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王焰玲: 作品数：17 被引量：101H指数：6; 供职机构：四川大学生命科学学院分子生物学与生物技术重点实验室更多>>; 发文基金：国家自然科学基金中国科学院科学基金更多>>; 相关领域：生物学农业科学轻工技术与工程更多>>

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环状芽孢杆菌C-2几丁酶基因在荧光假单胞菌中的表达被引量：2: 2002年; 将已克隆到的环状芽孢杆菌(Bacillus circulans)C-2的几丁酶基因chi1片段克隆到质粒载体pUXBF5中，得到重组质粒pUXCH1，该重组质粒在大肠杆菌中可以表达产生具有生物活性的几丁酶并分泌到胞外．将pUXCH1分别利用感受态法和三亲本杂交法转化荧光假单胞菌(Psendomonas fluorescens)，在含有卡拉霉素的金氏B平板上筛得转化子．但将转化子点种于几丁质平板上却不能产生水解圈，提取细胞内容物后用比色法也没有检测到有效的酶活性．该研究表明环状芽孢杆菌的几丁酶基因chi1已经被成功的整合到荧光假单胞菌的染色体上，但却没有表达或表达效率极低，这可能是由于荧光假单胞菌的表达系统不能正确有效的识别存在于该chi1几丁酶基因片段中的环状芽孢杆菌基因启动子而造成的．; 田刚王焰玲; 关键词：环状芽孢杆菌荧光假单胞菌基因表达重组质粒

Frankia基因文库的构建及与根瘤菌结瘤基因区同源克隆的筛选被引量：4: 1990年; 应用无色肽酶(Achromopeptidase)加溶菌酶系统破壁,提取分别来自色赤杨、细枝木麻黄和沙棘的3株代表性Frankia菌株的总DNA。以可在很多革兰氏阴性细菌中稳定复制和诱动转移的广谱寄主性质粒pLAFR1为载体,构建了其基因组文库。基于经EcoRI酶切后的Frankia总DNA中有与根瘤菌结瘤基因同源性的片段,以豌豆根瘤菌结瘤基因为探针,通过菌落原位杂交对文库进行了筛选,较强杂交克隆经斑点杂交复筛,初步得到了几个阳性克隆,为进一步研究Frankia的结瘤基因及有关共生固氮的其它基因奠定了基础。; 崔玉海秦敏王焰玲丁鉴马庆生; 关键词：FRANKIA 基因文库结瘤基因

抑制稻瘟病菌生长的几丁酶产生菌的分离和鉴定被引量：28: 1998年; 采用稻瘟病菌细胞壁富集方法分离到4株几丁质酶产生菌。它们都具有较高的几丁酶活性,且能在培养基上对稻瘟病菌的生长产生明显的抑制作用。经鉴定,确认它们均为革兰氏阴性杆菌,其中菌株DW2为单端极生单鞭毛,好氧,氧化酶反应阳性并能还原硝酸盐,属于假单胞菌属细菌(Pseudomonas spp.);菌株DW1、DW4为两端极生单鞭毛,微好氧,氧化酶反应阳性并能还原硝酸盐,属于弯曲杆菌属细菌(Campylobacter spp.);而菌株DW3的菌落为橙黄色,氧化酶反应为阳性,不还原硝酸盐,菌体单个或成链,无鞭毛,在几丁质半固体培养基上能滑动,属于噬胞菌属细菌(Cytophaga spp.)。; 王焰玲秦敏周青张义正; 关键词：几丁酶抑菌作用稻瘟病菌产生菌

酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)基因启动子的分离和鉴定被引量：6: 1995年; 用启动子探针型载体pFR109从酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)总DNA中克隆到多个启动子片段,它们在大肠杆菌中均能启动β-半乳糖苷酶基因的表达。对其中Y8片段的进一步分析结果表明:该片段不仅来自酿酒酵母基因组,而且是以多拷贝的形式存在。当Y8片段再次转入供体酵母时,它仍能启动β-半乳糖苷酶基因表达,但经次克隆去掉Y8片段5′端部分顺序后,它就失去了启动子的功能。; 赵玮张义正王焰玲; 关键词：酵母酿酒酵母基因启动子

木麻黄根瘤内生菌Frakia的分离和鉴定被引量：3: 1989年; 用改进后的根瘤切片法,从海滨木麻黄(Allocasuarina Littoralis)根瘤中分离到内生菌Frankia纯培养。这种分离方法具有操作简便,成功率高,速度快等优点。分离菌株具有内生菌典型的形态结构特征,其菌丝粗细不一,分枝分隔;孢囊形状多样,多为棒状;在无氮培养条件下,形成大量的顶囊,其直径可达4.8微米;纯培养固氮活性为419.58nmolC_2H_4/毫克菌体·小时。回接试验结果证明,分离菌株具有很强的侵染能力,接种八天后即可结瘤,37天后结瘤率达100％。平均每株结瘤18.8个,回接瘤固氮活性为30413nmolC_2H_4/克鲜瘤重·小时。; 秦敏王焰玲马庆生; 关键词：木麻黄根瘤内生菌

