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王希: 作品数：23 被引量：38H指数：4; 供职机构：第四军医大学唐都医院更多>>; 发文基金：国家自然科学基金陕西省自然科学基金陕西省重大科技创新专项计划项目更多>>; 相关领域：医药卫生生物学文化科学更多>>

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八年制医学生实验诊断学教学改革与实践被引量：9: 2016年; 八年制医学生基础扎实、思维活跃,实验诊断学教学应与五年制有所区别,需进行一系列教学改革。采用以器官系统为主线、临床授课以病例为中心、PBL和双语教学为主导的教学模式,辅助临床参观、网络课程、学科专业网站和专题讲座。通过教学改革和实践,增强学生的专业学习兴趣,成绩明显提高,同时也提高了学生的临床思维能力和对疾病诊断的综合分析判断能力。八年制实验诊断学改革取得明显成效,为进一步的实验诊断学教学改革提供了实践经验。; 韦三华董轲沈建军林芳王希张利朝武憙张惠中; 关键词：实验诊断学教学改革 PBL教学教学实践

诱骗寡核苷酸下调MKN-45细胞OP18基因表达及对细胞增殖的影响: 2007年; 目的:探讨转录因子E2F哑铃形诱骗寡核苷酸(Decoy ODNs)对MKN-45细胞中op18基因转录调控的影响及对细胞增殖的抑制作用.方法:设计合成针对op18启动子上E2F的结合位点序列的哑铃形Decoy ODNs,然后将合成的序列进行退火、连接,使其形成哑铃形的结构,再应用阳离子脂质体LipofectamineTM2000将哑铃形Decoy ODNs转染MKN-45细胞中.TRIzol法提取细胞总RNA,用RT-PCR方法检测细胞中op18 mRNA表达水平的变化.通过MTT实验监测细胞的生长增殖状况并绘制生长曲线,最后用TUNEL法观察细胞的凋亡的情况.结果:哑铃形Decoy ODNs被成功转染MKN-45细胞,并成功提取了细胞总RNA.RT-PCR检测发现哑铃形Decoy ODNs转染后的MKN-45细胞中op18 mRNA表达水平明显低于空白对照组,MTT实验所作的生长曲线显示转染细胞增殖速度与空白对照组相比较明显减慢,TUNEL凋亡染色可见凋亡细胞.结论:哑铃形Decoy ODNs能特异性抑制E2F转录因子对op18基因的转录调控,进而抑制op18基因表达及MKN-45细胞增殖.; 林芳王锐高萍刘丽王希张惠中; 关键词：圈套寡核苷酸细胞增殖基因疗法

Trop2病毒样颗粒的制备及纯化研究被引量：1: 2016年; 目的获得Trop2为靶点的病毒样颗粒(VLPs),为进一步体内诱导实验和疫苗研究提供依据。方法利用分子克隆技术构建Trop2真核表达载体pCAGGs/Trop2和杆状病毒表达载体pFastbac1/Trop2,以pCAGGs/Trop2表达载体转化Hela细胞,用免疫细胞化学方法确定Trop2蛋白表达并锚定于胞膜上;以pFastbac1/Trop2转化大肠杆菌E.coliDH10bac菌株获得重组杆粒Trop2Bacmid,转染Tn5昆虫细胞获得重组病毒Trop2rBV,与本室保存的Gag rBV共感染昆虫细胞得到重组VLPs,透析浓缩后经蔗糖密度梯度离心纯化、蛋白免疫印迹(WB)鉴定,电镜观察病毒形态。结果构建成功的重组杆粒Trop2Bacmid转染Tn5昆虫细胞获得重组病毒Trop2rBV,与Gag rBV共感染昆虫细胞获得重组Trop2VLPs。结论成功制备了Trop2VLPs,为其后续诱导体液和细胞免疫应答研究奠定了基础。; 王琳王希董轲张惠中; 关键词：肿瘤疫苗病毒样颗粒

