研究是该项课题的主要目的;同时,该项研究还尝试在大肠杆菌中表达了部分FR-008的生物合成基因,以期用获得的聚酮合成酶蛋白质用作抗原制备抗...
- 胡志浩
- 关键词：DNA序列分析基因表达
- 聚酮生物合成及其基因的遗传分析Ⅰ被引量：4
- 1996年
- 聚酮系指通过连续的低级羧酸如乙酸、丙二酸、丁酸等脱羧缩合而产生的一组在结构和生理功能上形形色色的分子.它们在植物、动物、真菌和细菌中的分布极为广泛,如植物体内的类黄酮(其中包括植物和根瘤菌相互作用后产生的物质),真菌产生的黄曲霉素,灰色链霉菌产生的杀假丝菌素等等.成百上千的、不同结构的聚酮表现出了各种不同的生物学特性,如抗细菌、抗真菌、抗肿瘤和抗蠕虫、抗蚊子幼虫等等;有的聚酮是花色素的组成部分,有的可以用作免疫抑制剂,而由一些真菌和一些细菌产生的聚酮物质还与其产生孢子的特性及其发育途径有关.
- 胡志浩邓子新
- 关键词：聚酮生物合成脂肪酸基因
- 一个诱动接合性柯斯载体的构建及其应用
- 1998年
- 用pHZ132在大肠杆菌中构建基因文库,并用特异的探针进行菌落杂交获得了有意义的DNA片段,可将其衍生质粒转化到携带接合性大肠杆菌质粒如RP4的细胞中.通过与萌发后的链霉菌孢子进行两亲本杂交,或将携带pHZ132的大肠杆菌细胞和携带RP4衍生质粒pPK2073的大肠杆菌细胞与萌发后的链霉菌孢子混合起来进行三亲本杂交,在接合性质粒RP4转移功能的诱动下,携带插入片段的PHZ132衍生质粒即可转移到萌发后的链霉菌孢子中去.已尝试用此载体成功地构建了一个重要的抗真菌抗生素产生菌——链霉菌FR-008的基因文库,并通过接合转移的方法将pHZ132衍生质粒转移到FR-008及其限制性缺陷菌株DX600中,并进行了DNA片段的功能分析.
- 鲍锴胡志浩周秀芬周启邓子新
- 关键词：链霉菌基因文库
- 一个可介导链霉菌PKS基因向植物转化的杂合质粒的构建被引量：1
- 1996年
- 抗生素FR-008是由链霉菌FR-008所产生的一种七烯大环内酯类抗真菌抗生素。胡志浩等已克隆了长达约105kb的FR-008聚酮合酶(PKS)基因簇,对该基因簇中相邻于pabAB基因下游的3.8kbDNA进行序列分析,找到一个多功能聚酮合酶基因的起点,与数据库中蛋白质序列的比较分析揭示出一个尚未结束的大型开读框架的存在,它与抗细菌大环内酯类抗生素-红霉素生物合成所需的Ⅰ型聚酮合酶(PKS)基因中的乙酰转移酶(AT)和β-酮酰合酶(KS)的功能结构域显示出了高度的同源性,从分子水平上证实了FR-008抗生素由Ⅰ型PKS所合成。本实验将3.8kb中的编码聚酮合酶的部分开读框架通过基因工程的方法插入植物表达载体WRG2410上,从而成功构建了表达性质粒pHZ321。
- 陶美凤胡志浩周秀芬邓子新David A HopwoodTobias Kieser
- 关键词：农业生物工程链霉菌植物转化质粒
- 大豆基因工程根瘤菌田间结瘤和共生固氮效应被引量：2
- 1991年
- 利用三亲本接合转移方法,将快生型大豆根病菌B_(52)的基因文库克隆转移到受体菌慢生型大豆根瘤菌2210中,获得4株大豆基因工程根瘤菌(32.43、B—2—6、B—3—8)。田间接种试验表明:在大豆分枝期(V2),43和32结瘤效分别比不接种对照增加117.9％和100.4％;在初花期(R_1),32和B—2—6结瘤数分别比对照增加122.5％和91.6％,根瘤固氮酶活性增加233.3％和195.6％;在结荚始期(R3),B—2—6和32结瘤数比对照增加78.5％和70.1％,根瘤固氟酶活性43和B—2—6分别比对照增加53.4％和49.3％。产量统计表明:32、B—2—6和43比对照分别增产16.8％、14.3％和12.2％,亩增收大豆分别为28.2、24.1和20.6公斤。以上三个菌株均比受体菌株2210增产率高。
- 窦新田李晓鸣李新民周继松李树藩周俊初沈辉张忠明胡志浩彭文涛胡福荣陈华癸
- 关键词：大豆根瘤菌基因工程结瘤固氮
- 苏云金芽孢杆菌δ-内毒素cryIA(c)基因在大肠杆菌和变铅青链霉菌中表达被引量：4
- 1998年
- 利用合成的寡聚核苷酸片段，从质粒ｐＯＳ１０００中分离出具有适合克隆位点的苏云金芽孢杆菌（Ｂａｃｉｌｕｓｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ）δ内毒素ｃｒｙＩＡ（ｃ）全长基因。将该基因与大肠杆菌表达载体ｐＫＫ２２３３重组，并引入大肠杆菌ＪＭ１０９中，经ＩＰＴＧ诱导，获得了超量表达的ＣｒｙＩＡ（ｃ）蛋白。将ｃｒｙＩＡ（ｃ）全长基因插入链霉菌表达载体ｐＨＺ１２７２中，得到重组质粒ｐＨＺ１２５６，将该质粒引入变铅青链霉菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓｌｉｖｉｄａｎｓ）ＪＴ４６中，经硫链丝菌素诱导，通过Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔｉｎｇ测定表明，重组变铅青链霉菌ＪＴ４６（ｐＨＺ１２５６）已表达出相应的ＣｒｙＩＡ（ｃ）蛋白。杀虫试验表明，大肠杆菌和链霉菌所表达出的δ内毒素ＣｒｙＩＡ（ｃ）对小菜蛾均有毒杀作用，其致死率分别为９３％和５７％。
- 杨闰英胡志浩邓子新李季伦
- 关键词：链霉菌大肠杆菌苏云金芽胞杆菌内毒素
