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牛病毒性腹泻病毒E2蛋白单克隆抗体的制备及初步鉴定被引量：3: 2013年; 为制备牛病毒性腹泻病毒(BVDV)糖蛋白E2单克隆抗体(MAb),利用原核表达并且纯化的重组糖蛋白E2(rE2)免疫BALB/c小鼠,取免疫后小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0融合。采用以BVDV为检测抗原的间接ELISA筛选阳性细胞克隆,经3次克隆纯化后获得2株稳定分泌抗E2特异性MAb的杂交瘤细胞株,分别命名为4E3与1G11。用4E3与1G11杂交瘤细胞株接种BALB/c小鼠制备腹水,采用rE2及BVDV包被的ELISA测得的效价分别是6.21×106和6.83×105及6.83×105和7.5×104。间接ELISA、Western blot、IFA试验表明两株杂交瘤细胞所分泌的MAb具有良好的反应性和特异性。经抗体亚类鉴定4E3与1G11均为IgM/κ。特异性试验表明4E3与1G11这2株MAb均不与牛传染性鼻气管炎病毒、牛副流感病毒3型、牛腺病毒3型反应;其中4E3不与猪瘟病毒反应,而1G11则可与猪瘟病毒发生交叉反应,这种反应特性可试用于BVDV与猪瘟病毒的鉴别诊断。所制备的4E3与1G11 MAb可以用于BVDV抗原的检测,为建立检测BVDV E2蛋白血清抗体的ELISA奠定了基础。; 王姝朱远茂蔡红马磊史鸿飞吕闯董秀梅高欲燃薛飞; 关键词：牛病毒性腹泻病毒 E2 单克隆抗体 IGM

羽扇豆籽蛋白提取及其抗氧化肽的研制: 随着人们生活水平的日益提高及对食品的营养特性及安全性的要求越来越高，来源于天然植物的优质蛋白及其水解抗氧化肽越来越受到人们的关注。羽扇豆蛋白作为一种新型蛋白资源，在食品中具有很高的开发利用价值。目前关于羽扇豆蛋白的研究鲜...; 王姝; 关键词：抗氧化肽

牛呼吸道合胞体病毒核蛋白的表达及其单克隆抗体的制备被引量：4: 2012年; 利用牛呼吸道合胞体病毒(BRSV)接种牛肺细胞(BL),提取病毒RNA。通过RT-PCR扩增BRSV的核蛋白基因,然后定向克隆到原核表达载体pET30a,获得重组表达质粒pET30a-N。将重组质粒转化表达菌BL21(DE3),经增菌培养和IPTG诱导以及SDS-PAGE和Western blot分析,成功表达出了核蛋白(N),其分子量约为49kDa。为制备BRSV核蛋白的单克隆抗体,用纯化的重组核蛋白免疫BALB/c小鼠,取免疫鼠脾细胞与SP2/0细胞融合。采用以BRSV为检测抗原的间接ELISA筛选阳性细胞克隆,经3次克隆纯化后获得2株稳定分泌抗N特异性MAb的杂交瘤细胞株,分别命名为2D12与4B10。用2D12与4B10杂交瘤细胞株接种BALB/c小鼠制备腹水,采用rN及BRSV包被的ELISA测得的效价分别是1×105和1×106及1×102和1×103。间接ELISA、Western blot、IFA试验表明两株杂交瘤细胞所分泌的MAb具有良好的反应性和特异性。经抗体亚类鉴定D12与4B10均为IgG1/κ。特异性试验表明单抗2D12与4B10均不与牛副流感病毒3型和牛病毒性腹泻病毒反应。所制备的D12与4B10可用于建立检测BRSV病原及抗体的诊断方法。; 马磊朱远茂蔡红王姝史鸿飞吕闯董秀梅高欲燃薛飞