Her2/ECD-sf162/TM嵌合VLPs的制备及抗肿瘤免疫效果研究被引量：1: 2016年; 目的:成功制备Her2胞外段基因与猴免疫缺陷病毒(simian immunodeficiency virus,SIV)包膜蛋白sf162跨膜区基因融合的Her2/ECD-sf162/TM病毒样颗粒(VLPs),并在小鼠体内进行初步的抗肿瘤免疫效果研究。方法:利用前期构建好的Her2/neu与SIV-gag嵌合的表达载体Her2/ECD-sf162/TM,制备Her2/neu与SIV-gag嵌合型VLPs疫苗,并用该疫苗免疫小鼠。结果:VLPs可成功激发小鼠体内免疫应答反应,产生血清抗VLPs的抗体;VLP免疫后接种Her2/neu+小鼠乳腺癌细胞EMT6,结果显示该疫苗可有效抑制肿瘤生长;同时,VLP对荷瘤鼠治疗结果也显示,该疫苗可在一定程度上抑制肿瘤生长。结论:VLPs疫苗具有良好的免疫原性,且免疫后对肿瘤攻击具有保护作用。; 龙敏董柯王希林芳刘冲张惠中; 关键词：HER2/NEU 肿瘤疫苗 VLPS 免疫

肠道病毒EV71新型VLPs疫苗的制备及鉴定被引量：1: 2015年; 目的制备肠道病毒71型(EV71)的新型病毒样颗粒(VLPs)疫苗,为手足口病防治奠定基础。方法应用分子克隆技术构建外壳蛋白VP1融合基因cVP1,免疫细胞化学及Western Blot测定该融合基因在HeLa细胞表达情况;将cVP1克隆于杆状病毒表达载体pFastbac1,应用昆虫细胞TN5制备重组杆状病毒cVP1 rBV,再将此重组病毒与本室保存的gag rBV以不同MOI比例共感染昆虫细胞TN5,得到含有VP1的重组嵌合病毒样颗粒cVP1 VLPs,最后以Westem Blot及电镜进行鉴定。结果免疫细胞化学及Western Blot结果显示构建的融合基因cVP1可在真核细胞内表达,并成功制备成cVP1 rBV,该重组杆状病毒和gag rBV共感染昆虫细胞制备的VLPs结构完整。结论成功制备了EV71的新型VLPs疫苗,为后续研究打下了基础。; 董轲王希龙敏王琳张惠中; 关键词：手足口病肠道病毒71型病毒样颗粒

抗人AEG-1单克隆抗体可变区基因克隆及序列分析: 2014年; AEG-1基因位于人染色体8q22,编码582个氨基酸,参与多种信号转导途径并与多种恶性肿瘤的发生、发展及生物学表型密切相关。为更好地探讨AEG-1生物学功能,以纯化的p GSTag-AEG-1蛋白免疫BALB/c小鼠,应用细胞融合技术并经筛选及鉴定,获得了分泌抗人AEG-1单克隆抗体的杂交瘤细胞株1 E3;Western blot及免疫组化证实该细胞株分泌的单克隆抗体能与肿瘤细胞中AEG-1蛋白特异性结合;RT-PCR方法从1E3细胞中克隆出抗AEG-1抗体的VH和VL基因片段,通过测序分析、碱基和蛋白序列的比对确认该株抗体为鼠源性Ig G的轻、重链可变区基因。进一步运用Kabat System在线分析系统对VH和VL基因进行结构分析,确证FWRs和CDRs的结构完整,VH编码117个氨基酸;VL编码119个氨基酸,属于轻链κV家族。实验结果为进一步研究AEG-1与恶性肿瘤发生、发展的关系及在其临床诊断中的应用奠定了基础。; 龙敏董柯王希陈曦刘冲刘丽张惠中; 关键词：AEG-1 可变区基因克隆