环状芽孢杆菌几丁质酶基因序列分析、表达和生物活性测定被引量：14: 2002年; Sequence analysis of the chitinase gene cht1 of Bacillus circulans showed that it contained 2151 nucleotides,which codes the precursor of chitinase CHT1 with 717 amino acid residues.The nucleotide and deduced amino acid sequences of cht1 showed 81% and 95% homology with those of ChiA of B.circulans WL-12,respectively.The cht1 gene was cloned into the Escherichia coli-Bacillus subtilis shuttle vector pSUGV4 and two recombinant plasmids, named pUSCH1 and pUSCH2 which contained 2.9kb and 4.0 kb insert respectively,were obtained.The recombinant plasmids were transformed into B.subtilis DB104 and WB600.Chitinase activity was detected both in transformed E.coli and B.subtilis.The DB104/pUSCH1 strain was found to be effective in the bio-controlling the infection of Magnaporthe grisea under greenhouse condition,which showed 71.67% decrease in rice disease incidence.; 王焰玲王海燕秦敏张义正; 关键词：环状芽孢杆菌几丁质酶基因序列分析稻瘟病菌真菌病害

RAPD鉴别稻瘟病菌生理小种的研究被引量：14: 1998年; 】采用１６种不同的引物对３株典型的稻瘟病菌（Ｍａｇｎａｐｏｒｔｈｅｇｒｉｓｅａ）菌株ＺＡ１，ＺＧ１和Ｍ１进行了ＲＡＰＤ分析。结果表明，从杂草马塘与水稻分离的菌株，基因组的差异很大，很容易通过ＲＡＰＤ鉴别这两种不同来源的稻瘟病菌菌株。自水稻分离的菌株，ＲＡＰＤ扩增产物相似性较高，但仍然能够检测出不同生理小种ＤＮＡ带型的差异，证明ＲＡＰＤ可用于稻瘟病菌生理小种的快速鉴别。; 秦敏何忠全何明何明何明; 关键词：稻瘟病菌 RAPD 小种

弗兰克氏菌固氮基因片段的分离及其比较被引量：6: 1990年; 弗兰克氏菌和放线菌结瘤植物(actinorhizal plants)之间的共生与根瘤菌和豆科植物间的共生有很多相同点:如侵染过程、瘤结构形态和固氮效率等;但同时它又比根瘤菌有更广的寄主植物范围(涉及8科至少23属200多个种),远远超出了根瘤菌寄主范围的限制,因此被认为是研究有关共生基因特别是与寄主专一性有关的基因的很好的材料。; 崔玉海王焰玲秦敏曾王勇丁鉴柏学亮马庆生; 关键词：弗兰克氏菌固氮基因

环状芽孢杆菌C-2几丁酶基因的克隆被引量：23: 1998年; 环状芽孢杆菌（Ｂａｃｉｌｕｓｃｉｒｃｕｌａｎｓ）Ｃ２总ＤＮＡ经ＰｓｔＩ部分酶切后分离２～１０ｋｂ的片段，插入质粒ｐＵＣ１９的ＰｓｔＩ位点，转化大肠杆菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａｃｏｌｉ），利用几丁质平板从约８０００个重组子中筛选到一个几丁酶基因阳性克隆（命名为ｐＣＨＴ１）。用１２种限制酶对重组质粒进行的酶切分析表明，重组质粒中的插入片段长３０ｋｂ，其中各有一个ＫｐｎＩ，ＳａｃＩ和ＳｓｐＩ位点。把该克隆片段反向插入ｐＵＣ１９的ＰｓｔＩ位点所得到的重组子同样具有几丁酶基因表达活性，说明此片段含有一个完整的几丁酶基因，其自身的启动子能被大肠杆菌转录系统所识别。Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交证实了该片段来自于Ｂ．ｃｉｒｃｕｌａｎｓＣ２基因组，且以单拷贝形式存在，它不能与来自于其它７株几丁酶产生菌的总ＤＮＡ杂交。; 郑洪武王焰玲张义正; 关键词：环状芽孢杆菌几丁酶基因克隆克隆

快速提取稻瘟病菌总DNA新方法的建立被引量：1: 2000年; 为了快速、简便和经济地获得稻瘟病菌的总DNA ,以用于分子生物学研究 ,我们建立了一种制备其总DAN的新方法———快速冻融法 .该方法具有以下优点 :(1)不需要特殊的试剂和仪器 ,所有提取过程均在EP管中进行 ;(2 )提取速度快 ,可在一天内完成多个样品总DNA的制备 ;(3)每克湿菌体可制备 2 0～ 30 μg总DNA ,其纯度足以满足稻瘟病菌分子生物学的研究 .; 秦敏王海燕王焰玲张义正; 关键词：稻瘟病菌总DNA提取

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