牛病毒性腹泻病毒E0蛋白的表达与多克隆抗体制备被引量：4: 2014年; 为了制备BVDV的E0蛋白兔源多克隆抗体,试验采用大肠杆菌对E0蛋白进行了表达,根据已发表的BVDV的VEDEVAC株的全基因组序列设计1对扩增E0的引物,经RT-PCR扩增出长约680 bp的E0基因片段,然后将目的基因克隆到pET-30a载体上,经酶切鉴定获得阳性重组质粒后进行测序,再将测序正确的阳性重组质粒转化BL21表达菌,经扩大培养及IPTG诱导后获得以包涵体形式存在的重组E0蛋白,经亲和层析法纯化后进行Western-blot检测,同时以纯化的E0蛋白免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体,并对E0多克隆抗体进行了中和试验和免疫荧光检测。结果表明:E0蛋白具有良好的反应性;E0多克隆抗体的病毒中和试验测定其中和抗体效价达到1∶128,具有良好的反应性和特异性。说明制备的重组E0蛋白多克隆抗体可以用于BVDV的检测。; 王雪枝朱远茂史鸿飞严昊蔡红王姝马磊薛飞; 关键词：牛病毒性腹泻病毒多克隆抗体 IFA

牛腺病毒3型六邻体蛋白的截短表达、单克隆抗体制备及初步应用: 2014年; 为制备牛腺病毒3型(BAV-3)的单克隆抗体(MAb),本研究采用原核表达系统截短表达了BAV-3六邻体蛋白(Hexon),并以纯化的重组蛋白免疫BALB/c小鼠,经细胞融合筛选出14株杂交瘤细胞株。Western blot与间接免疫荧光试验表明14株MAbs均具有良好的反应性。特异性试验表明这些MAbs与牛副流感病毒3型、牛病毒性腹泻病毒及牛传染性鼻气管炎病毒无交叉反应。免疫组化试验表明其中一株1F8亲和力最强,可以用于检测BAV-3。本研究为进一步鉴定BAV-3抗原表位及研发相应的诊断试剂奠定了基础。; 严昊朱远茂史鸿飞王雪枝蔡红王姝马磊薛飞; 关键词：单克隆抗体特异性

牛病毒性腹泻病毒E2蛋白单克隆抗体的制备及IPMA方法的建立与初步应用: 牛病毒性腹泻(Bovine viral diarrhea，BVD)是由牛病毒性腹泻病毒(Bovine viral diarrheavirus，BVDV)引起的，可引起发热、黏膜糜烂溃疡、白细胞减少、腹泻、咳嗽以及怀孕母牛...; 王姝; 关键词：单克隆抗体; 文献传递

猫坏死性角膜炎的穿透性角膜移植术治疗病例分析: 2023年; 对病例采用猪小肠黏膜下层人工角膜材料进行穿透性角膜移植术治疗猫坏死性角膜炎。2岁雄性病猫,检查可见右眼角膜黑色斑块、外周角膜水肿、血管生成及眼周浆液样分泌物。经裂隙灯、眼压计、泪液试纸与荧光素钠检查诊断为猫坏死性角膜炎,病灶深度达到角膜后弹力层,即将发生穿孔。对该病猫采取全层角膜切除,用猪小肠黏膜下层做角膜材料进行移植术。分别在术后第2周、第8周、第24个月复诊,该猫角膜清晰,角膜生理功能正常。猪小肠黏膜下层成本低廉,方便手术操作,是修复大面积全层缺损角膜疾病的新型有效方法,对兽医临床中高危角膜疾病手术具有重要的借鉴与参考价值。; 邵冰郭辰李艳飞王姝张佩魏成威; 关键词：穿透性角膜移植猪小肠黏膜下层

牛副流感病毒3型TaqMan实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立及应用被引量：14: 2014年; 根据牛副流感病毒3型(bovine parainfluenza virus type 3,BPIV3)膜蛋白M基因设计引物及探针,以体外转录法制备的cDNA标准品为模板,建立了TaqMan实时荧光定量RT-PCR方法,对其特异性、敏感性、重复性进行了测定,并对人工感染BPIV3的牛群临床样本进行了检测。结果显示,建立的TaqMan实时荧光定量RT-PCR的最低检测限为17.6copies/μL,同时进行批内、批间5次重复性试验,变异系数均小于2.5%。应用建立的方法检测牛传染性鼻气管炎病毒、牛腺病毒3型、牛呼吸道合胞体病毒、牛病毒性腹泻-黏膜病病毒1型,结果均为阴性,说明建立的方法特异性较强。用建立的方法检测人工感染BPIV3的犊牛鼻拭子样本,检测结果与样本TCID50的测定结果相符合,但比其更敏感。结果表明,本试验中建立的TaqMan实时荧光定量RT-PCR可以作为BPIV3早期诊断及定量分析的有效技术手段。; 董秀梅朱远茂蔡虹王姝吕闯马磊薛飞; 关键词：实时荧光定量RT-PCR TAQMAN探针

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王姝