稳定表达丙型肝炎病毒HLA-A2限制性多表位基因C1R-AAD细胞克隆的建立: 2010年; 目的建立稳定表达丙型肝炎病毒(HCV)HLA-A2限制性多表位基因的C1R-AAD细胞克隆。方法合成人泛素基因(Ub)和HCVHLA-A2限制性多表位基因(Mep),分别克隆入原核表达质粒pRSET-A,构建多表位抗原基因的原核表达质粒pRSET-Ub-Mep。用BamHⅠ和HindⅢ双酶切质粒pRSET-Ub-Mep,得到复合多表位基因Ub-Mep,亚克隆入真核表达载体pcD-NA3.1(-),构建重组真核表达质粒pcDNA3.1(-)-Ub-Mep,转染至C1R-AAD细胞,G418压力筛选后,通过有限稀释法获得稳定表达Ub-Mep融合蛋白的C1R-AAD细胞克隆,采用RT-PCR法检测稳定转染细胞中Ub-Mep基因mRNA的转录;间接免疫荧光法和Westernblot法检测Ub-Mep蛋白在稳定转染细胞中的表达。结果重组真核表达质粒pcDNA3.1(-)-Ub-Mep经酶切鉴定证明构建正确;在稳定转染的C1R-AAD细胞中可检测到Ub-MepmRNA和蛋白水平的表达。结论已建立了稳定表达HCVHLA-A2限制性多表位抗原的C1R-AAD细胞克隆,为进一步研究HLA-A2限制性多表位基因诱导的细胞免疫应答建立了靶细胞。; 韦三华张海董轲林芳王希李斌沈建军张利军张惠中; 关键词：丙型肝炎病毒表位真核细胞

Her2/ECD-sf162/TM融合杆状病毒表达及鉴定被引量：2: 2015年; 目的:获得融合表达的Her2/ECD-sf162/TM杆状病毒,为后续基于SIV Gag蛋白的Her2病毒样颗粒疫苗的制备奠定实验基础。方法:将Her2胞外段基因与猴免疫缺陷病毒(simian immunodeficiency virus,SIV)包膜蛋白sf162跨膜区基因融合的Her2/ECD-sf162/TM p Fast Bac重组表达载体,转座大肠杆菌E.coli DH10Bac菌株,获得重组杆粒,在昆虫细胞中表达获得重组杆状病毒,Western blot方法对该病毒进行鉴定。结果:构建的Her2/ECD-sf162/TM杆状病毒表达载体经PCR鉴定正确,转染昆虫细胞后获得了重组杆状病毒,该融合杆状病毒蛋白可与抗Her2抗体发生免疫反应。结论:成功构建的Her2/ECD-sf162/TM杆状病毒可用于Her2病毒样颗粒疫苗的制备。; 李谨革龙敏王希董柯林芳刘冲张惠中; 关键词：HER2/NEU 胞外区 SIV 杆状病毒

医学实验诊断学教学方法探讨: 2014年; 随着现代临床检验技术的发展,实验诊断学教学成为临床医学专业学生本科教育重要组成部分,单纯应用传统教学方法无法适应现代教育的要求。文中针对实验诊断学的教学内容、教学方法,借鉴国内外的教学改革经验,进行了一些探索。; 王希张惠中董轲林芳张利潮; 关键词：教学方法

MACC1基因siRNA对肺癌SBC-5细胞增殖和迁移的影响被引量：10: 2011年; 目的:探讨MACC1(metastasis-associated in colon cancer l)基因特异性siRNA(small interfering RNA)对肺癌细胞系SBC-5体外增殖和迁移的影响。方法:化学合成MACC1基因特异性siRNA,阳离子脂质体LipofectamineTM 2000转染肺癌细胞系SBC-5细胞,RT-PCR和Western blot方法检测转染后SBC-5细胞中MACC1基因和蛋白的表达情况;MTT法检测细胞的生长增殖状况;划痕试验观察细胞迁移能力的改变。结果:MACC1基因特异性siRNA转染细胞后,SBC-5细胞MACC1的mRNA和蛋白表达水平明显降低,MTT试验和划痕试验观察到转染MACC1-siRNA的SBC-5细胞增殖、迁移能力明显减弱。结论:MACC1基因特异性siRNA可以明显抑制肺癌SBC-5细胞增殖和迁移,MACC1可能成为肺癌治疗的新靶点。; 杨淑慧龙敏王希林芳张惠中; 关键词：SIRNA 肺癌基因治疗

王希

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